组织胚胎学绪论PPT(2008)-PPT课件.ppt

1、组组 织织 胚胚 胎胎 学学生命科学与生物工程学院生命科学与生物工程学院695225695225，1395784167913957841679 第一篇：组织学第一篇：组织学组织：上皮、结缔、肌肉、神经。组织：上皮、结缔、肌肉、神经。器管：循环、呼吸、消化、排泄、生殖、器管：循环、呼吸、消化、排泄、生殖、 内分泌、感觉。内分泌、感觉。 第二篇：胚胎学第二篇：胚胎学普通胚胎学。普通胚胎学。软体动物、甲壳动物、鱼类的发生。软体动物、甲壳动物、鱼类的发生。绪绪 论论1 组织学组织学 研究对象：细胞、组织与器官研究对象：细胞、组织与器官 研究内容：有机体的基本组织、构成组织研究内容：有机体的基本组织、构

2、成组织细胞的形态和构造；各种组织构成的器官的组细胞的形态和构造；各种组织构成的器官的组织形式和联系；细胞、组织与器官之间的相关织形式和联系；细胞、组织与器官之间的相关性及对环境变化的反应等。性及对环境变化的反应等。 定义：研究机体细微结构及其机能的科学。定义：研究机体细微结构及其机能的科学。一、基本内容一、基本内容细胞膜细胞膜细胞核细胞核细胞质细胞质卵细胞卵细胞2 2 胚胎学胚胎学 研究内容研究内容 狭义：胚胎发育。狭义：胚胎发育。 广义：胚前发育广义：胚前发育+ +胚胎发育胚胎发育+ +胚后发育。胚后发育。 定义定义 研究机体发生及发育规律的科学。研究机体发生及发育规律的科学。 胚前期：精卵

3、发生胚前期：精卵发生-受精作用受精作用胚胎期：受精作用胚胎期：受精作用-孵化、产出孵化、产出胚后期：孵化、产出胚后期：孵化、产出-衰老、死亡衰老、死亡3 3 组织胚胎学的分科组织胚胎学的分科按研究对象分按研究对象分 植物、动物、人体组织（胚胎）学。植物、动物、人体组织（胚胎）学。按研究方法分按研究方法分 比较组织学比较组织学 实验组织学实验组织学 病理组织学病理组织学 叙述胚胎学叙述胚胎学 比较胚胎学比较胚胎学 生态胚胎学生态胚胎学 化学胚胎学化学胚胎学 分子胚胎学分子胚胎学 免疫胚胎学免疫胚胎学 1 1 一般研究方法一般研究方法 活体观察活体观察 切片技术（普通光学显微技术）切片技术（普通光

4、学显微技术）2 2 特殊显微镜的应用特殊显微镜的应用 暗视野、相差显、荧光显微镜暗视野、相差显、荧光显微镜 电子显微镜、激光共聚焦显微镜电子显微镜、激光共聚焦显微镜3 3 其他新技术的应用其他新技术的应用二、组织学研究方法显微镜下直接观察显微镜下直接观察活体染色活体染色l血液注入、三胚层染色血液注入、三胚层染色细胞与组织培养细胞与组织培养l细胞系的培养细胞系的培养显微电影（摄影）显微电影（摄影）活体观察活体观察A A 取材与固定：切成取材与固定：切成3mm3mm3 3的小块，入固定剂中。的小块，入固定剂中。 使蛋白迅速被固定，防止组织自溶，尽量保持使蛋白迅速被固定，防止组织自溶，尽量保持 组织

5、结构，硬化组织。组织结构，硬化组织。B 脱水与包埋：乙醇梯度脱水、二甲苯透明、石脱水与包埋：乙醇梯度脱水、二甲苯透明、石 蜡渗透、包埋。蜡渗透、包埋。C 切片与染色：将组织块切成切片与染色：将组织块切成5-145-14微米的薄片，微米的薄片， 贴在载玻片上，展片、脱蜡、染色。贴在载玻片上，展片、脱蜡、染色。组织切片组织切片光学显微镜术光学显微镜术 ：苏木精为碱性染料，：苏木精为碱性染料，能将细胞核、粗面内质网和核蛋能将细胞核、粗面内质网和核蛋白体等嗜碱性结构染成蓝紫色。白体等嗜碱性结构染成蓝紫色。 ：伊红为酸性染料，伊红为酸性染料，细胞质、线粒体、胶原纤维等细胞质、线粒体、胶原纤维等嗜酸性结构

