《DNA重组技术的基本工具》课件.ppt

1、设想一 能否培养出具有抗虫性状的抗虫棉呢？每每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取猪或牛的胰腺中仅可提取45g。1979年，美国将年，美国将人的胰岛素基因人的胰岛素基因重组到重组到大肠杆菌大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本。内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本。苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌普通棉花抗虫棉普通棉花抗虫棉粘质沙雷氏杆菌粘质沙雷氏杆菌（Serratia marcesens练习：流感嗜血杆菌的练习：流感嗜血杆菌的d d菌株菌株( Haemophilus influenzae d )( Haemophilus influenzae d )中先后分离到中先后分离到3

2、 3种限制酶，则分种限制酶，则分别命名为别命名为: :Hind、Hind和和Hind T1234512345 A区别区别切割特定的核苷酸序列切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键的磷酸二酯键将将DNADNA两条链的氢键两条链的氢键打开形成两条单链打开形成两条单链能被限制性内切酶特能被限制性内切酶特异性识别的切割部位异性识别的切割部位都具有回文序列：在都具有回文序列：在切割部位，一条链正切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序一条链反向读的顺序完全一致。完全一致。当限制酶从识别序列的当限制酶从识别序列的中心轴线中心轴线处切开时，产生的是处切开时，产生的是平末端平末端。当

3、限制酶从识别序列的当限制酶从识别序列的中心轴线两侧中心轴线两侧切开时，产生的是切开时，产生的是黏性末端黏性末端。黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端平末端平末端平末端平末端催化磷酸二酯键形成催化磷酸二酯键形成1 1、载体的作用、载体的作用2、种类、种类 3、载体需要的条件、载体需要的条件1 1、载体的作用、载体的作用将将 转移到受体细胞中去。转移到受体细胞中去。目的基因目的基因2、种类、种类 u质粒（常用，最常用的质粒是大肠杆菌的）质粒（常用，最常用的质粒是大肠杆菌的）u噬菌体的衍生物噬菌体的衍生物u动植物病毒动植物病毒以便与外源基以便与外源基因连接。因连接。能够在

4、受体细胞中自我复制并稳定地保存能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存质粒是质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核菌拟核DNADNA之外，并且具有之外，并且具有自我复制自我复制能力的很小能力的很小的的双双链链环环状状DNADNA分子。分子。4 4、质粒是基因工程最常用的载体。、质粒是基因工程最常用的载体。质粒质粒质粒进入受体细胞后，质粒进入受体细胞后，在细胞中进行在细胞中进行5）真正被用作载体的质粒都是在天然质粒）真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行人工改造的。的基础上进行人工改造的。质粒质粒1)1)只能将只能将单个核苷酸单个核苷酸连连接到已有的核酸片段

5、上，接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1.1.形成形成磷酸二酯键磷酸二酯键1)1)在在两个两个DNADNA片段之片段之间间形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键2)2)以以一条一条DNADNA链为模板链为模板，连接成一条互补连接成一条互补的的DNADNA链链2)2)将将DNADNA双链上的双链上的两两个缺口同时连接个缺口同时连接起来，起来，不需要模板不需要模板2.2.化学本质都是蛋白质（但组成和性质各不相同）化学本质都是蛋白质（但组成和性质各不相同）Go backGo back限制性内切酶限制性内切酶的识别序列和切点是的识别序列和切点是GGATCC，限制，限制性内切酶性内切酶的识别序列和

6、切点是的识别序列和切点是GATC。在质粒上有。在质粒上有酶酶的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶的切点。的切点。（1）请画出质粒被限制酶）请画出质粒被限制酶切割后所形成的黏性末端。切割后所形成的黏性末端。（2）请画出目的基因两侧被限制酶）请画出目的基因两侧被限制酶切割后所形成的黏性切割后所形成的黏性末端。末端。（3）在）在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？成的黏性末端能否连接？为什么？可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）性末端是相同的（或是可以互补的） 小试身手小试身手