生物化学实验-9个-PPT课件.ppt

1、3636学时学时植物组织中还原糖和总糖的测定植物组织中还原糖和总糖的测定醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳VcVc的测定的测定琥珀酸脱氢酶的作用和竞争性抑制作用琥珀酸脱氢酶的作用和竞争性抑制作用牛奶中酪蛋白的提取与鉴定牛奶中酪蛋白的提取与鉴定血液中葡萄糖的测定血液中葡萄糖的测定植物组织中植物组织中DNADNA的提取的提取双缩脲测定蛋白质的含量双缩脲测定蛋白质的含量酶的性质酶的性质实实验验内内容容一、分组说明一、分组说明每班分每班分2 2大组大组，每个大组（再分，每个大组（再分2 2或或3 3小组）中小组）中2 2人人一个实验一个实验, ,大组采用循环实验的方法大组采用循环实验的方法, ,同时

2、同时开出不同的开出不同的9 9个实验个实验. . 四、四、预习预习好之后方能进入实验室做实验好之后方能进入实验室做实验（流程图流程图或方框图或方框图），做好实验记录），做好实验记录二、注意实验室卫生、纪律和安全二、注意实验室卫生、纪律和安全 三、实验报告的书写（统一）三、实验报告的书写（统一）目的、原理、步骤、结果及结论、讨论目的、原理、步骤、结果及结论、讨论植物组织中植物组织中DNA的提取与鉴定的提取与鉴定血液中葡萄糖的测定血液中葡萄糖的测定植物组织中还原糖和总糖的测定植物组织中还原糖和总糖的测定Vc的测定的测定琥珀酸脱氢酶的作用和竞争性抑制作用琥珀酸脱氢酶的作用和竞争性抑制作用酪蛋白的提取

3、与鉴定酪蛋白的提取与鉴定酶的性质酶的性质双缩脲测定蛋白质的含量双缩脲测定蛋白质的含量醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳 1 1班班2 2班班第一组实第一组实验验第二组实第二组实验验第三组实第三组实验验第四组实第四组实验验第一次实第一次实验验第一组第一组学生学生第二组第二组第三组第三组第四组第四组第二次实第二次实验验第二组第二组学生学生第一组第一组第四组第四组第三组第三组第三次实第三次实验验第三组第三组学生学生第四组第四组第一组第一组第二组第二组第三次实第三次实验验第四组第四组学生学生第三组第三组第二组第二组第一组第一组生物化学所用的实验技术生物化学所用的实验技术1.1.样品样品: : 动物样

4、品动物样品: : 血清、牛奶、组织血清、牛奶、组织 植物样品：植物样品：果实、叶、茎等果实、叶、茎等为了提取物质，需为了提取物质，需匀浆，研磨开始时加入少匀浆，研磨开始时加入少量研磨缓冲液，边磨边加。量研磨缓冲液，边磨边加。2 2移液管的使用：移液管的使用： 注意：注意：移液管移液管吸管吸管移液管移液管读数读数拿的姿势拿的姿势取液取液放液放液3 3离心机的使用：离心机的使用：平衡（管平衡、机器平衡）缓起和慢停平衡（管平衡、机器平衡）缓起和慢停4 4分光光度计分光光度计机器原理和测定原理（比尔定律）机器原理和测定原理（比尔定律）5 5水浴锅的使用水浴锅的使用实验一、温度、实验一、温度、pHpH及

5、酶的激活剂、抑及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响制剂对酶活性的影响一、目的一、目的：了解酶催化的特异性以及了解酶催化的特异性以及pHpH、温度、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响抑制剂和激活剂对酶活力的影响 二、实验原理二、实验原理 酶的本质是蛋白质，蛋白易变性酶的本质是蛋白质，蛋白易变性 唾液淀粉酶唾液淀粉酶可将淀粉分解成各种糊精、麦芽糖可将淀粉分解成各种糊精、麦芽糖等产物等产物检测水解：可以用遇检测水解：可以用遇碘碘呈不同颜色来观呈不同颜色来观察。察。 淀粉遇碘呈蓝色淀粉遇碘呈蓝色; ;糊精按分子从大到小糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色蓝色、紫色、暗褐色

