《基因工程》PPT课件.ppt

1、.11 1、概念：、概念： 基因工程又叫做基因拼接技术或基因工程又叫做基因拼接技术或DNADNA重组技术。重组技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 .2.3.4DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶的比较聚合酶的比较DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶作用实质作用实质都是催化两个核苷酸之间形成都是催化两个核苷酸之间形成磷酸二酯键磷酸二酯键是否需模板是否需模板不需要不需要需要需

2、要连接连接DNA链链双链双链单链单链作用过程作用过程在两个在两个DNA片段片段之间形之间形成磷酸二酯键成磷酸二酯键将将单个核苷酸单个核苷酸加到已存加到已存在的核酸片段的在的核酸片段的3端的端的羟基上，形成磷酸二酯羟基上，形成磷酸二酯键键作用结果作用结果将存在的将存在的DNA片段连接片段连接成重组成重组DNA分子分子合成新的合成新的DNA分子分子.5a对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。b具标记基因具标记基因。c能自我复制能自我复制。通过复制进行基因扩增，否则可能会使。通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组重组DNA丢失。丢失。d具有一个或

3、多个限制酶切点具有一个或多个限制酶切点，供外源基因插入其中。，供外源基因插入其中。常用载体常用载体质粒：裸露的，结构简单且独立于细菌染色质粒：裸露的，结构简单且独立于细菌染色体体DNA之外的，具有自我复制能力的之外的，具有自我复制能力的小型环状小型环状DNA分子分子。.6标记标记基因基因.7基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1 1、目的基因的获取、目的基因的获取2 2、基因表达载体的构建、基因表达载体的构建3 3、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞4 4、目的基因的检测与鉴定、目的基因的检测与鉴定.8一、目的基因的获取一、目的基因的获取1 1、目的基因主要是指、目的基因主

4、要是指_编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因请举出三个以上的例子请举出三个以上的例子2 2、获取目的基因的常用方法、获取目的基因的常用方法（1 1）从基因文库中获取）从基因文库中获取（2 2）利用）利用PCRPCR技术扩增技术扩增（3 3）人工化学合成）人工化学合成基因操作的基本步骤基因操作的基本步骤供体生物细胞供体生物细胞取出取出DNADNA用限制酶剪用限制酶剪去多余部分去多余部分目的基因目的基因限制酶限制酶.9提取某种生物的全部提取某种生物的全部DNADNA用适当的限制酶切用适当的限制酶切一定大小的一定大小的DNADNA片段片段将将DNADNA片段与载体连接片段与载体连接导入受体菌中储

5、存导入受体菌中储存基因组文库基因组文库基因文库的构建方法之一基因文库的构建方法之一（1 1）直接分离法）直接分离法.10 第一步，反转录酶以第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与为模板合成一条与RNA互补互补的的DNA单链，形成单链，形成RNA-DNA杂交分子。杂交分子。 第二步，核酸酶第二步，核酸酶H使使RNA-DNA杂交分子中的杂交分子中的RNA链链降解，使之变成单链的降解，使之变成单链的DNA。 第三步，以单链第三步，以单链DNA为模板，在为模板，在DNA聚合酶的作用下聚合酶的作用下合成另一条互补的合成另一条互补的DNA链，形成双链链，形成双链DNA分子。分子。 基因文库的构建方法之二

6、基因文库的构建方法之二: : cDNA合成法合成法 .11.12mRNA 反转录反转录cDNA(互补互补DNA） DNA聚合酶聚合酶双链双链DNA反转录法：反转录法：.13某种生物的单链某种生物的单链mRNAmRNA单链互补单链互补DNADNA双链双链cDNAcDNA片段片段导入受体菌中储存导入受体菌中储存与载体连接与载体连接cDNAcDNA文库文库反（逆）转录酶反（逆）转录酶DNADNA聚合酶聚合酶反转录法：反转录法：cDNAcDNA的合成流程图解的合成流程图解基因文库的构建方法之二基因文库的构建方法之二.14.15( (二二) )利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因PCR聚

