科内讲课-脑脊液常规检验规范-ppt课件.ppt

1、玉林市红十字会医院检验科临检组玉林市红十字会医院检验科临检组2016年年7月月20日日1ppt课件 2ppt课件脑脊液标本的采集与处理脑脊液标本的采集与处理1.脑脊液主要由临床医师采集，一般行腰椎穿剌，必要时从脑脊液主要由临床医师采集，一般行腰椎穿剌，必要时从小脑延髓池或侧脑室穿剌采集。小脑延髓池或侧脑室穿剌采集。将脑脊液分别收集于将脑脊液分别收集于3个无个无菌试管中，每管菌试管中，每管l2ml： 第一管做化学或免疫学检査第一管做化学或免疫学检査 第二管做病原微生物学检査第二管做病原微生物学检査 第三管做理学和显微镜检査。第三管做理学和显微镜检査。3ppt课件 2.标本采集后无特殊处理要求，应

2、立即送标本采集后无特殊处理要求，应立即送检，检，不超过不超过1小时小时。久置可致。久置可致细胞破坏细胞破坏，影，影响细胞计数及分类检査，响细胞计数及分类检査，葡萄糖分解葡萄糖分解使含使含量降低，以及病原菌破坏或溶解。病原微量降低，以及病原菌破坏或溶解。病原微生物检验标本须室温条件下运送，以免冷生物检验标本须室温条件下运送，以免冷藏致某些微生物死亡。藏致某些微生物死亡。脑脊液标本的采集与处理脑脊液标本的采集与处理4ppt课件 3.细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本本时，可用时，可用EDTA盐抗凝（血常规管）。盐抗凝（血常规管）。脑脊液标本的采集与处理脑脊液

3、标本的采集与处理5ppt课件检验项目检验项目一般形状检查一般形状检查化学检查化学检查有形成分及病原微生物检查有形成分及病原微生物检查免疫学检查免疫学检查6ppt课件一般形状检查一般形状检查颜色颜色正常脑脊液颜色为无色透明，病理情况下可有不同的改变：正常脑脊液颜色为无色透明，病理情况下可有不同的改变：1.红色红色：穿刺损伤出血，蛛网膜下腔出血，脑室出血。：穿刺损伤出血，蛛网膜下腔出血，脑室出血。2.黄色黄色：颅内陈旧性出血。：颅内陈旧性出血。3.米汤样米汤样：为白细胞增多，见于化脓性脑膜炎：为白细胞增多，见于化脓性脑膜炎4.绿色绿色：可见于铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌：可见于铜绿假单胞

4、菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌引起的脑膜炎。引起的脑膜炎。5.褐色或黑色褐色或黑色黑色黑色可见于侵犯脑膜的可见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素瘤中枢神经系统黑色素瘤；褐色褐色可见于可见于脑出血的康复期脑出血的康复期。7ppt课件透明度透明度welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience1.正常为清澈透明正常为清澈透明；病理情况下可有不同改变的混浊；病理情况下可有不同改变的混浊脑脊液中细胞数大于脑脊液中细胞数大于300106/L或含大量细菌、真菌时或含大量细菌、真菌时呈不同程度混浊。

5、呈不同程度混浊。2.结核性脑膜炎结核性脑膜炎时呈时呈毛玻璃样浑浊毛玻璃样浑浊；3.化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎时呈时呈脓性浑浊脓性浑浊；4.正常脑脊液可因穿刺过程中带入红细胞而呈轻度浑浊。正常脑脊液可因穿刺过程中带入红细胞而呈轻度浑浊。8ppt课件化学检验化学检验Pandya试验：试验：脑脊液中球蛋白（脑脊液中球蛋白（glubin，Glb）与苯酚结合，）与苯酚结合，可形成可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀，不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀，即潘即潘（Pandy)试验阳性试验阳性蛋白质定性试验蛋白质定性试验阴性：清澈透明，不显雾状。阴性：清澈透明，不显雾状。阳性：阳性：极弱阳性微呈白