6、和红色和红色; ;最小最小的糊精和麦芽糖遇碘的糊精和麦芽糖遇碘不呈不呈现颜色现颜色反应。反应。 三、实验步骤三、实验步骤1、淀粉酶液的制备、淀粉酶液的制备水漱口制备。水漱口制备。2、温度对酶活性的影响、温度对酶活性的影响试管号试管号0.5%淀粉淀粉溶液溶液稀释酶液稀释酶液温度温度现象现象1235ml5ml5ml1ml1ml1ml0水浴水浴37水浴水浴沸水浴沸水浴做咀嚼动作12min 在白色比色板上，置碘液在白色比色板上，置碘液2 2滴于各孔中，每滴于各孔中，每隔隔1 1分钟，从第二管中取出反应液分钟，从第二管中取出反应液1 1滴与碘滴与碘混合，观察颜色变化。混合，观察颜色变化。待第二管中反应液

7、遇碘不发生颜色变化待第二管中反应液遇碘不发生颜色变化（即只呈碘的颜色）时，向各管中加入碘（即只呈碘的颜色）时，向各管中加入碘液液1 1滴，摇匀，观察并记录各管颜色，说明滴，摇匀，观察并记录各管颜色，说明温度对酶活性的影响。温度对酶活性的影响。或在各自温度下保温或在各自温度下保温10min3 3、pHpH对酶活性的影响对酶活性的影响 试管试管号号0.5%0.5%淀粉淀粉溶液溶液稀释酶液稀释酶液pHpH现象现象1 12 23 32ml2ml2ml2ml2ml2ml10d10d10d10d10d10dpH 5.0pH 5.0pH 6.8pH 6.8pH 8.0pH 8.0每隔每隔1分钟，从分钟，从p

8、H 6.8管中取出反应液管中取出反应液1滴与碘混合，滴与碘混合，观察颜色变化。观察颜色变化。或在或在37,保温保温1 0min4、酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响、酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响试管试管号号0.5%0.5%淀淀粉溶粉溶液液1%CuSO41%CuSO4溶液溶液0.5%NaC0.5%NaCl l溶液溶液蒸馏水蒸馏水 稀释唾稀释唾液液结果结果1 12 23 32ml2ml2ml2ml2ml2ml1 ml1 ml0 00 00 01ml1ml0 00 00 01ml1ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml分析分析5、酶的高效性、酶的高效性 试管试管号号H2O2生马铃生马

9、铃薯薯熟马铃熟马铃薯薯铁粉铁粉结果结果1 12 23 34 43ml3ml3ml3ml少许少许0 00 00 0少许少许0 00 00 0少许少许分析分析本实验注意事项：加入所有的试剂和酶液后一定要摇匀，最好用吸管加入所有的试剂和酶液后一定要摇匀，最好用吸管轻轻吹打几次。轻轻吹打几次。稀释唾液加入时应迅速，其中放入沸水浴的一管，稀释唾液加入时应迅速，其中放入沸水浴的一管，当唾液加入后应立即放入沸水浴。当唾液加入后应立即放入沸水浴。实验二实验二 牛奶中蛋白质的提取与鉴定牛奶中蛋白质的提取与鉴定 一、实验目的一、实验目的 学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并进行学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并进行鉴定试验

10、鉴定试验二、实验原理二、实验原理 蛋白质等电点蛋白质等电点 沉淀沉淀牛乳和羊乳中含丰富的蛋白质，其中主要是酪牛乳和羊乳中含丰富的蛋白质，其中主要是酪蛋白。蛋白。酪蛋白在羊乳中约占总蛋白量的酪蛋白在羊乳中约占总蛋白量的3/43/4，牛，牛乳中约占总蛋白量的乳中约占总蛋白量的5/65/6。酪蛋白是酸性蛋白，酪蛋白是酸性蛋白，在中性偏碱的环境中，溶解性最高，而在酸性在中性偏碱的环境中，溶解性最高，而在酸性条件下溶解性差，等电点时最低条件下溶解性差，等电点时最低 。将牛乳的将牛乳的pHpH调整至调整至4.84.8，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉淀出来淀出来。用乙醇除去酪