6、被染成红色。嗜酸性结构被染成红色。 ：对碱性和酸性染料都对碱性和酸性染料都缺乏亲和力。缺乏亲和力。 H-EH-E染色染色甲苯胺蓝染色甲苯胺蓝染色碱性染料，可将碱性染料，可将 细胞内、外的某细胞内、外的某 些物质染成紫红些物质染成紫红 色。色。异染性：显色与异染性：显色与 染料不同的特性染料不同的特性 称为异染性。称为异染性。其分辨率为其分辨率为0.2m，放大倍数，放大倍数 约为约为1000倍。倍。 普通光学显微镜观察普通光学显微镜观察用荧光素染色或者标记的细胞或结构。用荧光素染色或者标记的细胞或结构。荧光标记物：用荧光素标记细胞内的某些成分，荧光标记物：用荧光素标记细胞内的某些成分，使其发出不

7、同的荧光。如溴化乙锭与口丫啶橙使其发出不同的荧光。如溴化乙锭与口丫啶橙可与可与DNADNA结合。结合。以荧光素标记抗体，可检测抗原的存在和分布。以荧光素标记抗体，可检测抗原的存在和分布。荧光显微镜观察荧光显微镜观察用于观察组织培养中活细胞的形态结构。用于观察组织培养中活细胞的形态结构。能将活细胞不同厚度以及细胞内各种结构对光能将活细胞不同厚度以及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用转换为光密度差异（明产生的不同折射作用转换为光密度差异（明 暗差），易于分辨细胞结构。暗差），易于分辨细胞结构。细胞培养室内常用的是倒置相差显微镜，其光细胞培养室内常用的是倒置相差显微镜，其光源和聚光器在载物台的上方

8、，物镜在载物台源和聚光器在载物台的上方，物镜在载物台 的下方，这样便于观察贴附于培养皿底壁的活的下方，这样便于观察贴附于培养皿底壁的活细胞。细胞。相差显微镜观察相差显微镜观察 用于观察因反差或者分辨率不足的微小颗粒。用于观察因反差或者分辨率不足的微小颗粒。有一个暗视野集光器，使光线不能进入物镜，有一个暗视野集光器，使光线不能进入物镜， 故故称暗视野。标本内的称暗视野。标本内的小颗粒产生的衍射光小颗粒产生的衍射光或者散射光进入物镜。或者散射光进入物镜。 暗视野显微镜观察暗视野显微镜观察 以激光为光源，光束经聚焦后落在样品的以激光为光源，光束经聚焦后落在样品的不同深度，并作移动扫描，通过电信号彩色

9、显不同深度，并作移动扫描，通过电信号彩色显像，经图像分析系统对图像做二维及三维处理。像，经图像分析系统对图像做二维及三维处理。能对细胞内被荧光标记的结构做微量分析，对细胞内能对细胞内被荧光标记的结构做微量分析，对细胞内的钙离子以及的钙离子以及pHpH值进行动态分析，测定细胞内的受体值进行动态分析，测定细胞内的受体移动、膜电位变化、移动、膜电位变化、 酶活性和物质转运；酶活性和物质转运； 对细胞及其染色体对细胞及其染色体 进行切割、分离、进行切割、分离、 筛选和克隆。筛选和克隆。 激光共聚焦扫描显微镜激光共聚焦扫描显微镜 （CLSMCLSM）将电子束在样品上进行扫描，产生的两次电子，将电子束在样

10、品上进行扫描，产生的两次电子，用特定的探测器收集放大，形成电子信号传到用特定的探测器收集放大，形成电子信号传到显像管，在荧光屏上显示图像。显像管，在荧光屏上显示图像。特点：视场大，景深长，特点：视场大，景深长， 图像真实，富有立体感。图像真实，富有立体感。扫描电镜观察扫描电镜观察河蟹胚胎附着扫描电镜图河蟹胚胎附着扫描电镜图柱状柱状细胞细胞表面表面（扫（扫描电描电镜）镜） 以电子束代替光线，以电磁透镜代替光学透以电子束代替光线，以电磁透镜代替光学透镜。电子束经电磁场强度放大，射到标本上，最镜。电子束经电磁场强度放大，射到标本上，最后在荧光屏上显像细胞内的超微结构。后在荧光屏上显像细胞内的超微结构

