微流控芯片检测ppt课件.ppt

1、微流控芯片检测器微流控芯片检测器 微流控芯片检测器的作用是将测定被分析样品经微流控芯片系统分离或处理后有关组成的组成及含量。是分析系统中必不可少的部分。检测器的总体性能将影响整个微流控分析系统的检出限、检测速度、适用范围、体积等指标，是微流控分析系统的关键部位之一。2、微流控芯片检测器分类、微流控芯片检测器分类, LIF检测器是应用最早、最多的光学检测器，也是目前唯一被检测器是应用最早、最多的光学检测器，也是目前唯一被商品化的检测器，多应用于毛细管电泳芯片中。商品化的检测器，多应用于毛细管电泳芯片中。特点：特点：n检测限低：一般可达检测限低：一般可达10-9mol/L10-12mol/L，最高

2、可达单分子，最高可达单分子检测；检测；n选择性好；选择性好；n线性范围宽。线性范围宽。不足：不足：n通用性差，体积较大，结构较复杂，成本高。通用性差，体积较大，结构较复杂，成本高。2.1.1 激光诱导荧光检测器激光诱导荧光检测器(Laser induced fluorescence, LIF)2.1.1 激光诱导荧光检测器激光诱导荧光检测器 激发光源 单色激光 激光器 氩离子激光器 半导体激光器 2.1.1 激光诱导荧光检测器激光诱导荧光检测器检测元件：n 光电倍增管（PMT ）n 单光子雪崩型光电二级管（SPAD） n 电荷耦合器件CCD非共聚焦型非共聚焦型LIF检测器基本光路结构示意图检测

3、器基本光路结构示意图Analytical Chemistry, Vol. 68, No. 5, March 1, 1996正交型正交型LIF检测系统检测系统共聚焦型共聚焦型LIF检测器基本光路结构示意图检测器基本光路结构示意图LED是一种可发射准单色光、体积小、寿命长和价廉的发光器件。虽然在发光强度、光谱纯度、聚光性等方面不及半导体二极管激光器，灵敏度也有所下降，但可以简化检测器的结构，大大降低成本。Science 1998，282, 484490. 集成化的集成化的DNA分析芯片分析芯片集成化的集成化的DNA分析芯片分析芯片Science 1998，282, 484490Analytical

4、 Chemistry, Vol. 73, No. 18, September 15, 2001液芯波导通道微芯片结构和液芯波导通道微芯片结构和LED荧光诱导检测示意图荧光诱导检测示意图2.1.3 集成一次性微流控芯片的便携式荧光检集成一次性微流控芯片的便携式荧光检测系统测系统CHEN Xing et al.Nanotechnology and Precisio Engineering,2009,7(2):127-131特点：n可测定的物质种类多；n结构简单。不足：n相对灵敏度低。n当前微流控芯片紫外吸收光度检测存在的主要问题是检测灵敏度较低，难以满足以低浓度生化样品为主要对象的检测要求。解决的

5、办法除了优化检测器光路结构外，更多的应该从微流控芯片本身来考虑。芯片材质必须选用石英等紫外吸收小的材料，还应鼓励通过增加光程或集成样品预浓缩单元如等速电泳、样品堆积等来提高检测的灵敏度。n普通光程吸收光度检测芯片常用的玻璃，塑料等芯片材料对紫外线都有较大吸收，不适宜用于紫外检测，石英或PDMS等紫外吸收小的芯片材料是较为合适的选择。紫外吸收光度检测器紫外吸收光度检测器n固定波长n可变变长n多波长快速扫描2.2.1 短光程吸收检测池吸收光度检测器短光程吸收检测池吸收光度检测器检测偶氮砷-U（）金属配合物，检出限达23ug/L2.2.1 短光程吸收检测池吸收光度检测器短光程吸收检测池吸收光度检测器

