PCR扩增技术ppt课件.pptx

1、1引物引物2引物引物引物引物3XX4()40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 2056 PCRPCR技术实际上是技术实际上是DNADNA的体外扩增技术。的体外扩增技术。其原理类似于其原理类似于DNADNA在体内的复制过程。在体内的复制过程。只要提供一个合适的条件只要提供一个合适的条件模板模板DNADNA、寡核苷酸引、寡核苷酸引物、物、DNADNA聚合酶、四种聚合酶、四种dNTPdNTP原料和合适的缓冲液体系，原料和合适的缓冲液体系，在一定的温度下，经过重复的过程，就可以完成在一定的温度下，经过重复的过程，就可以完成DNADNA的体外合成。的体外合成。PCRPCR反

2、应是一个重复进行的反应是一个重复进行的DNADNA复制过程，需要重复复制过程，需要重复进行：模板的解链、引物与模板的结合（粘合）、进行：模板的解链、引物与模板的结合（粘合）、DNADNA聚合酶催化新链聚合酶催化新链DNADNA的合成。的合成。7这些过程都是通过控制温度来实现的，即通过改变温度这些过程都是通过控制温度来实现的，即通过改变温度引起引起变性（变性（denaturedenature）、退火（）、退火（annealingannealing）和延伸）和延伸（extensionextension），），使使DNADNA得以复制。得以复制。1 1、变性、变性通过加热至通过加热至95左右，使左右

3、，使DNA双螺旋的氢键断裂，形双螺旋的氢键断裂，形成单链成单链DNA，作为反应的模板。，作为反应的模板。2 2、退火、退火将温度降至引物的将温度降至引物的Tm值左右或以下（比值左右或以下（比Tm低低5，通，通常为常为5565），引物与），引物与DNA模板互补结合，形成杂模板互补结合，形成杂交链。交链。83 3、延伸、延伸在在DNA聚合酶（一种耐热的聚合酶（一种耐热的DNA聚合酶）的作用下，聚合酶）的作用下，于于7074以引物以引物3端端为起始点按为起始点按53方向使方向使DNA新链延伸。新链延伸。 上述三步为一个循环，每一循环的产物作为下一个上述三步为一个循环，每一循环的产物作为下一个循环的模

4、板，如此经过循环的模板，如此经过2530个循环，可使新生的个循环，可使新生的DNA片段得以扩增片段得以扩增1069倍（至少扩增倍（至少扩增105 倍）。倍）。PCR的反应原理也就是的反应原理也就是PCR的基本过程。的基本过程。 91234522557294时间（min）温度（）PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点适温延伸3高温变性1低温退火2重复13步2530轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍10复性（退火）复性（退火）11延伸延伸12变性变性13复性（退火）复性（退火）14延伸延伸15变性变性16 复性复性（退火）（退火）17延延伸伸18192021 222324http:/ 25