输血相容性检测ppt课件.ppt

1、输血相容性检测输血相容性检测1内内 容容 提提 要要一一二二三三红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术抗体的筛选及鉴定抗体的筛选及鉴定交叉配血交叉配血四四抗筛和配血结果分析抗筛和配血结果分析五五案例分析案例分析2红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术u盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验u抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验u酶介质凝集试验酶介质凝集试验u凝聚胺试验凝聚胺试验u微柱凝胶免疫试验微柱凝胶免疫试验3u盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗体分子上的抗原结合位点结合，体分子上的抗原结合位点结合，交叉联结形交叉联结形

2、成肉眼可见的凝集。成肉眼可见的凝集。用于用于IgMIgM抗体抗体的检出、鉴定、盐水配血试验以的检出、鉴定、盐水配血试验以及血型的鉴定。及血型的鉴定。当当特异性的特异性的IgGIgG类类抗抗A A、抗、抗B B的浓度足够大时，的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决反应，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。定簇位置有关。4方法：方法：玻片法玻片法- -便于显微镜观察结果便于显微镜观察结果 试管法试管法- -适用于不同温度、便于洗涤适用于不同温度、便于洗涤反应温度：反应温度：4 42222临床意义：

3、盐水凝集试验阳性，并在临床意义：盐水凝集试验阳性，并在3737也有也有活性的抗体有意义。室温有活性，活性的抗体有意义。室温有活性，3737无活性无活性者临床意义不大。者临床意义不大。优点：简便、快捷、直观。优点：简便、快捷、直观。 缺点：不能发现不完全抗体。缺点：不能发现不完全抗体。u盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验5抗人球蛋白试验是抗人球蛋白试验是19451945年由年由CoombsCoombs等人建等人建立的，又称立的，又称CoombsCoombs试验。抗人球蛋白试验试验。抗人球蛋白试验的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。分为直接抗人球蛋白试验（

4、分为直接抗人球蛋白试验（DATDAT）和间接抗）和间接抗人球蛋白试验（人球蛋白试验（IATIAT）。）。u抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验6IgGIgG类血型抗体类血型抗体（主要是免疫抗体，如（主要是免疫抗体，如RhRh血型血型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗之为不完全抗体，但在加入抗-IgG-IgG后，以其搭后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。桥作用则可出现凝集反应。补体补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活

5、以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多克隆抗体，或抗克隆抗体，或抗C3bC3b、抗、抗C3dC3d等单特异性抗体与等单特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球蛋白试验。蛋白试验。抗人球蛋白试验原理抗人球蛋白试验原理7 DATDAT是检测体内致敏红细胞的一种方法，是检测体内致敏红细胞的一种方法，用于用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，尤其尤其是是IgGIgG和和C3dC3d包被的红细胞。包被的红细胞。应用：应用： HDNHDN和自身免疫性溶血性贫血的诊断和自身免疫

6、性溶血性贫血的诊断 红细胞被药物抗体致敏的检查红细胞被药物抗体致敏的检查 急性和迟发性溶血性输血反应的检查急性和迟发性溶血性输血反应的检查直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验89IATIAT是是检测血清中不完全抗体的一种，检测血清中不完全抗体的一种，用于测用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。定在体外能引起红细胞致敏的抗体。应用：应用：血型的鉴定，如血型的鉴定，如RhRh血型血型抗体的检出和鉴定抗体的检出和鉴定交叉配血交叉配血间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验1011原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，是红细胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能荷，是

7、红细胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的间距，使间的间距，使IgGIgG抗体分子能与有相应抗原的抗体分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集红细胞产生凝集常用的酶（常用的酶（0.5%0.5%）：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、）：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶无花果酶u酶介质凝集试验酶介质凝集试验12优点：优点： 酶法能显著增强一些抗原抗体系统的反应活性，酶法能显著增强一些抗原抗体系统的反应活性，RhRh和和KiddKidd系统最明显系统最明显缺点：缺点

8、： 酶法处理酶法处理RBCRBC，蛋白酶会使，蛋白酶会使RBCRBC的抗原结构破的抗原结构破坏和变性（坏和变性（MM、N N、FyFya a、FyFyb b） 操作繁复，少数人对酶液过敏操作繁复，少数人对酶液过敏u酶介质凝集试验酶介质凝集试验13原理：原理： 凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异引起红细胞的非特异性凝集。性凝集。 当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgG

9、IgG抗体与红细胞上相应的抗原结合在凝聚胺的作抗体与红细胞上相应的抗原结合在凝聚胺的作用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与凝聚胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消凝聚胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消失，而真正的凝集不会消失。失，而真正的凝集不会消失。u凝聚胺试验凝聚胺试验1415u微柱凝胶试验微柱凝胶试验原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。抗原抗