7、合酶链式反应聚合酶链式反应 是一项生物是一项生物体外复制体外复制特定特定DNA片片段的核酸合成段的核酸合成技术技术。通过此技术，可。通过此技术，可获取大量的目的基因。获取大量的目的基因。.16 过程过程高温变性（高温变性（解旋为单链解旋为单链）低温退火（低温退火（引物与单链互补结合引物与单链互补结合）适温延伸（适温延伸（在在TaqTaq酶的作用下合成酶的作用下合成 与模板互补的与模板互补的DNADNA双链双链）重复循环重复循环.17实际具体过程实际具体过程.18PCR技术技术 原理：原理： 前提：前提： 原料原料 方式方式PCR扩增仪扩增仪DNA复制复制一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的

8、基因的核苷酸序列：以：以_方式扩增，方式扩增， 即即_（n n为扩增循环的次数）为扩增循环的次数）指数指数2 2n n模板模板DNA；DNA引物；四种脱氧引物；四种脱氧核苷酸；热稳定核苷酸；热稳定DNA聚合酶聚合酶（Taq酶）酶）.19PCR技术扩增与技术扩增与DNA复制的比较复制的比较PCR技术技术DNA复制复制相相同同点点原理原理原料原料条件条件不不同同点点解旋解旋方式方式场所场所酶酶结果结果碱基互补配对碱基互补配对四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸模板、能量、酶模板、能量、酶DNA在高温下变性解旋在高温下变性解旋解旋酶催化解旋酶催化体外复制体外复制细胞核内细胞核内热稳定的热稳定的DNA聚合酶聚

9、合酶细胞内的细胞内的DNA聚合酶聚合酶大量的大量的DNA片段片段形成整个形成整个DNA分子分子.20DNA合成仪合成仪推推测测推推测测合合成成.21基因表达载体的作用基因表达载体的作用a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代b、同时使目的基因能表达和发挥作用、同时使目的基因能表达和发挥作用目的基因能直接进入受体细胞吗目的基因能直接进入受体细胞吗?.22.23.24目的基因目的基因.25.26基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：复制原点复制原点+ +目的基因目的基因+ +启动子启动子+ +终止子终止子+ +标记基因标记基因它们各自它们各自的作

10、用是的作用是什么什么?.27启动子：启动子：位于基因的首端的位于基因的首端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片断，它是片断，它是RNARNA聚合酶识别和结合的部聚合酶识别和结合的部位，有了它才能位，有了它才能驱动基因转驱动基因转录出录出mRNAmRNA，最终获得蛋白质，最终获得蛋白质终止子：终止子：位于基因的尾端的位于基因的尾端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片断，片断，能终能终止止mRNAmRNA的转录的转录标记基因标记基因的作用是的作用是为了为了鉴别鉴别受体细胞中是否含有目的基受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细因，从而将有目的基因的细胞筛选出来胞筛选出来.281、（多选）一

11、个基因表达载体的构建应包括、（多选）一个基因表达载体的构建应包括A目的基因目的基因 B启动子启动子 C终止子终止子 D标记基因标记基因ABCD2、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是A启动子是与启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起聚合酶识别和结合的部位，是起始密码始密码B启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对短片段，对mRNA的转录起调控作用的转录起调控作用C标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选从而便于筛选D基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同基因表

12、达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别而有所差别A3、目前转基因工程可以、目前转基因工程可以A. 打破地理隔离但不能突破生殖隔离打破地理隔离但不能突破生殖隔离B. 打破生殖隔离但不能突破地理隔离打破生殖隔离但不能突破地理隔离C. 完全突破地理隔离和生殖隔离完全突破地理隔离和生殖隔离D. 部分突破地理隔离和生殖隔离部分突破地理隔离和生殖隔离 C.29三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞.301、将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌）农杆菌转化法转化法特点特点:能感染能感染双子叶植物双子叶植物和和祼子植物祼子植物,对对单子叶植物无感染能力单子叶植物无感染

13、能力Ti质粒质粒的的TDNA可转移至受体细可转移至受体细胞并整合到其染色体上胞并整合到其染色体上转化过程转化过程:Ti质粒质粒目的基因目的基因构建构建表表达达载载体体导入导入植植物物细细胞胞插入插入植物细胞植物细胞染色染色DNA表达表达新新性性状状转入转入农农杆杆菌菌.31（2）基因枪法）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。的基因与其整合并表达的方法。.32（3）花粉通道法）花粉通道法 植

