生化检验基础培训-PPT课件.ppt

1、 2010 Mindray Confidentialn 1n 2022-5-24目录目录一、一、生化检验分析对象生化检验分析对象二、生化项目分类二、生化项目分类三、生化检测原理三、生化检测原理四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 2n 2022-5-24一、生化检验的对象一、生化检验的对象血清是指血液凝固析出的淡黄色透明液体。血清是指血液凝固析出的淡黄色透明液体。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点这一点是与血浆最大的区

2、别是与血浆最大的区别。其他样本：血浆、。其他样本：血浆、尿液、脑脊液等。尿液、脑脊液等。 1.1.生化检验的对象生化检验的对象血清血清n 3n 2022-5-24一、生化检验的对象一、生化检验的对象静脉采血方式静脉采血方式离心血样离心血样n 4n 2022-5-24二、生化项目分类二、生化项目分类肝功能肝功能 肾功能肾功能心肌酶谱心肌酶谱 血糖血糖胰腺炎胰腺炎 血脂血脂痛风痛风 免疫性疾病免疫性疾病按临床分类按临床分类n 5n 2022-5-24二、生化项目分类二、生化项目分类酶类酶类 底物代谢类底物代谢类无机离子类无机离子类特种蛋白类特种蛋白类按化学性质分类按化学性质分类n 6n 2022-

3、5-24三、生化检测原理三、生化检测原理1.1.光谱常识光谱常识n 7n 2022-5-24三、生化检测原理三、生化检测原理如把两种光以适当比例混合而产如把两种光以适当比例混合而产生白光感觉时，则这两种光的颜生白光感觉时，则这两种光的颜色互为补色。下图中处于同一直色互为补色。下图中处于同一直线关系的两种色光（如绿与紫、线关系的两种色光（如绿与紫、黄与蓝）互为补色。黄与蓝）互为补色。例如，例如，CuSO4CuSO4、K2MnO4K2MnO42.2.互为补色光的概念互为补色光的概念 /nm/nm颜色颜色互补光互补光400-450400-450紫黄绿450-480450-480蓝蓝黄黄480-490

4、480-490绿蓝绿蓝橙橙490-500490-500蓝绿蓝绿红红500-560500-560绿绿红紫红紫560-580560-580黄绿黄绿紫紫580-610580-610黄黄蓝蓝610-650610-650橙橙绿蓝绿蓝650-760650-760红红蓝绿蓝绿n 8n 2022-5-24三、生化检测原理三、生化检测原理为透光率，一般用为透光率，一般用T T表示表示3.3.吸光度的定义吸光度的定义otIILgAotIIn 9n 2022-5-24三、生化检测原理三、生化检测原理当入射光的波长、溶液的浓度、温度一定时，溶液的吸光度与液体当入射光的波长、溶液的浓度、温度一定时，溶液的吸光度与液体的

5、厚度成正比。的厚度成正比。4 4、朗伯定律、朗伯定律n 10n 2022-5-24三、生化检测原理三、生化检测原理当入射光的波长、液层厚度和溶液的温度固定时当入射光的波长、液层厚度和溶液的温度固定时, ,溶液的吸光度与溶溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。液的浓度成正比。5.5.比尔定律比尔定律n 11n 2022-5-24三、生化检测原理三、生化检测原理描述为被测物质溶液描述为被测物质溶液( (均匀非散射均匀非散射) )在一定浓度范围内对一定波长单在一定浓度范围内对一定波长单色平行的吸光度与被测物质浓度和溶液厚度的乘积成比。数学式为：色平行的吸光度与被测物质浓度和溶液厚度的乘积成比。数学式为：其

6、中其中A A为溶液的吸光度，为溶液的吸光度，C C被测物浓度，被测物浓度，L L为光径，为光径， 为摩尔吸光为摩尔吸光系数，单位是系数，单位是L/L/molmolcmcm，指当吸光物质的浓度为，指当吸光物质的浓度为1 mol/L1 mol/L，吸收池，吸收池厚为厚为1cm1cm，以一定波长的光通过时，所引起的吸光度值，以一定波长的光通过时，所引起的吸光度值A A。值取值取决于入射光的波长和吸光物质的吸光特性，亦受溶剂和温度的影决于入射光的波长和吸光物质的吸光特性，亦受溶剂和温度的影响。显然，显色反应产物的响。显然，显色反应产物的值愈大，基于该显色反应的光度测值愈大，基于该显色反应的光度测定法的