11、蛋白沉淀中不溶于水的用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，得到纯的酪蛋白。所得酪蛋白供定性鉴脂肪，得到纯的酪蛋白。所得酪蛋白供定性鉴定定。鲜牛乳鲜牛乳2Oml2Oml（4040）+2Om+2Om醋酸缓冲液（醋酸缓冲液（4040）边加边摇动边加边摇动离心离心3000r/5min冷却至室温，继续放置冷却至室温，继续放置5分钟分钟清液（乳清）清液（乳清） 沉淀沉淀加热观察现象加热观察现象 醇醇醚混合物洗醚混合物洗1-21-2次次 沉淀沉淀清液清液晾干，鉴定晾干，鉴定弃掉弃掉三、实验步骤三、实验步骤1、酪蛋白的制备、酪蛋白的制备2 2、酪蛋白的性质鉴定、酪蛋白的性质鉴定 1 1）. .溶解度观察溶解度

12、观察 溶液溶液H H2 2O O10%NaCl 10%NaCl 0.5%Na0.5%Na2 2COCO3 30.1M NaOH0.1M NaOH 0.2%HCl0.2%HCl饱和饱和Ca(OH)Ca(OH)2 2试剂试剂量量2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml2ml酪蛋酪蛋白白少许少许少许少许少许少许少许少许少许少许少许少许溶解溶解情况情况 2 2）米伦反应：）米伦反应： 少许酪蛋白少许酪蛋白+lml+lml H H2 2O+O+米伦试剂米伦试剂1010滴，滴， 振摇，加热振摇，加热 观察其颜色变化观察其颜色变化3 3）含硫）含硫 ( (胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸胱

13、氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸) )测定测定: :少量酪蛋白少量酪蛋白+lmlO.1M NaOH+lmlO.1M NaOH+ 5%+ 5%醋酸铅醋酸铅1-31-3滴滴 观察现象观察现象煮沸煮沸注意事项牛奶和醋酸缓冲液体积一定要相等牛奶和醋酸缓冲液体积一定要相等注意离心时要对角配平注意离心时要对角配平实验三实验三 血液葡萄糖的测定血液葡萄糖的测定 一、实验目的一、实验目的 学习和掌握学习和掌握FolinFolin- -吴宪法测定血糖的方法吴宪法测定血糖的方法二、实验原理二、实验原理G Cu2+碱性碱性氧化亚铜氧化亚铜 磷钼酸磷钼酸 钼蓝钼蓝 420nm处有大吸收峰处有大吸收峰三、实验步骤三、实验步骤1.

14、1.样品：样品： 钨酸法制备钨酸法制备1 1：1010全血无蛋白滤液全血无蛋白滤液( (相当于将原血稀释了相当于将原血稀释了1010倍倍) )。 2、反应、反应 血糖血糖试剂（试剂（mlml）空白管空白管低浓度标准管低浓度标准管高浓度标准管高浓度标准管测定管测定管无蛋白血滤液无蛋白血滤液蒸馏水蒸馏水标准葡萄糖液标准葡萄糖液碱性铜试剂碱性铜试剂2 2.0.02 2.0.01.01.01.01.02.02.02.02.02.02.0 1.01.0 1.0 1.0 2.0 2.0混匀，置沸水浴中煮混匀，置沸水浴中煮8 8分钟，取出，用流动的自来水冷却分钟，取出，用流动的自来水冷却3 3分钟分钟（切勿

15、摇动血糖管）（切勿摇动血糖管）磷钼酸试剂磷钼酸试剂反应反应3min3min后，振摇将气后，振摇将气体排净体排净 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.01 1：4 4磷钼酸溶液加至磷钼酸溶液加至2525252525252525ODOD4204202 2、计算、计算测定管光密度测定管光密度 100100 0.2 0.2 = =葡萄糖葡萄糖mg/100ml 标准管光密度标准管光密度 0.10.1高标准管：高标准管：低标准管：低标准管： 0.1 0.1 = =葡萄糖葡萄糖mg/100ml 标准管光密度标准管光密度 0.10.1测定管光密度测定管光密度 100100标准葡萄糖应用液的浓度

16、为标准葡萄糖应用液的浓度为0.1mg/mL注意事项一定要等水沸后，再放人血糖管。血糖管可用橡皮一定要等水沸后，再放人血糖管。血糖管可用橡皮筋扎成束，直立水中使受热一致。加热要准确筋扎成束，直立水中使受热一致。加热要准确8 8分分钟，时间过久，呈色较深钟，时间过久，呈色较深; ;时间不足。颜色过浅。时间不足。颜色过浅。均影响结果的准确性。冷却时，切不可摇动血糖管，均影响结果的准确性。冷却时，切不可摇动血糖管，以防还原的氧化亚铜被空气中氧所氧化，降低实际以防还原的氧化亚铜被空气中氧所氧化，降低实际结果结果。用用1 1：4 4磷钼酸溶液加至磷钼酸溶液加至2525刻度处后，用橡皮塞塞紧刻度处后，用橡皮