6、2.2.2 长光程吸收光度检测长光程吸收光度检测2.2.2 长光程吸收光度检测长光程吸收光度检测n增加芯片吸收光程能将检测灵敏度提高l2个数量级。n然而过度增加光程使峰展宽，柱效降低。n选择通过增加光程长度来提高灵敏度，要考虑其对柱效的影响，最终找到一个既能提高灵敏度而又不会显著降低柱效的合适光程。2.3 化学发光检测器化学发光检测器 基态的分子吸收化学反应中释放的能量，跃迁至激发态，处于激发态的分子以光辐射的形式返回基态，从而产生发光现象。2.3.1 普通化学发光普通化学发光2.3.1 普通化学发光普通化学发光2.3.2 电致化学发光检测器电致化学发光检测器脯氨酸的LOD为 1.2molL，

7、线性范围5600molL 2.4 电化学检测器电化学检测器2.4.1 安培检测器安培检测器2.4.1 安培检测器安培检测器 安培检测法具有操作简便、背景噪声电流小等优点，1998年由Woolley等首次在芯片电泳上实现，现已发展成为微流控芯片中应用最多的一种电化学检测方式。 安培法不是通用型检测方法，它要求被检测物质具有电化学活性，如果没有则应通过衍生反应产生具有电化学活性的基团或者在溶液中加入具有电化学活性的物质以实现对被测物如DNA、蛋白质和氨基酸的间接检测。 安培检测法的类型芯片分离通道中的电流一般在几到几十个微安，而安培检测的工作电极上产生的电流一般在纳安级甚至更小，所以在安培检测法中

8、如何减小甚至隔离分离电压对检测的影响是一个至关重要的问题。根据隔离分离电压的方式，安培检测器可分为离柱式（off -colunmn）和端柱式（end-column）。2.4.1 安培检测器安培检测器n工作电极的材料 碳电极 金属电极 化学修饰电极 Four configurations for aligning the working electrode in amperometric detection that facilitate isolation of the EC detector from the separation voltageSusan M. Lunte，et al. E

9、lectrophoresis 2004, 25, 352835492.4.1 安培检测器安培检测器-阵列工作电极阵列工作电极芯片毛细管电泳芯片毛细管电泳-阵列工作电极安培检测系统阵列工作电极安培检测系统2.4.2 电导检测器电导检测器 根据组分带电组分对溶液电导率的贡献而进行检测的。是一种通用型的检测器，尤其适用于检测无机离子、氨基酸等小分子离子的检测。 易于微型化和集成化2.4.2 电导检测器电导检测器n接触式电导检测器n非接触式电导检测器接触式电导检测器接触式电导检测器电导检测芯片结构及电导电极示意图电导检测芯片结构及电导电极示意图 接触式电导检测器由于工作电极和通道里的溶液直接接触，可能

10、会有以下问题：n检测系统难以与电泳分离电压有效隔离，由于共地产生漏电干扰，使基线噪声大。n反应产生的气泡或电极表面的污染均会影响检测n通道流体中的某些成分会吸附在传感电极表面，改变电极的性质。2.4.3 电位检测法电位检测法2.4.3 电位检测法电位检测法电位检测示意图电位检测示意图复合式电化学检测法复合式电化学检测法 复合式电化学检测法是将多种电化学检测方式联用使用可以充分发挥每种检测方式的优点，相互补充，实现更多被分析物的同时分离和检测，因而也得到了广泛的关注。 Wang和Pumera发展了一种新型的可以实现非接触电导和安培法同时检测系统。CE microchip system with

11、a dual amperometric/conductivity detection system: (a) glass microchip, (b) run buffer reservoir, (c) sample reservoir, (d) unused reservoir, (e) aluminum electrodes for contactless conductivity detection, (f) channel outlet,(g) thick-film working electrode for amperometric detection.Erkang Wang,et

12、al.Electrophoresis 2005, 26, 687693n双通道检测器是指将两种检测器同时集成在芯片上，以实现对管道内信号变化的同时检测。双通道检测可获得更多分析物质的信息，更能真正体现微全分析的概念。n近年来，在玻璃电泳芯片上集电导和荧光双通道检测器，实现了对无机离子、荧光素和氨基酸等物质的同时在线检测，其将接触式电导(CCD)检测器与LED检测器同集一芯片上时检测带具有光学活性和非具有光学活性的物质，拓宽了检测对象的范围。Fig. 1 A scheme of the dual detector. (A) Box for circuitboard; (B) bottom boa

