DNA粗提取与鉴定实验PPT课件.ppt

1、1HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number1 1. .提取生物大分子的基本思路提取生物大分子的基本思路选选用一定的用一定的 或或 方法分离具有不同方法分离具有不同_的生物大分子。的生物大分子。2 2. .提取提取DNADNA的思路的思路：利利用用DNADNA与与 、 和和 等在等在 和和 性质方面的差异，提取性质方面的差异，提取DNADNA，去除其他成分。，去除其他成分。一、提取一、提取DNADNA的方法的方法物理物理化学化学物理或化学性质物理或化学性质RNA蛋白质蛋白质脂质脂质物理物理化学化学DNADNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定 回扣基础知识点回扣基础知识点3

2、3. .原理原理(1)DNA(1)DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的 溶液中溶解度不同。溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的利用这一特点，选择适当的 就能使就能使DNADNA充分溶解，而使杂质沉淀充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。，或者相反，以达到分离的目的。NaCl盐浓度盐浓度2HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number( (2 2) ) 能水解蛋白质，但对能水解蛋白质，但对DNADNA没有影响。大多数蛋白质不能忍没有影响。大多数蛋白质不能忍受受 的高温，而的高温，而DNADNA在在 以上才会变性。洗涤剂能瓦

3、解以上才会变性。洗涤剂能瓦解 ，但对，但对DNADNA没有影响。没有影响。( (3 3)DNA)DNA不溶于不溶于 ，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。酒精酒精蛋白酶蛋白酶608080细胞膜细胞膜4 4. .DNADNA的鉴定的鉴定在在 的条件下，的条件下，DNADNA遇二苯胺会染成遇二苯胺会染成 。注意二苯胺试。注意二苯胺试剂要剂要 。沸水浴沸水浴蓝色蓝色现配现用现配现用通常选用通常选用2 mol/LNaCl2 mol/LNaCl溶液溶解细胞中的溶液溶解细胞中的_，此时杂质易沉淀；在，此时杂质易沉淀；在0.14 mol/LNaCl0.14 mol/LN

4、aCl溶液中溶液中DNADNA溶解度溶解度_，可使，可使_。DNADNA最小最小DNADNA析出析出3HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number1 1. .利用利用DNADNA的溶解特性粗提取的溶解特性粗提取DNADNADNADNA与蛋白质在不同浓度的与蛋白质在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶解度不同。溶液中溶解度不同。溶解特性溶解特性质量浓度为质量浓度为2 2 mol/Lmol/LNaClNaCl溶液溶液质量浓度为质量浓度为0.14 mol/L0.14 mol/LNaClNaCl溶液溶液DNADNA在在NaClNaCl溶液中，质量浓溶液中，质量浓度为度为0.14

5、 mol/L0.14 mol/L时溶解时溶解度最小度最小溶解溶解析出析出蛋白质蛋白质NaClNaCl的质量浓度从的质量浓度从2 2 mol/Lmol/L降低过程中，溶解降低过程中，溶解度逐渐增大度逐渐增大部分发生盐析部分发生盐析溶解溶解考点一考点一 DNADNA提取与鉴定原理提取与鉴定原理4HONEYWELL - CONFIDENTIALFile NumberDNADNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可将用这一原理，可将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。NaClNaCl溶液溶液酒精酒精( (

6、体积分数为体积分数为95%95%的冷酒精的冷酒精) )DNADNA不溶不溶蛋白质蛋白质NaClNaCl溶液质量浓度从溶液质量浓度从2 mol/L2 mol/L逐逐渐稀释的过程中溶解度逐渐增大渐稀释的过程中溶解度逐渐增大某些蛋白质可溶某些蛋白质可溶5HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number思考：为思考：为提取到提取到DNADNA，曾先后使用不同浓度的，曾先后使用不同浓度的NaClNaCl溶液，则在溶液，则在质量浓度为质量浓度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液及溶液及0.14 mol/L NaCl0.14 mol/L NaCl溶液中应取溶液中应取滤

7、液，还是滤得的固体物？滤液，还是滤得的固体物？在质量浓度为在质量浓度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液中溶液中DNADNA呈溶解状态，应取滤呈溶解状态，应取滤液，在质量浓度为液，在质量浓度为0.14 mol/L NaCl0.14 mol/L NaCl溶液中溶液中DNADNA溶解度极低，溶解度极低，易析出，应取固体物。易析出，应取固体物。6HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number2.2.利用利用DNADNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(DNA(见下表见下表) )DNADNA蛋白质蛋白质蛋白酶蛋白酶没影响没影响