10、体反应后离心，凝胶柱起过筛作用，抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙，胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙，沉积到底部。沉积到底部。16微柱凝胶免疫反应的本质：凝集反应微柱凝胶免疫反应的本质：凝集反应红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细胞在胶质介质中的位置肉眼判断。胞在胶质介质中的位置肉眼判断。17u微柱凝胶试验微柱凝胶试验特异性胶：抗特异性胶：抗A A、抗抗B B、抗、抗D D中性胶：对照孔、中性胶：对照孔、反定型反定型抗人球蛋

11、白胶：抗人球蛋白胶：抗筛、交叉配血抗筛、交叉配血18u几种方法的比较几种方法的比较方法方法优点优点缺点缺点盐水法盐水法操作方便操作方便, ,费用低廉费用低廉只能检出不相配合完全抗体只能检出不相配合完全抗体, ,不能检不能检出不相配合的不完全抗体出不相配合的不完全抗体 抗球蛋抗球蛋白法白法检测不完全抗体最灵敏检测不完全抗体最灵敏的方法的方法 操作复杂、不利于急诊检查和血库的操作复杂、不利于急诊检查和血库的大批量工作大批量工作酶法酶法增强增强Rh Rh 、KiddKidd系统系统破坏破坏MM、N N、S S、s s、Fy(a) Fy(a) 、Fy(b)Fy(b)抗原抗原结构结构, ,易失活易失活,

12、 ,寿命短寿命短, ,反应时间长反应时间长 凝聚胺凝聚胺法法方便、应用最广方便、应用最广KellKell系统部分抗体如抗系统部分抗体如抗K K 、抗、抗 kp(a) kp(a) 、抗抗kp(b)kp(b)检测不出检测不出, ,需要抗球蛋白试验需要抗球蛋白试验. .且肝素对其有影响且肝素对其有影响, ,易引起假阴性易引起假阴性. .微柱凝微柱凝胶法胶法国际安全输血检查的推国际安全输血检查的推荐方法，灵敏度高、重荐方法，灵敏度高、重复性好、特异性好、检复性好、特异性好、检测结果可较长时间保存测结果可较长时间保存费用高费用高19抗体的筛选及鉴定抗体的筛选及鉴定有临床意义的抗体：能引起新生儿溶血病、有

13、临床意义的抗体：能引起新生儿溶血病、引发溶血性输血反应，或者使输入的红细胞引发溶血性输血反应，或者使输入的红细胞存活期减少的在存活期减少的在3737有反应的同种异型抗体有反应的同种异型抗体不规则抗体：抗不规则抗体：抗A A，抗，抗B B以外的抗体以外的抗体包括：同种抗体和自身抗体包括：同种抗体和自身抗体20u抗体筛选方法抗体筛选方法盐水介质凝集法盐水介质凝集法抗人球蛋白法抗人球蛋白法凝聚胺法凝聚胺法微柱凝胶法微柱凝胶法21结果的判读与解释结果的判读与解释溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反应阳性结果。先观察有无溶血，后观察有无应阳性结果。先观察有无溶血，

14、后观察有无凝集。凝集。记录结果，并与以前结果对照。记录结果，并与以前结果对照。抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效应的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效应的抗体，可能被漏检。的抗体，可能被漏检。22u抗体鉴定抗体鉴定通过筛选，抗体一经检出，应进一步作抗体鉴通过筛选，抗体一经检出，应进一步作抗体鉴定试验，以确定其特异性。定试验，以确定其特异性。自身细胞检查自身细胞检查 - - 排除非特异性排除非特异性 谱红细胞检查谱红细胞检查23u抗体鉴定抗体鉴定谱红细胞：谱红细胞： 一般是由一般是由8-168-16人份的已知血型表现型

15、人份的已知血型表现型O O型红细型红细胞组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱胞组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。方法：方法： 在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、酶技术及抗人球蛋白实验。酶技术及抗人球蛋白实验。24交叉配血交叉配血主侧：主侧：受血者血清受血者血清+ +供者红细胞供者红细胞 检测对供者红细胞起反应的抗体检测对供者红细胞起反应的抗体次侧：次侧：受血者红细胞受血者红细胞+ +供者血清供者血清 检测对受者红细胞起反应的抗体检测对受者红细胞起反应的抗体自身对照：自身对

16、照：受血者红细胞受血者红细胞+ +受血者血清受血者血清 排除自身抗体、直接抗球蛋白试排除自身抗体、直接抗球蛋白试 验阳性及红细胞缗钱状凝集验阳性及红细胞缗钱状凝集25缗钱状凝集缗钱状凝集也称串钱状凝集，是一种假凝集，红细胞像也称串钱状凝集，是一种假凝集，红细胞像许多钱币堆积在一起。许多钱币堆积在一起。血浆球蛋白异常，如高球蛋白血症、巨球蛋血浆球蛋白异常，如高球蛋白血症、巨球蛋白血症。使用大分子右旋糖酐或羟乙基淀粉白血症。使用大分子右旋糖酐或羟乙基淀粉扩容。扩容。将血清适当稀释。将血清适当稀释。26抗筛和配血结果分析抗筛和配血结果分析主侧交叉配血不相合的原因：主侧交叉配血不相合的原因： 病人或供