17、塞塞紧管口颠倒摇匀，用空白管调零，在管口颠倒摇匀，用空白管调零，在420nm420nm波长处进波长处进行比色，行比色，实验四、血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验四、血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 一、实验目的一、实验目的学习醋酸纤维薄膜电泳的学习醋酸纤维薄膜电泳的操作操作技术，了解电技术，了解电泳技术的基本泳技术的基本原理原理。二、实验原理二、实验原理电泳：带电粒子在电场中泳动的现象。电泳：带电粒子在电场中泳动的现象。电泳迁移率电泳迁移率: :单位电场下的电泳速度。单位电场下的电泳速度。血清蛋白血清蛋白: :清蛋白、清蛋白、 球蛋白、球蛋白、球蛋球蛋白、白、球蛋白和各种脂蛋白等球蛋白和各种脂蛋白等 三

18、、实验步骤三、实验步骤 浸泡：浸泡：20分钟分钟 点样点样:吸干，吸干，无光泽面无光泽面朝上，在膜条一端朝上，在膜条一端2-3厘米处点样品。厘米处点样品。电泳：电泳：点样端在负极点样端在负极,2mA/,2mA/膜膜, ,点样面向下点样面向下时间时间60min60min染色染色: 5min: 5min漂洗漂洗:2次，底色脱净为止次，底色脱净为止实验五实验五 双缩脲测定蛋白质含量双缩脲测定蛋白质含量一、实验目的一、实验目的 掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理二、实验原理二、实验原理 双缩脲在碱性溶液中与双缩脲在碱性溶液中与CuCu2+2+产生产生紫色的络合物紫色的络合

19、物, ,这一反这一反应称应称“双缩脲反应双缩脲反应”。蛋白质分子中肽键，也能与蛋白质分子中肽键，也能与CuCu2+2+ 发生双缩脲反应，发生双缩脲反应，溶液紫色的深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，而溶液紫色的深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关。与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关。该紫色的络合物在该紫色的络合物在540nm540nm处有最大吸收值，处有最大吸收值，通过测定通过测定540nm540nm处的吸光值用于处的吸光值用于蛋白质蛋白质含量的测定。含量的测定。三、实验步骤三、实验步骤1 1、标准曲线制作、标准曲线制作（已制好）（已制好）2 2、样品测定、样品

20、测定试管号试管号血清稀血清稀释液释液H H2 2O O双缩脲双缩脲试剂试剂OD540nmOD540nm空白空白样品样品1 1样品样品2 20ml0ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml1 1 ml0.50.5 ml0.50.5ml4 4 ml4 4 ml4 4 ml3 3、结果计算、结果计算 标准曲线上查得蛋白 mg稀释倍数 血清蛋白含量（mg/100ml） = = 测定取液 ml 100 OD5402.3227稀释倍数 血清蛋白含量（mg/100ml） = = 测定取液 ml 100100 实验六实验六 维生素维生素C C的定量测定的定量测定（2 2，6-6-二氯酚靛酚滴定法）二氯酚靛

21、酚滴定法） 一、实验目的一、实验目的掌握滴定法测定掌握滴定法测定VcVc含量的原理和操作。含量的原理和操作。二、实验原理二、实验原理 还原型还原型VcVc能还原染料能还原染料2,6-2,6-二氯酚靛酚钠盐，二氯酚靛酚钠盐，2,6-2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中，呈二氯酚靛酚在酸性溶液中，呈红色红色，被还原后，被还原后变为变为无色。无色。所以，滴定液呈淡红色所以，滴定液呈淡红色3030秒不退色，即为终点。秒不退色，即为终点。用标准用标准VcVc滴定与样品做比对。滴定与样品做比对。 三、实验步骤三、实验步骤1.提取提取: 2.0克松针克松针+少量少量 2%草酸草酸 匀浆匀浆 3500rpm，10m