13、rd; (C) contactless electrode plate; (D)thin microchip. (1) LED; (2, 3) the electrodes of contactlessconductivity detection; (4) pinhole; (5, 6) wires connectingthe electrodes of contactless conductivity detection withthe circuit board; (7) cut off filter; (8) photodiode; (9, 10)cables connecting th

14、e photodiode with the circuit board.Zuan-guang Chen,et al.analytica chimica acta 621 (2008) 171177 集成电导检测器应用于实际样品是其发展的必然趋势，而如何有效排除实际样品中的干扰组分对检测的影响是电导检测在实际样品应用中的关键所在。 实现高通量是微流控芯片研究中提高分析效率的重要研究目标之一，因此，多通道阵列式检测器的研究也成为了热点，而电导检测器易于微型化的优势特别适于与高通量芯片集成。 微流控芯片集成电导检测器具有操作方便、使用寿命长等特点，尤其适合离子化合物的分离分析。其加工工艺与MEMS技

15、术兼容，使其在微流控的集成化、微型化方面显示出强大的发展潜力。检测电极在微流控芯片上可采用不同的布置方式，并结合芯片微管道网络本身灵活多样的特点，设计出多种多样具有各自特点与功能的微流控芯片集成电导检测器。其可应用于生化样品和实际样品的检测，显示出芯片集成电导检测器具有巨大的潜在商业价值。n质谱（MS）技术能够提供试样组分中分子的结构和定量信息。电喷雾离子化（ESI）和基质辅助激光解析离子化(MALDI)技术使其在特定的条件下电离时依然可以保持生物大分子的非共价相互作用，使得质谱在蛋白质和多肽的研究中必不可少。nMS检测的高效率、高灵敏度和高通量迎合了芯片微小样品量及微流控系统的目标，两者联用

16、可满足基因组学与蛋白质组学等生物分析的需要。n芯片与ESI-MS接口n芯片与MAIDL-MS接口2.5.1 芯片与芯片与ESI-MS接口接口n外接毛细管的引入虽然简化了接口装置，却也带来了一定的死体积。这种死体积的存在在一定程度上稀释了待测物、延长了组分的迁移时间，使质谱分析的分辨率和灵敏度下降。小死体积甚至零死体积接口的研制是这个领域研究的一个热点，其中以Harrison和Thibault实验室的工作较为突出。他们在芯片末端钻一个平面的孔对准通道，将一根毛细管插入孔中用环氧胶固定，使毛细管和通道连接的死体积大大降低。n由于传统的鞘流液辅助的电喷雾接口对样品的稀释作用明显，造成检测灵敏度低，因

17、此一般采用无鞘流液辅助的纳米电喷雾接口。较为普遍方法是将连接在芯片上的毛细管的末端拉细至220nm形成“纳米”喷头，或者通过一个套管与制备好的纳米喷头连接，不仅节省一整套辅流或液接部件，还简化了接口的复杂性。但是此结构的接口需要在纳米喷头的末端镀上金属或导电高分子层，或者在纳米喷头中插人电极丝用于施加ESI的电压。不同死体积的芯片不同死体积的芯片毛细毛细管连接管连接2.5.1 芯片与芯片与ESI-MS接口接口Analytical Chemistry, Vol. 71, No. 15, August 1, 1999微流控芯片通过鞘和雾化器微流控芯片通过鞘和雾化器-ESI联用示意图联用示意图2.5

18、.1 芯片与芯片与ESI-MS接口接口-2.5.1 芯片与芯片与ESI-MS质谱实时检测酯化反应2.5.2 芯片与MALDI-MS接口 与ESIMS相比MALDIMS更适于用作微流控分析系统的检测器。因为它具有下述特点：n对样品组成要求低，能耐高浓度盐和非挥发性缓冲剂(包括芯片电泳体系中常用的硫酸盐、磷酸盐、硼酸盐等)。n灵敏度高。样品量只需1pmol甚至更低。n谱图中单电荷、双电荷的分子离子峰很强，便于峰信号重组和解析。 由于MALDI离子化过程中通常要求样品与基质共结晶，要实现微流控芯片微液中流体系与MALDI离子源的直接联用仍行在很大的困难。就目前的发展来看微流控芯片与MALDIMS的联