11、。电镜下所见的电镜下所见的超微结构染色超微结构染色深的，称为电深的，称为电子密度高，反子密度高，反之为电子密度之为电子密度低。低。透射电镜观察透射电镜观察透射透射电镜电镜样品样品制作制作青蛤青蛤精子精子超微超微结构结构将人体或动物的活细胞、活组织在体外培养，将人体或动物的活细胞、活组织在体外培养，称细胞或组织培养，细胞在体外生存，必须具称细胞或组织培养，细胞在体外生存，必须具备适宜的条件，包括营养、备适宜的条件，包括营养、O O2 2和和COCO2 2的比例、渗的比例、渗透压、透压、pHpH值、温度和湿度。值、温度和湿度。利用体外培养细胞，可人为的给以各种不同的利用体外培养细胞，可人为的给以各

12、种不同的条件，研究不同条件对细胞的分裂、分化、结条件，研究不同条件对细胞的分裂、分化、结构和功能等的影响，并可用显微摄影等技术记构和功能等的影响，并可用显微摄影等技术记录细胞的动态变化。录细胞的动态变化。组织或细胞培养组织或细胞培养培养培养瓶内瓶内的细的细胞培胞培养养细胞化学与组织化学细胞化学与组织化学显示细胞微细结构的化学成分（糖、脂、核酸、显示细胞微细结构的化学成分（糖、脂、核酸、酶）和活性。酶）和活性。基本原理：在组织切片和细胞样品上滴加一定基本原理：在组织切片和细胞样品上滴加一定的试剂，该试剂与组织内的某些成分发生化学的试剂，该试剂与组织内的某些成分发生化学反应，在局部形成有色沉淀物，

13、通过显微镜观反应，在局部形成有色沉淀物，通过显微镜观察而对组织细胞内的化学成分进行定位、定性察而对组织细胞内的化学成分进行定位、定性和定量，作与功能相关分析的研究。和定量，作与功能相关分析的研究。过碘酸过碘酸- -希夫反应简称希夫反应简称PASPAS反应（反应（period acid period acid Schiff reactionSchiff reaction），显示细胞内糖原或多糖。），显示细胞内糖原或多糖。原理：过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇原理：过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，乙二醛基与基变为乙二醛基，乙二醛基与SchiffSchiff试剂（无试剂（无色亚硫

14、酸品红复合物）结合，形成紫红色反应色亚硫酸品红复合物）结合，形成紫红色反应产物。颜色反应的深浅取决于组织内多糖的乙产物。颜色反应的深浅取决于组织内多糖的乙二醇分子的多寡。二醇分子的多寡。 多糖多糖 酶组织化学：酶组织化学： 原理：利用酶及其相应底物的水解、氧化等原理：利用酶及其相应底物的水解、氧化等作用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发作用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，形成沉淀或有色的最终产物，从而可以生反应，形成沉淀或有色的最终产物，从而可以检测该酶在组织切片或细胞内的分布以及活性强检测该酶在组织切片或细胞内的分布以及活性强弱。即通过显示酶的催化活性以表示酶的存在。弱。即

15、通过显示酶的催化活性以表示酶的存在。 如磷酸酶如磷酸酶 （碱性磷酸酶（碱性磷酸酶ALPALP、酸性磷酸酶、酸性磷酸酶ACPACP）。）。酶酶 核酸组织化学核酸组织化学显示显示DNADNA的传统方法是的传统方法是FeulgenFeulgen反应，切片先用反应，切片先用稀盐酸处理，使稀盐酸处理，使DNADNA分子中脱氧核糖与嘌呤之分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接键打开，形成醛基。醛基与间的连接键打开，形成醛基。醛基与SchiffSchiff试试剂作用剂作用 ( (原理同原理同PASPAS反应反应) ) ，使细胞核，使细胞核DNADNA显紫显紫红色。红色。甲基绿甲基绿- -焦宁染色法：同时显示焦宁染色