6、雾状，在黑色背景下，才能看到。极弱阳性微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。1+：为灰白色云雾状；为灰白色云雾状；2+：为白色浑为白色浑浊；浊；3+：为白色浓絮状沉淀；为白色浓絮状沉淀；4+：为白色凝块为白色凝块结果判定结果判定9ppt课件Pandya试验试验临床意义临床意义正常时多为阴性正常时多为阴性。有。有脑组织脑组织和和脑膜感脑膜感染性染性疾患（如化脓性脑膜炎、结核性脑膜疾患（如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、中炎、中枢神经系统梅毒、脊髓灰白质炎和枢神经系统梅毒、脊髓灰白质炎和流行性脑炎等）、流行性脑炎等）、蛛网膜下腔出血蛛网膜下腔出血及蛛网及蛛网膜下腔膜下腔梗阻梗阻等时常呈等时常呈阳性反阳性

7、反应应。脑出血时。脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑脊脊液中，亦可呈阳性反应。液中，亦可呈阳性反应。10ppt课件有形成分分析有形成分分析 一、红细胞计数：一、红细胞计数： 1、澄淸标本：澄淸标本：可混匀脑脊液后用滴管直接滴可混匀脑脊液后用滴管直接滴入血细胞计数池，静置入血细胞计数池，静置1分钟，在高倍镜下分钟，在高倍镜下.计数计数5个大方格内红细胞数，乘以个大方格内红细胞数，乘以2即为每微升红细胞即为每微升红细胞数。数。如用升表示，则再乘以如用升表示，则再乘以106。11ppt课件一、红细胞计数：一、红细胞计数：2、浑浊或血性标本：、浑浊或血性标本：

8、取混匀的脑脊液取混匀的脑脊液20l,加入红加入红细胞稀释液细胞稀释液0.38ml（稀释（稀释20倍），混匀后充池，静倍），混匀后充池，静置下沉置下沉23分钟，计数中央大方格四角和正中中方分钟，计数中央大方格四角和正中中方格内红细胞数（格内红细胞数（5个中方格），乘以个中方格），乘以1000即为毎即为毎升脑脊液的细胞总数。对压线细胞按升脑脊液的细胞总数。对压线细胞按“数上不数数上不数下、数左不数右下、数左不数右”的原则。的原则。12ppt课件 二、白细胞计数二、白细胞计数1、非血性标本非血性标本：小试管内加入冰酸酸小试管内加入冰酸酸12滴，转滴，转动试管，使内壁沾有冰酸酸后倾去，然后滴加混动试管

9、，使内壁沾有冰酸酸后倾去，然后滴加混匀脑脊液匀脑脊液34滴，待数分钟红细胞溶解后，混匀滴，待数分钟红细胞溶解后，混匀充池，充池，按白细胞计数法计数。按白细胞计数法计数。13ppt课件 二、白细胞计数二、白细胞计数 2、混浊或血性标本：、混浊或血性标本：将混匀脑脊液用将混匀脑脊液用1%冰醋酸溶液按全血白细胞计数法稀释冰醋酸溶液按全血白细胞计数法稀释后进行计数。后进行计数。14ppt课件 二、白细胞计数二、白细胞计数校正校正 因穿刺出血而来的白细胞数，用下式公式进行校正。因穿刺出血而来的白细胞数，用下式公式进行校正。 脑脊液白细胞校正数脑脊液白细胞校正数=脑脊液白细胞计数值脑脊液白细胞计数值出血增

10、加出血增加的白细胞数的白细胞数 出血出血增加的白细胞数增加的白细胞数=外周血白细胞数脑脊液红细胞外周血白细胞数脑脊液红细胞数数/外周血红细胞数外周血红细胞数 总式15ppt课件 三、细胞分类三、细胞分类 1、直接分类法、直接分类法 白细胞计数后，将低倍镜换到高倍镜，直接在白细胞计数后，将低倍镜换到高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核形态分别计数单个核细胞高倍镜下根据细胞核形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞）和多个核细胞，（包括淋巴细胞、单核细胞）和多个核细胞，应数应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细个白细胞，并以百分率表示。若白细胞数少于胞数少于100个，应直接写出单个核、多个核