8、水解水解高温高温80 80 以上才会变性以上才会变性606080 80 会变性会变性洗涤剂洗涤剂没影响没影响瓦解细胞膜瓦解细胞膜特别提醒特别提醒(1)(1)甲基绿可将甲基绿可将DNADNA染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定DNADNA属于颜色反属于颜色反应，需要水浴加热应，需要水浴加热5 min5 min，可使，可使DNADNA呈蓝色。呈蓝色。(2)(2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。7HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number归纳归纳 D

9、NADNA的粗提取原理及目的归纳的粗提取原理及目的归纳基本原理基本原理方法方法目的目的DNADNA在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度不同，在质量浓度不同，在质量浓度为度为0.14 mol/L0.14 mol/L的的NaClNaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度最低度最低溶于溶于NaClNaCl溶溶液中并稀释液中并稀释NaClNaCl溶液质量浓度为溶液质量浓度为2 2 mol/Lmol/L时，时，DNADNA溶解，而部分蛋溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不过过滤可除去部分蛋白质及不溶于溶于NaClNaCl溶液的

10、杂质溶液的杂质当当NaClNaCl溶液稀释至质量浓度溶液稀释至质量浓度为为0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA析析出，过滤可除去溶于出，过滤可除去溶于NaClNaCl中的中的部分蛋白质和其他杂质部分蛋白质和其他杂质DNADNA不被蛋白酶所不被蛋白酶所水解水解加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质蛋白质DNADNA不溶于酒精溶不溶于酒精溶液液加入冷却酒加入冷却酒精精( (体积分体积分数为数为95%)95%)DNADNA析出，除去溶于酒精的蛋析出，除去溶于酒精的蛋白质白质8HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Nu

11、mber1.1.蛋蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNADNA分离出来。下列分离出来。下列药品可达到上述同一目的的是药品可达到上述同一目的的是( () )A A. .蒸馏水蒸馏水 B B. .NaClNaCl溶液溶液C C. .NaOHNaOH溶液溶液 D D. .盐酸盐酸2.(20132.(2013江苏江苏) )某同学用洋葱进行某同学用洋葱进行DNADNA粗提取和鉴定实验，操作粗提取和鉴定实验，操作错误的是错误的是 ( )( )A.A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的用蛋白酶纯化过

12、滤后的研磨液中的DNADNAC.C.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热B BA A学以致用学以致用9HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number3.3.关于关于DNADNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是( )( )A.A.充分溶解充分溶解DNADNA的盐溶液是的盐溶液是0.14 mol/L0.14 mol/L的的NaClNaCl溶液溶液B.B.实验中提取较纯净的实验中提取较纯净的DNADNA利用了利用了DNADNA不溶于酒精的特点不溶于酒精的特点C.

13、C.对最后提取出对最后提取出DNADNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热D.D.实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同4.4.下列关于下列关于DNADNA粗提取与鉴定的说法正确的是粗提取与鉴定的说法正确的是 ( )( )A.A.析出析出DNADNA时要缓慢地加蒸馏水，当析出黏稠物时即不再加水时要缓慢地加蒸馏水，当析出黏稠物时即不再加水B.B.在探究洗涤剂对植物细胞在探究洗涤剂对植物细胞DNADNA提取的影响实验中，自变量是洗涤剂和食盐提取的影响实验中，自变量是洗涤剂和食盐C.C.提取的提取的DNADNA溶解后

14、加入二苯胺试剂即可染成蓝色溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色D.D.将含有将含有DNADNA的滤液放在的滤液放在60607575的恒温水浴箱中保温后过滤，能去除蛋白的恒温水浴箱中保温后过滤，能去除蛋白质杂质质杂质A AD D10HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number1 1. .实验材料的选取实验材料的选取选选用用 含量相对较高的生物组织。含量相对较高的生物组织。2 2. .破碎细胞，获取含破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液(1)(1)动动物细胞的破碎物细胞的破碎以鸡血为例以鸡血为例在鸡血细胞液中加入一定量的在鸡血细胞液中加入一定量的 ，同时用玻璃棒，同时用玻