16、法：同时显示DNADNA和和RNARNA。两。两种染料均呈碱性，甲基绿使细胞核内的种染料均呈碱性，甲基绿使细胞核内的DNADNA呈呈绿色，焦宁使细胞质和核仁内的绿色，焦宁使细胞质和核仁内的RNARNA呈红色。呈红色。核酸核酸是应用抗原与抗体结合的免疫学原理，检测细是应用抗原与抗体结合的免疫学原理，检测细胞内多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分胞内多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。子物质的存在与分布。特异性强，敏感度高，是发育生物学、医学等特异性强，敏感度高，是发育生物学、医学等众多领域的重要研究手段。如疾病的快速诊断众多领域的重要研究手段。如疾病的快速诊断等。等。免疫细胞

17、化学免疫细胞化学分离纯化某种蛋白，作为抗原注入另一动物体分离纯化某种蛋白，作为抗原注入另一动物体内，后者即产生相应的特异性抗体（免疫球蛋内，后者即产生相应的特异性抗体（免疫球蛋白）。从被免疫动物血清中取出该抗体，再以白）。从被免疫动物血清中取出该抗体，再以荧光素、酶、铁蛋白或胶体金标记。再用这种荧光素、酶、铁蛋白或胶体金标记。再用这种标记抗体处理组织切片或者细胞，标记抗体即标记抗体处理组织切片或者细胞，标记抗体即与细胞内相应的蛋白质与细胞内相应的蛋白质( (抗原抗原) ) 发生特异结合。发生特异结合。常用荧光素：常用荧光素：FITC FITC （异硫氰酸荧光素）。（异硫氰酸荧光素）。 辣根过氧

18、化物酶（辣根过氧化物酶（HRPHRP），从辣根菜中提取。），从辣根菜中提取。 HRPHRP的底物是的底物是3 3，3-3-二氨基联苯胺（二氨基联苯胺（DABDAB）和）和 双氧水（双氧水（H H2 2O O2 2）。）。 HRPHRP使使DABDAB氧化形成棕黄色产物，可在光镜和氧化形成棕黄色产物，可在光镜和 电镜下观察。电镜下观察。铁蛋白或胶体金：免疫电镜中常用。铁蛋白或胶体金：免疫电镜中常用。常用标记物：常用标记物：一是直接法：将标记抗体与样品中的抗原直接一是直接法：将标记抗体与样品中的抗原直接结合。操作简单，敏感度不及间接法。结合。操作简单，敏感度不及间接法。二是间接法：将分离的抗体（一

19、抗）再作为抗二是间接法：将分离的抗体（一抗）再作为抗原免疫另一种动物，制备该抗体的抗体（二原免疫另一种动物，制备该抗体的抗体（二抗），再以标记物标记二抗。先后以一抗和标抗），再以标记物标记二抗。先后以一抗和标记二抗处理样品，最终形成：记二抗处理样品，最终形成：“抗原抗原”-“-“一一抗抗”-“-“标记二抗标记二抗”复合物。复合物。标记抗体与被检测抗原的结合方式：标记抗体与被检测抗原的结合方式：X X射线衍射技术：晶体射线衍射技术：晶体激光技术激光技术超速离心技术：超速离心技术：g=1.11X10g=1.11X10-5-5(R)X(rmp)(R)X(rmp)2 2显微操作技术：移核显微操作技术：

20、移核胚胎转移技术胚胎转移技术放射自显影技术放射自显影技术流式细胞术流式细胞术其其 他他水产动物繁育生物学研究水产动物繁育生物学研究 繁殖习性、性腺发育、配子发生、受精、胚繁殖习性、性腺发育、配子发生、受精、胚 胎与幼体发育。胎与幼体发育。 水产动物生理学研究水产动物生理学研究 如鱼类生长、生殖、消化与吸收等生理机能如鱼类生长、生殖、消化与吸收等生理机能 相关的器官系统的组织结构的研究。相关的器官系统的组织结构的研究。 组织病理学研究组织病理学研究 组织组织- -细胞毒理学研究细胞毒理学研究 遗传育种中的应用研究（杂交、雌核发育、遗传育种中的应用研究（杂交、雌核发育、 多倍体诱导、性别控制、核移