11、个，应直接写出单个核、多个核细胞的具体数字，用分数表示。如：白细胞细胞的具体数字，用分数表示。如：白细胞50个中淋巴细胞有个中淋巴细胞有30个，报告：淋巴细胞个，报告：淋巴细胞30/50。16ppt课件 三、细胞分类三、细胞分类 2、染色分类法如直接分类法不易区分细胞或临床需要分类结果时，可如直接分类法不易区分细胞或临床需要分类结果时，可将脑脊液离心沉淀将脑脊液离心沉淀15001500转转5 5分钟分钟，取沉淀物，取沉淀物2 2滴，滴，加正常加正常血清血清1 1滴滴，推片制成薄膜，置室温或，推片制成薄膜，置室温或3737温箱内待干，温箱内待干，行行瑞氏染色（经验：染液瑞氏染色（经验：染液3 3

12、滴滴+ +缓冲液缓冲液7 7滴，染滴，染3 3分钟分钟。否。否则染黑不易辩认细胞类型）。用高倍镜或油镜分类。如则染黑不易辩认细胞类型）。用高倍镜或油镜分类。如见有不能分类的细胞，应请有经验技术人员复核，并另见有不能分类的细胞，应请有经验技术人员复核，并另行描述报告，如脑膜白血病细胞或肿瘤细胞、内皮细胞行描述报告，如脑膜白血病细胞或肿瘤细胞、内皮细胞等。等。如果用玻片离心沉淀仪，则取如果用玻片离心沉淀仪，则取0.5ml0.5ml脑脊液制片。脑脊液制片。如果如果白细胞总数在白细胞总数在3030个以下，可不做分类计数。个以下，可不做分类计数。17ppt课件 四、仪器法细胞计数、分类四、仪器法细胞计数

13、、分类 仪器：血细胞分析仪仪器：血细胞分析仪 要求：要求： 标本无凝固物；标本无凝固物； 清洗仪器管道，直至细胞本底为清洗仪器管道，直至细胞本底为0。 最好使用体液细胞模式（专用通道）最好使用体液细胞模式（专用通道）检测标本。检测标本。18ppt课件细胞计数参考区间细胞计数参考区间 红细胞计数：红细胞计数：0106/L。 白细胞计数：白细胞计数： 成人（成人（08）106/L; 儿童（儿童（015）106/L； 新生儿（新生儿（030）106/L。19ppt课件细胞分类参考区间细胞分类参考区间成人：成人：淋巴细胞淋巴细胞40%80%单核细胞单核细胞15%45%，中性粒細胞中性粒細胞6%。新生儿

14、新生儿：淋巴细胞淋巴细胞5%35%单核细胞单核细胞50%90%中性粒細胞中性粒細胞8%。20ppt课件脑脊液常规检验注意事项脑脊液常规检验注意事项 1.计数应在标本计数应在标本采集后采集后1小时内完成小时内完成。如放置过久，。如放置过久，细胞会破坏细胞会破坏、沉淀或纤维蛋白礙集，导致计数不、沉淀或纤维蛋白礙集，导致计数不准确。准确。 2.细胞计数时，应注意细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞区别新型隐球菌与白细胞区别。前者不溶于醋酸，加优质墨汁后可见荚膜。前者不溶于醋酸，加优质墨汁后可见荚膜。 3.使用计数板后应立即淸洗，以免细胞或其他成使用计数板后应立即淸洗，以免细胞或其他成分黏附在计数板上

15、，影响使用。分黏附在计数板上，影响使用。21ppt课件脑脊液常规检验临床意义脑脊液常规检验临床意义 1、中枢神经系统病变时，脑脊液细胞数可增多，、中枢神经系统病变时，脑脊液细胞数可增多，增多程度及细胞种类与病变性质有关。增多程度及细胞种类与病变性质有关。 2、病毒性脑膜炎、结核性膜炎或真菌性脑膜炎、病毒性脑膜炎、结核性膜炎或真菌性脑膜炎时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主，早时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主，早期伴有中性粒细胞及单核细胞。期伴有中性粒细胞及单核细胞。 3、细菌感染时，如化脓性脑膜炎，细胞数显著增、细菌感染时，如化脓性脑膜炎，细胞数显著增加，早期以中性粒细胞为主。加，早期