19、用仍处于起步阶段。2.6 其他检测其他检测激光热透镜检测器机构示意图激光热透镜检测器机构示意图优点：其检测灵敏度很高，可接优点：其检测灵敏度很高，可接近荧光检测方法的水平。近荧光检测方法的水平。不足：但装置较为精密和复杂，不足：但装置较为精密和复杂，很难微型化，由此其应用尚不广很难微型化，由此其应用尚不广泛。泛。2.6.2 折光率检测器折光率检测器2.6.2 折光率检测器折光率检测器2.6.3 分子发射光谱检测器分子发射光谱检测器离子体发射光谱检测芯片结构示意图离子体发射光谱检测芯片结构示意图发射光谱检测装置示意图发射光谱检测装置示意图1.气体进口 2.气体出口3.压力传感器接口4.电极 5.

20、等离子腔6.电极连接端7.进口通道 8.出口通道对钠离子的检测为对钠离子的检测为1ug/L2.7 纸质微流控芯片与商用电化学检测器联用纸质微流控芯片与商用电化学检测器联用n纸质微流控芯片与电化学检测器联用为开发简易、 便携化的诊断平台提供了一种新的手段。近期， 美国哈佛大学的Nie等研制了一种新型纸质微流控芯片， 可替代商品化的血糖试纸条， 并与血糖检测仪配合使用， 实现了对血液样本内葡萄糖的定量检测。该芯片化试纸条具有降低检测成本、 扩展检测范围的潜力。 George M. Whitesides et al.Lab Chip, 2010, 10, 3163-3169 该芯片化试纸条具有降低检

21、测成本、 扩展检测范围的潜力。利用这种新型芯片试纸条进行血糖检测， 检出限可达26mg/dL ， 最小样品消耗量约为50L， 与商用试纸条相当。此外，它还可以检测体液中的胆固醇和乳酸 （检出限分别为 0.34mmol/L和 1.1mmol/L） 以及水中的酒精含量 （检出限为0.1mmol/L)。该集成化微流控芯片装置具有方便携带、 成本低廉、 可多指标同时检测， 与商业化血糖仪兼容等优点。主要检测方法优点不足激光诱导荧光检测灵敏度高分析物需要既有荧光基团或能通过衍生反应得到荧光信号的官能团紫外吸收光度检测通用型检测器，无需衍生和标记灵敏度低，石英芯片的制造工艺复杂，价格偏高化学发光检测灵敏度

22、高，不需要光源，仪器结构简单，易微型化对检测池的设计有特殊要求，需要化学发光试剂和被测物高效混合反应。需要考虑反应本身对芯片的影响电化学检测灵敏度高，选择性好，体积小，装置简单，成本低，具有微型化和集成化的前景被测物需要有电化学活性，重现性差质谱检测在涉及蛋白质组学的研究中有不可代替的作用现行仪器体积庞大，价格昂贵，不易微型化。芯片同质谱的接口仍是重难点。等离子体发射光谱检测无机分析领域最灵敏的检测方法，同芯片结合是解决环境分析中元素形态分析的突破口同芯片的接口问题影响分离和检测热透镜检测灵敏度高，通用性强，被分析物无需衍生和标记仪器精密、复杂，价格昂贵。不具有选择性，不能用于复杂体系的分析折射率检测通用性强灵敏度低3.各种检测方法一览各种检测方法一览 简而言之， 微流控芯片系统的检测器和传统检测器在原理上没什么区别，由于芯片的特殊要求，芯片在设计和现实上又有较大区别。在微流控系统中应选择哪种选择因根据 检测的目标物质和具体需要进行选择，并采取检测系统元件的集成和结构的简化处理等集成化和微型化设计，从而建立符合微流控芯片系统要求的检测系统。此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！