DNA克隆技术PPT培训课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《DNA克隆技术PPT培训课件.ppt》由用户(三亚风情)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DNA 克隆技术 PPT 培训 课件
- 资源描述:
-
1、DNADNA克隆克隆技术技术目目 录录一、概述一、概述(一)基本概念(一)基本概念 1 克隆克隆(clone)来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为获取同一拷贝的过程称为克隆化克隆化(cloning), 即即无性繁殖无性繁殖。2 动物克隆动物克隆3 杂交杂交目目 录录克隆羊:克隆羊: 个体水平个体水平细胞克隆:细胞克隆: 细胞水平细胞水平DNA克隆:克隆: 分子水平分子水平目目 录录卵细胞C母绵羊子宫母绵羊母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵细胞细胞拆合技术妊娠目目 录录目目 录录目目 录录5 DN
2、A克隆克隆应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的的或人工的DNA)与载体)与载体DNA接合成一具有自我接合成一具有自我复制能力的复制能力的DNA分子分子复制子复制子(replicon),继而,继而通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一D N A 分 子 , 也 称分 子 , 也 称 基 因 克 隆 或 重 组基 因 克 隆 或 重 组 D
3、N A (recombinant DNA) 。 目目 录录生物技术工程生物技术工程: 基因工程、蛋白质工程、基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等酶工程、细胞工程等目的目的 分离获得某一感兴趣的基因或分离获得某一感兴趣的基因或DNA 获得感兴趣基因的表达产物(蛋白质)获得感兴趣基因的表达产物(蛋白质) 6 基因工程基因工程(genetic engineering) 实现实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程,基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程,又称又称重组重组DNA工艺学工艺学。目目 录录目目 录录目目 录录(二)重组(二)重组DNA技术的发展史技术的发展史年年 G.J.Mend
4、el的豌豆杂交试验的豌豆杂交试验1944年年 O.T.Avery的肺炎球菌转化实验的肺炎球菌转化实验1973年年 美国斯坦福大学的科学家构建美国斯坦福大学的科学家构建第一个第一个重组重组DNA分子分子1977年年 美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家第一家遗传工遗传工程公司,专门应用重组程公司,专门应用重组DNA技术制造医学上重要的药物。技术制造医学上重要的药物。1980年年 开始建造开始建造第一家第一家应用重组应用重组DNA技术生产胰岛素的工厂技术生产胰岛素的工厂1997年年 英国罗林研究所成功的克隆了英国罗林研究所成功的克隆了多莉多莉目目 录录目目
5、 录录 重组重组DNA医药产品医药产品目目 录录目目 录录(三)重组(三)重组DNA技术技术路线技术技术路线目的基因的获取目的基因的获取DNA导入受体菌导入受体菌外源基因与载体的连接外源基因与载体的连接克隆载体的选择和构建克隆载体的选择和构建重组体的筛选重组体的筛选克隆基因的表达克隆基因的表达 目目 录录二、重组二、重组DNA技术中常用的工具酶技术中常用的工具酶目目 录录(一)限制性核酸内切酶(一)限制性核酸内切酶1 核酸酶的分类核酸酶的分类2 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)是是识别识别DNA的特异序列的特异序列, 并在识别位点或其
6、周并在识别位点或其周围切割双链围切割双链DNA的一类内切酶。的一类内切酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC GBam H目目 录录第一个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写;第一个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写;第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写;第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写;第四个字母代表株;第四个字母代表株;用罗马数字表示发现的先后次序。用罗马数字表示发现的先后次序。3 命名命名Hin d 属属 系系 株株 序序Haemophilus influenzae d株株流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌d株的第三种酶株的第三种酶目目 录录共性共性 (1)只作用于双链)只作用于
7、双链DNA (2)活性有赖于)活性有赖于Mg2+ (3)碱基识别特异性)碱基识别特异性 (4)切口形式)切口形式6 使用原则及注意事项使用原则及注意事项 4 分类分类、(基因工程技术中常用(基因工程技术中常用型)型)目目 录录类酶识别序列特点类酶识别序列特点 回文结构回文结构(palindrome) 切口切口 :平端切口平端切口、粘端切口粘端切口目目 录录Bam HGTCCAGGCCTAGGATCC GGGATCCCCTAGGHindGTCGACCAGCTGGACCTG平端切口平端切口粘端切口粘端切口目目 录录n(二)大肠杆菌(二)大肠杆菌DNA聚合酶聚合酶n(三)(三)T4噬菌体噬菌体DNA
8、聚合酶聚合酶n(四)(四)TaqDNA聚合酶聚合酶n(五)反转录酶(五)反转录酶n(六)连接酶(六)连接酶n(七)末端(脱氧核苷酸)转移酶(七)末端(脱氧核苷酸)转移酶n(八)碱性磷酸酶(八)碱性磷酸酶目目 录录 直接从染色体直接从染色体DNADNA中分离中分离 人工合成人工合成 1.601.60元元/ /碱基碱基 基因文库基因文库 反转录反转录PCR PCR mRNA cDNAmRNA cDNA PCR PCR 直接索取直接索取分分目目 录录 (二)(二) 基因载体基因载体定义定义能携带目的基因进入宿主细胞并且在能携带目的基因进入宿主细胞并且在宿主细胞中进行扩增和表达的一类宿主细胞中进行扩增
展开阅读全文