15、璃棒搅拌，过滤后收集搅拌，过滤后收集 即可。即可。二、二、DNADNA粗提取实验流程粗提取实验流程 DNADNA蒸馏水蒸馏水滤液滤液(2)(2)植物细胞的破碎植物细胞的破碎以洋葱为例以洋葱为例先将洋葱切碎，然后先将洋葱切碎，然后加入一定量加入一定量 _；进行充分进行充分 和和 _，过滤后收集研磨液。过滤后收集研磨液。搅拌搅拌研磨研磨洗涤剂和食盐洗涤剂和食盐思考：思考：用用猪的血液与鸡的血液提取猪的血液与鸡的血液提取DNADNA哪个效果更好？哪个效果更好？用鸡的血液；因为鸡血细胞核用鸡的血液；因为鸡血细胞核DNADNA含量丰富，材料易得，而猪的红细胞无含量丰富，材料易得，而猪的红细胞无细胞核细胞

16、核DNADNA含量少。含量少。11HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number思考：思考：1 1. .为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂( (细胞细胞膜和核膜的破裂膜和核膜的破裂) )，从而释放出，从而释放出DNADNA。2 2. .加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？加入洗涤剂和食盐的作用分别是

17、什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNADNA的释放；食盐的主要的释放；食盐的主要成分是成分是NaClNaCl，有利于，有利于DNADNA的溶解。的溶解。3 3. .在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分，会在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？对实验结果产生什么影响？破碎细胞壁，使破碎细胞壁，使DNADNA更多地溶解在更多地溶解在NaClNaCl溶液中溶液中, ,研磨不充分会使细胞核内的研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，提取的释放不完全，提取的DNAD

18、NA量少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物量少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。12HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number3.3.去除滤液中的杂质去除滤液中的杂质最初获得的最初获得的DNADNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNADNA。具体。具体做法如下：做法如下：方案一：滤液方案一：滤液NaCl(2 mol/L)NaCl(2 mol/L)过滤除去杂质过滤除去杂质加入蒸馏水使加入蒸馏水使NaClNaCl溶液溶液浓度为浓度为0.14 mol/LDNA

19、0.14 mol/LDNA析出析出过滤得到过滤物过滤得到过滤物放到放到2 mol/LNaCl2 mol/LNaCl溶液中溶液中溶解溶解DNADNANaClNaCl溶解液溶解液方案二：滤液方案二：滤液嫩肉粉嫩肉粉( (木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶)静置静置101015 min15 min过滤获得过滤获得DNADNA滤滤液液方案三：滤液方案三：滤液60607575处理处理过滤获得过滤获得DNADNA滤液滤液方案一的原理是方案一的原理是_；方案二的原理是方案二的原理是_；方案三的原理是方案三的原理是_。DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同蛋白酶分解蛋白质，不分解蛋白酶分解蛋白质

20、，不分解DNA蛋白质和蛋白质和DNA的变性温度不同的变性温度不同13HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number思考：思考：1.1.过滤时应当选用滤纸还是尼龙布？过滤时应当选用滤纸还是尼龙布？ 选用尼龙布进行过滤选用尼龙布进行过滤2.2.方案二与方案三的原理有什么不同？方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNADNA与蛋白质分开；与蛋白质分开；方案三利用的是方案三利用的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与，与DNAD

21、NA分离。分离。3.3.为什么反复地溶解与析出为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去除杂质？，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使浓度使DNADNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂质溶解度不同的多种杂质14HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number4 4. .DNADNA的进一步提纯的进一步提纯利

22、利用用DNADNA不溶于不溶于冷却冷却的的 这一原理，可从溶液中这一原理，可从溶液中析出较纯净的析出较纯净的DNADNA，此时，此时DNADNA的状态为的状态为 。5 5. .DNADNA的鉴定的鉴定将将呈丝状物的呈丝状物的DNADNA溶解于溶解于5 mL5 mL质量浓度为质量浓度为 溶液溶液中，再加入中，再加入4 mL4 mL的的 试剂，试剂， 加热加热5 min5 min，冷却后观察溶液的颜色。注意要同时设置冷却后观察溶液的颜色。注意要同时设置 实验。实验。酒精溶液酒精溶液白色丝状物白色丝状物2mol/L的的NaCl二苯胺二苯胺沸水沸水对照对照15HONEYWELL - CONFIDENT