14、物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。借助花粉管通道进入受体细胞。.332、将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞方法方法:显微注射技术显微注射技术操作程序操作程序:提纯含目的基提纯含目的基因表达载体因表达载体取受精卵取受精卵显微注射显微注射移植到子宫移植到子宫受精卵发育受精卵发育新性状动物

15、新性状动物.343、将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞常用法常用法：Ca2+处理处理常用菌常用菌：大肠杆菌：大肠杆菌微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因：繁殖快繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少、多为单细胞、遗传物质相对少过程：过程：Ca2+处理处理大肠杆菌大肠杆菌感受态感受态细胞细胞表达载体表达载体与感受态与感受态细胞混合细胞混合感受态细感受态细胞吸收胞吸收DNA.35将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞（一）转化：（一）转化： （二）方法（二）方法将目的基因导入将目的基因导入植物细胞植物细胞将目的基因导入将目的基因导入动物细胞动物细胞将目的基因导入将目的基因导入

16、微生物细胞微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞感受态细胞目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达.36( (四四) )目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定检测检测导入检测：目的基因是否导入受体细胞导入检测：目的基因是否导入受体细胞方法方法 DNADNA分子杂交分子杂交表达检测表达检测转录检测转录检测分子杂交分子杂交翻译检测翻译检测抗原抗体抗原抗体杂交杂交分分子子检检测测法法鉴定鉴定抗虫鉴定抗虫鉴定抗病鉴定抗病鉴定活性鉴定等活性鉴定等个体

17、水平的鉴定个体水平的鉴定.37.38思考与探究：思考与探究：2.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分你能分析出不能导入单子叶植物的原因吗析出不能导入单子叶植物的原因吗?若将一个抗病基因导若将一个抗病基因导入小麦中入小麦中,理论上讲你应该怎样做理论上讲你应该怎样做?要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；要加趋化和诱导的物质，一般为乙可以侵染单子叶植物；要加趋化和诱导的物质，一般为乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物组织的受伤部位靠拢酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植

18、物组织的受伤部位靠拢（趋化性）和激活农杆菌的（趋化性）和激活农杆菌的Vir区（诱导）的基因，使区（诱导）的基因，使T-DNA转移并插入到染色体转移并插入到染色体DNA上。上。3.3.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的

19、，内质网和高尔基复合体存在和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。.39复习题复习题1）将目的基因导入受体细胞有哪些方）将目的基因导入受体细胞有哪些方法法?(试举例说明试举例说明)2）简述农杆菌转化法）简述农杆菌转化法.40.41 哪些转基因作物已进入大规模商业化哪些转基因作物已进入大规模商业化应用阶段应用阶段? ?转基因大豆、玉米、棉花和油菜转基因大豆、玉米、棉花和油菜.421.1.虫害给农作物带来了哪些影响虫

20、害给农作物带来了哪些影响? ? 传统农业如何防治害虫传统农业如何防治害虫? ? 有哪些不足有哪些不足? ?2.2.现在已有哪些抗虫植物问世现在已有哪些抗虫植物问世? ?.433. 3. 抗虫基因抗虫基因BtBt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等请阅读请阅读P18P18生物资料技术卡生物资料技术卡, ,了解一些抗虫基了解一些抗虫基因的抗虫机理。因的抗虫机理。4.4.抗虫棉的目的基因是什么抗虫棉的目的基因是什么? ?目的基因从何目的基因从何而来而来? ?.441.1.什么是病原微生物？有哪些种类？什么是病

21、原微生物？有哪些种类？引起生物生病的微生物，主要有病毒、引起生物生病的微生物，主要有病毒、真菌和细菌等真菌和细菌等2 2. .在抗病转基因植物中使用最多的是什么基因？在抗病转基因植物中使用最多的是什么基因？病毒外壳蛋白（病毒外壳蛋白（coat proteincoat protein，CPCP）基因；）基因； 病毒的复制酶基因病毒的复制酶基因.45在抗真菌转基因植物在抗真菌转基因植物中中使用什么基因？使用什么基因？几丁质酶基因和抗毒素合成基因几丁质酶基因和抗毒素合成基因 .461.1.哪些环境条件会造成农作物低产、减产？哪些环境条件会造成农作物低产、减产？盐碱、干旱、低温和涝害等盐碱、干旱、低温