17、血者病人或供血者ABOABO血型错误血型错误 病人血清中存在同种抗体或自身抗体，与供病人血清中存在同种抗体或自身抗体，与供血血 者红细胞上的相应抗原反应。者红细胞上的相应抗原反应。 供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗人供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗人球蛋白试验阳性。球蛋白试验阳性。 病人血清异常，如白蛋白球蛋白比例不正病人血清异常，如白蛋白球蛋白比例不正常引起缗钱状假凝集，血清中存在高分子聚合常引起缗钱状假凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性（用盐水添加试验物的血浆扩容剂引起假阳性（用盐水添加试验来解决）。来解决）。 试验系统被污染。试验系统被污染。 27抗筛和配血结果分

18、析抗筛和配血结果分析主侧：主侧：+ +，自身对照：，自身对照：- -，抗筛：，抗筛：- - 患者或供血者患者或供血者ABOABO血型错误血型错误重新定型重新定型 患者血清中可能含患者血清中可能含ABOABO抗体抗体检查病人亚检查病人亚型、输血史及移植史型、输血史及移植史 患者血清中有抗体，但筛选细胞上无相应患者血清中有抗体，但筛选细胞上无相应抗原抗原对患者血清进行抗体鉴定对患者血清进行抗体鉴定 供血者红细胞直抗试验阳性供血者红细胞直抗试验阳性检查供血者检查供血者直抗试验直抗试验 28抗筛和配血结果分析抗筛和配血结果分析主侧：主侧：+ +，自身对照：，自身对照：- -，抗筛：，抗筛：+ + 患者

19、血清中的同种抗体与供血者红细胞上相患者血清中的同种抗体与供血者红细胞上相应抗原反应应抗原反应对患者血清进行抗体鉴定，选对患者血清进行抗体鉴定，选择无相应抗原的血择无相应抗原的血29抗筛和配血结果分析抗筛和配血结果分析主侧：主侧：+ +，自身对照：，自身对照：+ +，抗筛：，抗筛：+ + 病人血清中可能同时存在自身抗体和同种病人血清中可能同时存在自身抗体和同种抗体抗体对病人血清进行抗体吸收及鉴定，用对病人血清进行抗体吸收及鉴定，用吸收后血清配血吸收后血清配血 病人血清不正常：白病人血清不正常：白/ /球比不正常、血浆扩球比不正常、血浆扩容物容物盐水添加试验盐水添加试验试验系统污染试验系统污染重新

20、抽样检测重新抽样检测30抗筛和配血结果分析抗筛和配血结果分析次测交叉配血不相合的原因：次测交叉配血不相合的原因： 供血者血浆中存在针对患者红细胞抗原的供血者血浆中存在针对患者红细胞抗原的抗体。抗体。 病人与供血者的病人与供血者的ABOABO血型不相合。血型不相合。 病人的红细胞已经包被了抗体，直抗试验病人的红细胞已经包被了抗体，直抗试验阳性。阳性。31案例分析案例分析案例案例1 1： 患者女，患者女，8585岁，因重度贫血，申请输注红细胞岁，因重度贫血，申请输注红细胞悬液悬液3 3u u。交叉配血结果为：患者血型为。交叉配血结果为：患者血型为A A型型RhRh阳性，抗筛（阳性，抗筛（+ +），

21、自身对照（），自身对照（- -），交叉配血），交叉配血时主侧凝集程度为时主侧凝集程度为（+ +），次侧不凝集。次侧不凝集。问：如何处理？问：如何处理？32案例分析案例分析案例案例2 2： 患者，女，患者，女，6161岁，行关节置换术。术中申请红岁，行关节置换术。术中申请红细胞悬液细胞悬液3 3u u，按操作要求进行配血。确定患者，按操作要求进行配血。确定患者血型为血型为A A型型RhRh阳性，抗筛（阳性，抗筛（- -），在做交叉配血），在做交叉配血时发现，两位供血者提供的红细胞悬液在次端时发现，两位供血者提供的红细胞悬液在次端都与患者血浆发生反应，出现不同程度的凝集。都与患者血浆发生反应，出现不同程度的凝集。此时，加做患者的直抗试验和自身配血对照，此时，加做患者的直抗试验和自身配血对照，得到结果为：直抗试验为（得到结果为：直抗试验为（+ +），自身配血对），自身配血对照出现照出现“+”+”的凝集。的凝集。 问：如何处理？问：如何处理？3334