23、IALFile Number1 1. .实验材料的选取实验材料的选取本本实验用实验用鸡血细胞鸡血细胞作实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞作实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞的核的核DNADNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水涨破，含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水涨破，而用动物肝脏细胞等作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备而用动物肝脏细胞等作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。要求较高，操作繁琐，历时较长。考点二考点二 实验设计实验设计（1 1）不同生物的组织中）不同生物的组织中DNADNA含量不同含量不同在选取材料时，应本着在选取材料时，应本着D

24、NADNA含量高、材料易得、便于提取的原则。含量高、材料易得、便于提取的原则。（2 2）材料不同所采用的提取方法不同）材料不同所采用的提取方法不同植物组织：取材植物组织：取材研磨研磨过滤过滤沉淀。沉淀。在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐剂和食盐(洗涤剂能够溶解细胞膜洗涤剂能够溶解细胞膜)，充分搅拌和研磨，过滤后收集，充分搅拌和研磨，过滤后收集研磨研磨液液鸡血：制备鸡血细胞液鸡血：制备鸡血细胞液提取核提取核DNADNA溶解细胞核内溶解细胞核内DNADNA析出并滤取析出并滤取DNADNADNADNA再溶解再溶解提取较纯净的提取较纯净的DNADNA。16HONEYW

25、ELL - CONFIDENTIALFile Number2 2. .提取提取DNADNA的具体步骤的具体步骤 (2)(2)溶解核内溶解核内DNADNA：滤液质量浓度为：滤液质量浓度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液溶液 (3)(3)过滤：除去不溶的杂质，得滤液过滤：除去不溶的杂质，得滤液 (4)(4)析出含析出含DNADNA的黏稠物：向滤液中缓缓加入蒸馏水，并用玻璃棒轻轻沿的黏稠物：向滤液中缓缓加入蒸馏水，并用玻璃棒轻轻沿一个方向不停地搅拌，直到丝状物不再增加时，停止加水一个方向不停地搅拌，直到丝状物不再增加时，停止加水( (此时此时NaClNaCl质量质量浓度约为浓度约

26、为0.14 mol/L)0.14 mol/L)17HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number(5)(5)过滤：用过滤：用多层纱布多层纱布过滤，含过滤，含DNADNA的黏稠物被留在纱布上的黏稠物被留在纱布上(6)DNA(6)DNA的黏稠物再溶解：将其溶解在质量浓度为的黏稠物再溶解：将其溶解在质量浓度为2 mol/L2 mol/L的的NaClNaCl溶溶液中液中(7)(7)过滤：用过滤：用两层纱布两层纱布滤得含滤得含DNADNA的滤液的滤液(8)(8)对对DNADNA进一步提纯：向滤液中加入与滤液体积相等的、进一步提纯：向滤液中加入与滤液体积相等的、冷却冷却的的体积分数

27、为体积分数为95%95%的酒精，静置的酒精，静置2 23 min3 min，溶液中会出现白色丝状物，溶液中会出现白色丝状物，即粗提取的即粗提取的DNADNA18HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number(9)DNA(9)DNA的鉴定的鉴定比较比较加入物质加入物质结果结果图示图示实验实验组组均加入：均加入：4 mL4 mL二苯胺二苯胺试剂试剂质量浓度为质量浓度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液溶液5 mL5 mL丝状物丝状物(DNA)(DNA)溶液溶液逐渐逐渐变蓝变蓝对照对照组组不不变变蓝蓝19HONEYWELL - CONFIDENTIALFil

28、e Number共共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”讨论：讨论：两次蒸馏水两次蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第一次：细胞吸水胀破 第二次：使第二次：使 DNADNA黏稠物析出黏稠物析出此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？一步？三次过滤三次过滤第一次：第一次： DNADNA存在于滤液里存在于滤液里 第一步第一步第二次：第二次： DNADNA被留在纱布上被留在纱布上 第四步第四步第三次：第三次： DNADNA存在于滤液里存在于滤液里 第六步第六步

29、过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为纱布为1 12 2层层20HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number两次析出两次析出第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液含杂质多溶液含杂质多第三步第三步第二次：用冷却的第二次：用冷却的9595的酒精的酒精第七步第七步六次搅拌：第一、二、三、五、七步六次搅拌：第一