22、和涝害等2.2.盐碱和干旱对农作物的危害与什么有关？盐碱和干旱对农作物的危害与什么有关？细胞内的渗透压调节细胞内的渗透压调节在抗盐碱和抗干旱作物中使用了什么基因？在抗盐碱和抗干旱作物中使用了什么基因？ 调节细胞渗透压的基因调节细胞渗透压的基因 .473.3.转基因耐寒的烟草和番茄中哪种目的基因转基因耐寒的烟草和番茄中哪种目的基因提高了其抗寒能力？目的基因从何而来？提高了其抗寒能力？目的基因从何而来？鱼的抗冻蛋白基因鱼的抗冻蛋白基因 .484.4.抗除草剂基因有何用途？抗除草剂基因有何用途？喷洒除草剂时，杀死田间的杂草而不损伤作物喷洒除草剂时，杀死田间的杂草而不损伤作物.49人体（或其它脊椎动物

23、）必不可少，而机人体（或其它脊椎动物）必不可少，而机体内又不能合成的，必须从食物中补充的体内又不能合成的，必须从食物中补充的氨基酸，称氨基酸，称必需氨基酸必需氨基酸。必需氨基酸必需氨基酸共有种：赖氨酸、色氨酸、共有种：赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸（甲硫氨酸）、苏氨酸苯丙氨酸、蛋氨酸（甲硫氨酸）、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸。如果饮食中经常缺少必需氨基酸，可影响如果饮食中经常缺少必需氨基酸，可影响健康。健康。 另外另外1212种氨基酸是人体细胞能够合成的叫种氨基酸是人体细胞能够合成的叫做非必需氨基酸。做非必需氨基酸。.50你知道哪些食品中缺少必需氨基酸？你知道哪

24、些食品中缺少必需氨基酸？如何用转基因的方法加以改良？如何用转基因的方法加以改良？将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物改变必需氨基酸合成途径中某种关键酶的活性改变必需氨基酸合成途径中某种关键酶的活性.51转基因延熟番茄的目的基因是什么？转基因延熟番茄的目的基因是什么？控制番茄果实成熟的基因控制番茄果实成熟的基因.52转基因矮牵牛的目的基因转基因矮牵牛的目的基因是什么？是什么？与植物花青素代谢有与植物花青素代谢有关的基因关的基因转基因蓝玫瑰转基因蓝玫瑰.53.54动物品种改良、建立生物反应器、器官移植等动物品种改良、建立生物反应器、器官移植等导入外源

25、生长激素基因导入外源生长激素基因.55举例说明举例说明将将肠乳糖酶基因肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，转基因牛导入奶牛基因组，转基因牛分泌的乳汁中乳糖的含量大大减低。分泌的乳汁中乳糖的含量大大减低。.56.57将将药物蛋白基因药物蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的受精卵中，将受精卵送入母导入哺乳动物的受精卵中，将受精卵送入母体，使其发育成转基因动物。体，使其发育成转基因动物。转基因动物进入转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁生产所需要的泌乳期后，可以通过分泌乳汁生产所需要的药品，称

26、为药品，称为乳腺生物反应器乳腺生物反应器或乳房生物反应或乳房生物反应器。器。乳腺生物反应器乳腺生物反应器乳腺生物反应器的优点：产量高；质量好乳腺生物反应器的优点：产量高；质量好；成本低；易提取。；成本低；易提取。 .58获取目的基因（例如血清白蛋白基因）获取目的基因（例如血清白蛋白基因）构建基因表达载体（在血清白蛋白基因前加构建基因表达载体（在血清白蛋白基因前加特异表达的启动子）特异表达的启动子）显微注射导入哺乳动物受精卵中显微注射导入哺乳动物受精卵中形成胚胎形成胚胎将胚胎送入母体动物将胚胎送入母体动物发育成转基因动物发育成转基因动物思考思考: :用基因工程技术实现动物用基因工程技术实现动物乳

27、腺生物反应器乳腺生物反应器的操作过程是怎样的？的操作过程是怎样的？ .59利用基因工程对猪的器官进行改造利用基因工程对猪的器官进行改造方法：方法：将器官供体基因组导入某种调将器官供体基因组导入某种调节因子，以抑制抗原决定基因的表达节因子，以抑制抗原决定基因的表达或设法除去抗原决定基因或设法除去抗原决定基因，再结合克，再结合克隆技术，培育出没有免疫排斥反应的隆技术，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官转基因克隆猪器官.60.61基因工程药品包括：细胞因子（即淋巴因子基因工程药品包括：细胞因子（即淋巴因子如白细胞介素如白细胞介素22、干扰素）、抗体、疫苗、干扰素）、抗体、疫苗、激素等、激素等.