16、以中性粒细胞为主。22ppt课件脑脊液常规检验临床意义脑脊液常规检验临床意义 4、脑寄生虫病时，可见较多嗜酸性粒细胞。、脑寄生虫病时，可见较多嗜酸性粒细胞。 5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数数红细胞、红细胞吞噬细胞及含铁血黄素细跑。红细胞、红细胞吞噬细胞及含铁血黄素细跑。 6、脑膜白血病和脑膜癌时，可见白血病细胞或、脑膜白血病和脑膜癌时，可见白血病细胞或癌癌细胞。细胞。23ppt课件墨汁染色墨汁染色 墨汁染色墨汁染色原理原理：在菌细胞周围存在黏多糖荚膜物，：在菌细胞周围存在黏多糖荚膜物，应用墨汁湿片法能证明荚膜的存在，新型隐球菌应用墨汁湿片法

17、能证明荚膜的存在，新型隐球菌的荚膜取代了墨汁中的胶状碳粒，呈现清楚无色的荚膜取代了墨汁中的胶状碳粒，呈现清楚无色透明的晕圈环绕着菌体透明的晕圈环绕着菌体24ppt课件25ppt课件新型隐球菌染色镜检染色镜检1、将标本将标本3000转离心转离心10分钟分钟，取取10l沉淀沉淀物放于载玻片上。物放于载玻片上。2、取取10l墨汁加于沉淀物上，再覆盖上盖墨汁加于沉淀物上，再覆盖上盖玻片，注意先将盖玻片一边接触墨汁而后玻片，注意先将盖玻片一边接触墨汁而后缓缓斜放下，使其不产生气泡。缓缓斜放下，使其不产生气泡。3、在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞，找到、在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞，找到后，转换高倍镜确认。后

18、，转换高倍镜确认。26ppt课件新型隐球菌染色镜检染色镜检4、结果报告结果报告(1)如果涂片在墨汁的黑背景下呈现清楚的晕圈，并如果涂片在墨汁的黑背景下呈现清楚的晕圈，并且在晕圈内可见菌细胞，报告且在晕圈内可见菌细胞，报告“墨汁染色阳性墨汁染色阳性”。(2)如果涂片在墨汁的黑背景下无清楚的晕圈，如果涂片在墨汁的黑背景下无清楚的晕圈，报告报告“墨汁染色阴性墨汁染色阴性”。27ppt课件新型隐球菌染色镜检注意事项 1、加的墨汁不要太多，以免加盖玻片时外溢造加的墨汁不要太多，以免加盖玻片时外溢造成污染。成污染。 2、脑脊液墨汁染色阳性则高度怀疑新型隐球菌。、脑脊液墨汁染色阳性则高度怀疑新型隐球菌。 3

19、、注意将隐球菌与白细胞进行仔细鉴别，、注意将隐球菌与白细胞进行仔细鉴别，隐球菌菌体中央有折光颗粒，而白细胞没有隐球菌菌体中央有折光颗粒，而白细胞没有。28ppt课件新型隐球菌染色镜检注意事项 4、因为墨汁染液不能高压灭菌，每次操作应进行因为墨汁染液不能高压灭菌，每次操作应进行阴性对照，以防墨汁污染造成假阳性。阴性对照，以防墨汁污染造成假阳性。 5、阳性标本要求送微生物室培养鉴定，同时请阳性标本要求送微生物室培养鉴定，同时请主管辨认复核主管辨认复核。29ppt课件 脑脊液常规检验分析后质量控制分析后质量控制： 1、危急值报告。、危急值报告。2、复查复核、审核签发。、复查复核、审核签发。3、保留标本。、保留标本。4、特殊交班。、特殊交班。30ppt课件31ppt课件