7、灵敏度就愈高。定法的灵敏度就愈高。 6.6.朗伯朗伯比尔定律（比尔定律（ Lambert-Beers Law Lambert-Beers Law ）CLAn 12n 2022-5-24三、生化检测原理三、生化检测原理7.7.吸收曲线吸收曲线n 13n 2022-5-24三、生化检测原理三、生化检测原理右图为不同浓度的右图为不同浓度的KMnO4KMnO4的吸收曲线，可见，不同的吸收曲线，可见，不同浓度的浓度的KMnO4KMnO4的吸光度不的吸光度不同，但是吸收峰的波长相同，但是吸收峰的波长相同。同。7.7.吸收曲线吸收曲线n 14n 2022-5-24三、生化检测原理三、生化检测原理8.8.透射

8、比浊法透射比浊法IoIL颗粒大小与光源波长接近LoeIIKCLIILgon 15n 2022-5-24吸光度的定义吸光度的定义朗伯比尔定理的必须条件朗伯比尔定理的必须条件小结小结n 16n 2022-5-24四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 1、生化试剂n与样品中的有效成分发生化学反应，反应后生成一种对光敏感的物质，再通过用特定的光去照射最终化学反应的反应液，接收并检测光线照射前后发光强度变化，从而计算出被测物的浓度信息。n 比如：比如：ALBALB（白蛋白）测试，通常情况下（白蛋白）测试，通常情况下n 我们使用溴甲酚绿这种物质和我们使用溴甲酚绿这种物质和ALBA

9、LB混合在混合在n 一起，在酸性条件下，两者就发生化学一起，在酸性条件下，两者就发生化学n 反应：反应：nn 17n 2022-5-24 NAD+-NADHNAD+-NADH系统系统p-NPp-NP（p-NAp-NA）系统）系统H2O2H2O2偶联的指示系统偶联的指示系统抗原抗体反应指示系统抗原抗体反应指示系统其它显色反应其它显色反应2.2. 试剂显色指示系统试剂显色指示系统四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 18n 2022-5-24终点法终点法动力学法动力学法 （零级动力学法、连续检测法）（零级动力学法、连续检测法）固定动力学法固定动力学法 （两点法、一级动力学

10、法、初速率法）（两点法、一级动力学法、初速率法）3.3.生化测定方法生化测定方法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 19n 2022-5-24终点法的定义终点法的定义指经过一段时间指经过一段时间( (一般为几分钟一般为几分钟) )的反应，反应进行到完全，的反应，反应进行到完全，使全部底物使全部底物( (被测物被测物) )转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。整个反应达到平衡，由于正向反应的法，这是最理想的分析类型。整个反应达到平衡，由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液

11、的吸平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加光度不再增加( (或降低或降低) )，吸光度的增加，吸光度的增加( (或降低或降低) )程度与被测定物的程度与被测定物的浓度成正比。浓度成正比。终点法对反应条件终点法对反应条件( (如酶量、如酶量、pHpH、温度、温度) )小的改变不敏感，只小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可。要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可。 3.3.生化测定方法生化测定方法终点法终点法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 20n 2022-5-24终点法3.3.生化测定方法生化测定方法

12、终点法终点法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 21n 2022-5-24零级动力学法定义零级动力学法定义动力学法即通常所说的零级动力学法，也被称为连续监测法。指反动力学法即通常所说的零级动力学法，也被称为连续监测法。指反应过程中反应速度维持不变，与底物浓度无关，因此，在整个反应应过程中反应速度维持不变，与底物浓度无关，因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度( (A/min)A/mi

13、n)与被与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。 实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样，由于血清成物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样，由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，因此，零级动力份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。 4.4.生化测定方法生化测定方法动力

14、学法动力学法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 22n 2022-5-24动力学法（零级动力学法、连续检测法）动力学法（零级动力学法、连续检测法）4.4.生化测定方法生化测定方法动力学法动力学法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 23n 2022-5-24固定时间法定义固定时间法定义固定时间法又被称为一级动力学法固定时间法又被称为一级动力学法(first order kinetic)(first order kinetic)、初速率法初速率法(initial rate)(initial rate)、二点法、二点法(two point ra

15、te)(two point rate)等。等。在一定的反应时间内，反应速度与底物在一定的反应时间内，反应速度与底物( (被测物被测物) )浓度的一次浓度的一次方成正比方成正比, ,由于底物由于底物( (被测物被测物) )在不断的消耗，因此整个反应速度在不在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加断的减小，表现为吸光度的增加( (或降低或降低) )速度越来越小，这类反应速度越来越小，这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，经过一段血清成份复杂，

16、反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，经过一段延迟时间才能进入稳定反应期，必需在特定时间段内进行监测。延迟时间才能进入稳定反应期，必需在特定时间段内进行监测。5.5.生化测定方法生化测定方法固定时间法固定时间法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 24n 2022-5-24固定时间法（两点法、固定时间法、初速率法）固定时间法（两点法、固定时间法、初速率法）5.5.生化测定方法生化测定方法固定时间法固定时间法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 25n 2022-5-24单试剂终点法生化仪是如何得到结果浓度的？生化仪是如何得到结果浓度的？6 6、