28、62.63.64.65.66利用基因工程培育的利用基因工程培育的“指示生物指示生物”能十能十分灵敏地反映环境污染的情况，却不易因分灵敏地反映环境污染的情况，却不易因环境污染而大量死亡，甚至还可以吸收和环境污染而大量死亡，甚至还可以吸收和转化污染物。转化污染物。.67.68 把把正常基因正常基因导入病人体内，使该基因的表达导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到产物发挥功能，从而达到治疗疾病治疗疾病的目的，是治的目的，是治疗疗遗传病遗传病的最有效的手段。的最有效的手段。2、实例：、实例： 将将腺苷酸脱氨酶基因腺苷酸脱氨酶基因转入取自患者的淋转入取自患者的淋巴细胞中，再将这种淋巴细胞转入

29、患者体内。巴细胞中，再将这种淋巴细胞转入患者体内。(1)对严重复合型免疫缺陷症的治疗对严重复合型免疫缺陷症的治疗.69.703 3、基因治疗的类型、基因治疗的类型体外基因治疗体外基因治疗：先从病人体内获得某种细：先从病人体内获得某种细胞，进行培养，然后在胞，进行培养，然后在体外完成基因转移体外完成基因转移，再筛选成功转移的细胞扩增培养，最后，再筛选成功转移的细胞扩增培养，最后重新输入患者体内。重新输入患者体内。体内基因治疗体内基因治疗：直接向人体组织细胞中转移：直接向人体组织细胞中转移的治病方法。（如将治疗囊性纤维病的正常的治病方法。（如将治疗囊性纤维病的正常基因转入患者肺组织）基因转入患者肺

30、组织）4 4、基因治疗的发展现状：、基因治疗的发展现状：处于初期的临床处于初期的临床试验阶段试验阶段.71知识回顾：基因诊断知识回顾：基因诊断.72上图四种质粒含有上图四种质粒含有E1和和E2两种限制酶的识别，两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性表示抗青霉素的抗性基因，基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。表示抗四环素的抗性基因。回答下列问题：回答下列问题：（1）基因工程中使用的限制酶的特点是）基因工程中使用的限制酶的特点是 DNA分子。分子。（2）将两端用）将两端用E1切开的切开的Tcr基因与用基因与用E1切开的质粒切开的质粒X1混合连接，连接混合连接，连接后获得的质粒类型有后获得的质粒

31、类型有 。（可多选）。（可多选）AX1 BX2 CX3 DX4（3）将目的基因导入大肠杆菌，需要用）将目的基因导入大肠杆菌，需要用 对受体细胞进行处理。对受体细胞进行处理。（4）若将上图所示）若将上图所示X1、X2、X3、X4四种质粒导入抗生素敏感四种质粒导入抗生素敏感大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有 、 。.73（1）特异性识别并切割（2）ABC（3）Ca2+（或CaCl2） （4）无质粒的细胞（或未导入成功的细胞） 含X

32、-3的细胞 （1）基因文库 限制性内切酶、DNA连接酶 （2）基因工程（或者转基因技术） 病毒b （3）O2和CO2.74思考与探究思考与探究:根据所学内容，试概括写出基因工程解决了根据所学内容，试概括写出基因工程解决了哪些生活、生产中难以解决的问题。哪些生活、生产中难以解决的问题。基因工程可以基因工程可以生产人类需要的药物生产人类需要的药物，如胰岛素、，如胰岛素、干扰素等。我们干扰素等。我们吃的某些食品吃的某些食品如番茄、大豆等也如番茄、大豆等也可以是基因工程产品可以是基因工程产品。农业生产中的。农业生产中的抗虫棉、抗抗虫棉、抗病毒烟草、抗除草剂大豆病毒烟草、抗除草剂大豆等都已进入商品化生产等都已进入商品化生产，上述产品有些是常规方法难以生产的或者生产，上述产品有些是常规方法难以生产的或者生产成本过高。成本过高。.75非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区RNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点外显子外显子内含子内含子终止子终止子基因的结构基因的结构启动子启动子原核原核真核真核