22、in离心后离心后 用用2%草酸定容到草酸定容到50毫升毫升 2 2、滴定、滴定（1）标准液滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液）标准液滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液10毫升（含毫升（含1.0毫克抗坏血酸）置毫克抗坏血酸）置100毫升锥形瓶毫升锥形瓶中，用滴定管以中，用滴定管以0.1%2，6一二氯酚靛酚滴至淡红一二氯酚靛酚滴至淡红色出现，保持色出现，保持15秒钟不退色即为滴定终点秒钟不退色即为滴定终点;由所用由所用染料的体积计算出染料的体积计算出1毫升染料相当于多少毫克抗坏毫升染料相当于多少毫克抗坏血酸。血酸。(2)样液滴定样液滴定:准确吸取滤液两份，每份准确吸取滤液两份，每份10毫升分别毫升分别放人

23、放人100毫升锥形瓶内，滴定方法同前。毫升锥形瓶内，滴定方法同前。空白滴定：准确吸取空白滴定：准确吸取10毫升毫升2%草酸溶液，放入草酸溶液，放入100毫升锥形瓶中，用上述方法滴定至终点，记毫升锥形瓶中，用上述方法滴定至终点，记录所用染料体积（草酸溶液有一定的还原性，但录所用染料体积（草酸溶液有一定的还原性，但很弱，计算可忽略不计）。很弱，计算可忽略不计）。3 3、计算、计算计算1000克样品所含维生素C的毫克数。 （V1V2）KV X = 1000 WV3式中：X ：1000克样品所含维生素C毫克数W ：称取样品重量毫克数V1：滴定样品所用染料毫升数V2：滴定空白所用染料毫升数V3：样品测定

24、时所用滤液毫升数（即10毫升）V ：样品提取液稀释至总体积（即50毫升）K ：1毫升染料所能氧化维生素C之毫克数，可由标定算出。注意事项选择样品尽量选择绿色的新鲜的松针选择样品尽量选择绿色的新鲜的松针滴定过程宜迅速，一般不超过滴定过程宜迅速，一般不超过2 2分钟。分钟。实验七实验七 植物组织中还原糖和总糖植物组织中还原糖和总糖的含量测定的含量测定一、实验目的 掌握比色测定还原糖和总糖测定的基本原理和操作。二、实验原理 植物植物总糖总糖非还原糖：非还原糖：还原糖：还原糖：单糖、麦芽糖单糖、麦芽糖，可用水溶液提取。，可用水溶液提取。蔗糖和淀粉蔗糖和淀粉，可用酸水解后为还原糖，可用酸水解后为还原糖还

25、原糖还原糖碱性碱性3，5二硝基水杨酸二硝基水杨酸糖酸及糖酸及其它产其它产物物 3氨基氨基5硝基硝基水杨酸（棕红色）水杨酸（棕红色）540nm有强吸收有强吸收水解水解加了加了n个水个水三、实验步骤三、实验步骤1 1、总糖的测定、总糖的测定0.5g 0.5g 面粉面粉+ +10ml10ml 6N6N HCl+ HCl+15ml 15ml H H2 2O O煮煮20min20min，取，取2d2d加碘碘化钾溶液检测是否加碘碘化钾溶液检测是否完全水解（水解不显蓝）完全水解（水解不显蓝）加加1d1d酚酞，用酚酞，用6N NaOH6N NaOH调至微红，定容到调至微红，定容到100ml100ml，混匀，过

26、滤，稀释混匀，过滤，稀释1010倍后待测。倍后待测。2 2、还原糖的测定、还原糖的测定1.5g 1.5g 面粉面粉+ +少量少量H H2 2O O混匀混匀+ + 50ml50ml H H2 2O O5050，20min20min，4000rpm,10min 4000rpm,10min 取上清，取上清，20ml20ml洗渣，合并上清，定容到洗渣，合并上清，定容到100ml100ml，混匀，过滤，待测。混匀，过滤，待测。3 3、总糖和还原糖的测定、总糖和还原糖的测定还原还原糖糖还原还原糖糖总糖总糖 总糖总糖 空白空白(水水)测定液（测定液（ml）221103 3，5 5二硝基水杨酸二硝基水杨酸（m