21、植等）多倍体诱导、性别控制、核移植等）三、组织胚胎学的应用三、组织胚胎学的应用四、学习组织胚胎学注意的问题四、学习组织胚胎学注意的问题 理论和实验密切联系理论和实验密切联系 断面和立体的关系断面和立体的关系结构与功能的关系结构与功能的关系从静态结构了解动态结构的变化从静态结构了解动态结构的变化 在实验课中观察、分析、比较，然后再记忆。在实验课中观察、分析、比较，然后再记忆。切片中显示的是组织和细胞的平面结构，如要切片中显示的是组织和细胞的平面结构，如要研究它的立体结构，可制成连续切片，观察记研究它的立体结构，可制成连续切片，观察记录每一张切片中的结构，然后进行综合分析，录每一张切片中的结构，然

22、后进行综合分析，绘制模式图，以表达整体结构。绘制模式图，以表达整体结构。 同一细胞或某一种结构或组织，由于切面的不同一细胞或某一种结构或组织，由于切面的不同而有着形态的差异。因此，应注意从平面的同而有着形态的差异。因此，应注意从平面的局部的图象中，正确地理解立体与整体的结构局部的图象中，正确地理解立体与整体的结构关系。关系。 理论和实验密切联系理论和实验密切联系断面和立体的关系断面和立体的关系显微镜下观察的组织切片都是结构断面的形态。显微镜下观察的组织切片都是结构断面的形态。由于所切的部位不同，在一个细胞某断面可见由于所切的部位不同，在一个细胞某断面可见细胞核，在某断面看不到细胞核。细胞核，在

23、某断面看不到细胞核。又如身体内许多管状的器官，由于所切方位不又如身体内许多管状的器官，由于所切方位不同，往往呈完全不同的形态。同，往往呈完全不同的形态。因此在观察切片上的形态结构时，要考虑断面因此在观察切片上的形态结构时，要考虑断面和立体的关系。和立体的关系。 断面和立体的关系断面和立体的关系示单管不同横切面模示单管不同横切面模式图式图 示单管不同纵切面模示单管不同纵切面模式图式图 示弯管不同切示弯管不同切面模式图面模式图 例如例如l神经细胞有细长突起的结构特点，以传递神神经细胞有细长突起的结构特点，以传递神经冲动；经冲动； l分泌蛋白质的细胞，其细胞质中含丰富的粗分泌蛋白质的细胞，其细胞质中

24、含丰富的粗面内质网、发达的高尔基复合体和许多分泌面内质网、发达的高尔基复合体和许多分泌颗粒等；颗粒等； l红细胞含丰富的血红蛋白，则具有结合和携红细胞含丰富的血红蛋白，则具有结合和携带氧的功能；带氧的功能； l巨噬细胞胞质内含较多的溶酶体。巨噬细胞胞质内含较多的溶酶体。结构与功能的关系结构与功能的关系从受精卵到孵化或产出，胚胎经过一系列的变从受精卵到孵化或产出，胚胎经过一系列的变化，这个变化是个连续的过程。化，这个变化是个连续的过程。 学习胚胎学时一定要把握住每一过程的变化，学习胚胎学时一定要把握住每一过程的变化，包括时间、地点、相互关系，从而建立起动态包括时间、地点、相互关系，从而建立起动态的概念。的概念。 从静态结构了解动态结构变化从静态结构了解动态结构变化主要参考书：主要参考书：成令忠主编，组织学与胚胎学，人民卫生出版成令忠主编，组织学与胚胎学，人民卫生出版社，社，20002000第四版（卫生部规划教材）第四版（卫生部规划教材）李继承主编，组织学与胚胎学实验，浙江大学李继承主编，组织学与胚胎学实验，浙江大学出版社，出版社，20032003杜卓民主编，实用组织学技术，人民卫生出版杜卓民主编，实用组织学技术，人民卫生出版社，社，19981998年第二版年第二版楼允东主编，组织胚胎学，中国农业出版社楼允东主编，组织胚胎学，中国农业出版社