DNA重组技术的基本工具课件课堂.ppt

1、12问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。苏云金芽孢杆菌毒蛋白普通棉花抗虫棉3DNA外源基因外源基因G C ATT G CAA C GTC G TAG C ATT G CA4限制酶的识别特点? 以中轴线两侧的双链 DNA上碱基呈反向对称，重复排列? 如：GAA TTCCCC GGG?CTT AAG GGG CCC5G A A T T CC T T A A GC T T A AGA A T T CG粘性末端特定的核苷酸序列(6)特定的切点EcoRI限制酶中轴线6不同的限制酶所形成的黏性末端不同C C C G G G

2、 C C C G G G特定的核苷酸序列(6)特定的切点C C C G G GG G GC C C 平末端平末端Smal酶7黏性末端和平末端8DNA分子切割切割DNADNA分子实质是分子实质是断开两个核苷酸之间的断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键磷酸二酯键。9? 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？? 如果把两种来源不同的DNA 用同一种限制酶来切割，会怎样呢？思考?10DNA外源基因外源基因G C ATT G CAA C GTC G TAG C ATT G CA11? 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？要切两个

3、切口，产生四个黏性(平)末端。? 如果把两种来源不同的DNA 用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA 分子了。思考?1213可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，Ecoli DNA 连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键14可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，Ecoli DNA 连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键15类型：类型EcoliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率

4、较低)相同点差别（二）（二）“分子缝合针分子缝合针” DNA 连接酶16DNA聚合酶DNA连接酶区别1区别2相同点寻根问底? DNA 连接酶与DNA 聚合酶是一回事吗?为什么?1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板Go on17三、“分子运输车” 基因进入受体细胞的载体载体需要的条件：有1多个限制酶切点对受体细胞无害导入基因能在受体细胞中复制、表达有某些标记基因，便于筛选常用运载体：细菌的质粒噬菌

5、体或某些动植物病毒假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？作为分子运输车载体，如果没有切割位点将会怎样？霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？18? 常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别19AATTGCCTTAAG磷酸二酯键磷酸二酯键20练习?在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）A.同种限制酶B. 两种限制酶C. 同种连接酶D. 两种连接酶?基因工程常用的受体细胞有（）(1)大肠杆菌（2）枯草杆菌（3）支原体（4）动植物细胞A. （3）（4）B. （1）（2）（4）C. （2）（3）（4）D. （1）（2）（3）21不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD练习221、下列不适合用于基因工程的运载体是（）A、质粒B、噬菌体C、细菌D、病毒选我C2、下列说法正确的是：（）A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、重组技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、运载体D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆”选我D审题231.1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具