17、反应度的计算、反应度的计算23AAR四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 26n 2022-5-24生化仪是如何得到结果浓度的生化仪是如何得到结果浓度的？6 6、反应度的计算、反应度的计算RBKAARBRSR34其中其中RBRB为混合试剂吸光度，为混合试剂吸光度，K K为体积校正因数为体积校正因数双试剂终点法双试剂终点法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 27n 2022-5-24动力学法动力学法生化仪是如何得到结果浓度的生化仪是如何得到结果浓度的？6 6、反应度的计算、反应度的计算 22)(iiiiiiTTnTATAnR四、临床生化测定方

18、法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 28n 2022-5-24生化仪是如何得到结果浓度的生化仪是如何得到结果浓度的？6 6、反应度的计算、反应度的计算4545ttAAR固定时间法固定时间法四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 29n 2022-5-24定标的意义：定标的意义：浓度浓度C C 反应度反应度R R 吸光度吸光度A A 线性定标：比色法线性定标：比色法定标的分类：定标的分类： 非线性定标：比浊法非线性定标：比浊法7.7.定标定标四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 30n 2022-5-24线性定标线性定标7.7.定标定标

19、四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 31n 2022-5-24非线性定标非线性定标Logistic-Log 4PLogistic-Log 4P7.7.定标定标RCC1C2C3C4四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 32n 2022-5-24非线性定标非线性定标 Exponential5P Exponential5P7.7.定标定标RCC1C2C3C4C5四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 33n 2022-5-24Polynomial 5P Polynomial 5P Parabola Parabola Spl

20、ineSpline 7.7.定标定标即描点法，由于是分段拟合，其拟和程度在所有定标类型中最高。即描点法，由于是分段拟合，其拟和程度在所有定标类型中最高。四、临床生化测定方法和浓度换算四、临床生化测定方法和浓度换算n 34n 2022-5-24五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念酶类简介酶类简介1.1.酶类项目酶类项目n 35n 2022-5-24酶的活性酶的活性酶的单位：酶的单位： 1 1分钟能转化分钟能转化1 1微摩尔底物（微摩尔底物（ ）的酶量为）的酶量为一个国际单位，以一个国际单位，以IUIU表示。表示。活性的计算：活性的计算：K K为计算因数，与光径、稀释比、毫摩尔吸光系数

21、有关为计算因数，与光径、稀释比、毫摩尔吸光系数有关1.1.酶类项目酶类项目KAVLVALUCstmin/1000min/)/(1minmol五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 36n 2022-5-24酶促反应动力学酶促反应动力学影响因素：影响因素：1 1、底物浓度、底物浓度2 2、温度、温度3 3、 pHpH值值4 4、酶浓度、酶浓度1.1.酶类项目酶类项目五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 37n 2022-5-24酶促反应动力学酶促反应动力学影响因素：温度的影响影响因素：温度的影响1.1.酶类项目酶类项目五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n

22、38n 2022-5-24酶促反应动力学酶促反应动力学影响因素：影响因素：pHpH值的影响值的影响1.1.酶类项目酶类项目五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 39n 2022-5-24酶促反应动力学酶促反应动力学影响因素：影响因素：酶浓度的影响酶浓度的影响1.1.酶类项目酶类项目五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 40n 2022-5-24吸光度、反应度、浓度之间的关系吸光度、反应度、浓度之间的关系酶类的计算因数酶类的计算因数熟悉掌握吸收曲线、反应曲线、定标曲线熟悉掌握吸收曲线、反应曲线、定标曲线小结小结n 41n 2022-5-24作用：作用：2.2.双试剂双

23、试剂五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 42n 2022-5-24作用：作用：l滤除内源性干扰滤除内源性干扰l滤除系统、随机干扰滤除系统、随机干扰2.2.双波长双波长五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 43n 2022-5-24At1A2A03.3.底物耗尽底物耗尽五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 44n 2022-5-245.5.抗原过剩抗原过剩五、几个临床生化测试概念五、几个临床生化测试概念n 45n 2022-5-241 1、熟悉掌握朗伯比尔定理、熟悉掌握朗伯比尔定理2 2、熟悉反应度的计算原理、熟悉反应度的计算原理3 3、熟悉定标、熟悉定标/ /质控的原理和意义质控的原理和意义4 4、应用于生化临床的技术、应用于生化临床的技术内容总结内容总结n 46n 2022-5-24版本信息版本信息版本版本作者作者日期日期描述描述1.0阳雨阳雨2011/6/10第一版第一版n 47n 2022-5-24审核信息审核信息版本版本审核人审核人日期日期评论评论1.0王景骞王景骞蒙方蒙方冯玉峰冯玉峰2011/7/10Nulln 48n 2022-5-24