27、l）1.51.51.51.51. 5H2O00112煮煮5min，取出立即放入冷水，冷却后定容到，取出立即放入冷水，冷却后定容到20ml，混匀，测定，混匀，测定OD540nm,对标准曲线查还原糖的量。对标准曲线查还原糖的量。OD540nm4 4、计算、计算还原糖还原糖=提取体积提取体积测定体积测定体积100样品毫克数样品毫克数标准曲线得到标准曲线得到还原糖的量还原糖的量总糖总糖=标线得到还标线得到还原糖的量原糖的量提取体积提取体积测定体积测定体积样品毫克数样品毫克数稀释倍数稀释倍数1000.9实验八实验八 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察争性抑制的观察一、实验目的

28、了解琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制剂对其活性的抑制。二、实验原理琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶延胡索酸延胡索酸 琥珀酸琥珀酸甲烯蓝甲烯蓝 甲烯白甲烯白 FADFADH2无氧无氧丙二酸丙二酸三、实验步骤三、实验步骤1 1、酶的制备、酶的制备猪心猪心1.52g +1/15M磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液34ml 匀浆匀浆1/15M磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液67ml,放置放置30min2000r/min 离心离心10min,取上清备用取上清备用. 2 2、酶促反应、酶促反应试管试管号号酶液酶液( (滴滴) )琥珀酸琥珀酸钠溶液钠溶液丙二酸丙二酸钠溶液钠溶液蒸馏蒸馏水水甲烯蓝甲烯蓝溶液溶液石蜡油石蜡油 现

29、象变化现象变化37,30min37,30min内内) )1 15d5d5d5d- -25d25d2d2d10d10d2 25d5d煮沸煮沸5d5d- -25d25d2d2d10d10d3 35d5d5d5d5d5d20d20d2d2d10d10d4 45d5d25d25d5d5d0d0d2d2d10d10d或将反应体系放大或将反应体系放大1-2倍倍实验九实验九 植物组织中植物组织中DNADNA的提取与鉴定的提取与鉴定 一、实验目的一、实验目的掌握掌握DNADNA的提取方法。的提取方法。二、实验原理二、实验原理 DNA +RNAPrPr+DNPRNPDNP在在1M的的NaCl中的溶解度最大中的溶

30、解度最大 RNP在低盐的溶解度最大在低盐的溶解度最大 可分离可分离DNPDNP和和RNPRNPSDSDNAPrDNPC:I C:I 除去蛋白除去蛋白 95%95%的乙醇的乙醇 DNADNA二苯胺法鉴定二苯胺法鉴定酸解酸解脱氧核糖脱氧核糖 嘌呤嘌呤羟基羟基酮基戊醛酮基戊醛 二苯胺二苯胺 蓝色的蓝色的化合物化合物沉淀沉淀几个试剂的作用几个试剂的作用柠檬酸盐、柠檬酸盐、EDTAEDTA 防止防止DNADNA酶对酶对DNADNA的降解的降解 高氯酸盐、乙醇高氯酸盐、乙醇防止酸性物质（可溶性糖、防止酸性物质（可溶性糖、无机磷）、色素的干扰无机磷）、色素的干扰 C:IC:I 变性蛋白的作用，去除脂类变性蛋

31、白的作用，去除脂类氯仿一异戊醇氯仿一异戊醇 三、实验步骤三、实验步骤研磨成匀浆研磨成匀浆加入等体积的加入等体积的C:I振荡振荡30秒，秒，静止片刻静止片刻 4000rpm,5min转入烧杯，用研磨缓冲液洗几次转入烧杯，用研磨缓冲液洗几次豆苗豆苗 5g+5ml 研磨缓冲液研磨缓冲液0.1g SDS取上清，取上清，7272水浴水浴3 34min4min，灭活，灭活DNADNA酶酶加入加入1/4 1/4 体积体积5M5M高氯酸钠高氯酸钠加入加入C:I，振荡，振荡30秒，秒，4000rpm,5min取上清，加入取上清，加入2 2倍倍体积的冰冷体积的冰冷95%95%的乙醇的乙醇 慢加，用玻棒同一方向绕；或离心慢加，用玻棒同一方向绕；或离心 弃去下面两层弃去下面两层( (细胞碎片，细胞碎片，变性蛋白及氯仿变性蛋白及氯仿) ) 滤纸将乙醇吸干。将所得滤纸将乙醇吸干。将所得DNADNA置于小烧杯中。加置于小烧杯中。加2-52-5毫升毫升SSCSSC溶液将其溶解。溶液将其溶解。DNA+2mL SSC2mL SSC加入4mL二苯胺，6080保温，15min颜色？颜色？颜色？