30、、二、三、五、七步其中除第八步外，其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌其余均要朝一个方向搅拌，在第，在第三、五步搅动还要轻三、五步搅动还要轻缓缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNADNA21HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？1.1.材料未充分研磨成糊状材料未充分研磨成糊状2.2.加入酒精后振动或搅拌时过猛，加入酒精后振动或搅拌时过猛，DNADNA被破坏被破坏3.3.二苯胺配制时间过长，最好现配现用，否则二苯胺会变成浅

31、蓝色二苯胺配制时间过长，最好现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色4.4.析出含析出含DNADNA的黏稠物中，蒸馏水不能一次快速倒入，否则会影响结的黏稠物中，蒸馏水不能一次快速倒入，否则会影响结果果5.5.实验中多个步骤要用玻璃棒进行搅拌，不同步骤中用法不同，做实实验中多个步骤要用玻璃棒进行搅拌，不同步骤中用法不同，做实验时如果不注意，会影响实验结果验时如果不注意，会影响实验结果22HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number特别提醒特别提醒(1)(1)做做该实验时，不能用猪血代替鸡血，因为哺乳动物成熟该实验时，不能用猪血代替鸡血，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，不能

32、提取的红细胞中没有细胞核，不能提取DNADNA。(2)(2)制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防止制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防止血液凝固血液凝固, ,静置后上层是血浆，下层为所需要的血细胞。静置后上层是血浆，下层为所需要的血细胞。(3)(3)涨破细胞的方法：向血细胞中加入蒸馏水，血细胞溶液涨破细胞的方法：向血细胞中加入蒸馏水，血细胞溶液的浓度大于蒸馏水的浓度，从而使血细胞大量吸水而涨破。的浓度大于蒸馏水的浓度，从而使血细胞大量吸水而涨破。不能用生理盐水，因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度不能用生理盐水，因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度相当，所以血细胞在生理盐水

33、中不能吸收水分。相当，所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。(4)(4)两次加入蒸馏水，第一次是为了使血细胞吸水涨破两次加入蒸馏水，第一次是为了使血细胞吸水涨破, ,释放释放出核内的出核内的DNADNA；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于DNADNA的析出。的析出。(5)(5)两次析出两次析出DNADNA的方法：的方法：第一次是加入蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使第一次是加入蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使DNADNA析出；析出；第二次是加入冷酒精，因为第二次是加入冷酒精，因为DNADNA不溶于酒精溶液。不溶于酒精溶液。23HONEYWELL - CONFID

34、ENTIALFile Number( (6 6) )在在DNADNA粗提取中三次过滤时，粗提取中三次过滤时，DNADNA存在的部分及所用的纱布层数不同：存在的部分及所用的纱布层数不同：第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液，是为了得到含第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液，是为了得到含DNADNA的滤液，使的滤液，使用的纱布为用的纱布为1 12 2层。层。第二次过滤含有黏稠物的第二次过滤含有黏稠物的NaClNaCl溶液，是为了得到从低浓度的溶液，是为了得到从低浓度的NaClNaCl溶液中溶液中析出的附着在纱布上的含析出的附着在纱布上的含DNADNA的黏稠物，所用的纱布为多层。的黏稠物，所用的纱布

35、为多层。第三次过滤溶解有第三次过滤溶解有DNADNA的的NaClNaCl溶液，目的是为了使溶液，目的是为了使DNADNA再溶解，所以只要再溶解，所以只要用两层纱布即可。用两层纱布即可。24HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number1.(20121.(2012江苏江苏) )下列关于下列关于“DNADNA粗提取与鉴定实验粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是的叙述，正确的是 ( )( )A.A.洗涤剂能瓦解细胞膜并增加洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度溶液中的溶解度B.B.将将DNADNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝丝状物放入二

36、苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C.C.常温下菜花匀浆中有些酶类会影响常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNADNA的提取的提取D.D.用玻棒缓慢搅拌滤液会导致用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNADNA获得量减少获得量减少2 2. .(2011(2011江苏江苏) )在利用鸡血进行在利用鸡血进行“DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”的实验中，下的实验中，下列相关叙述正确的是列相关叙述正确的是 ( ( ) ) A A. .用蒸馏水将用蒸馏水将NaClNaCl溶液质量浓度调至溶液质量浓度调至0.14 mol/L0.14 mol/L，滤去析出物，滤去析出物B B. .调节调节NaClNaCl溶液质量浓度或加入

37、木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质溶液质量浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C C. .将丝状物溶解在质量浓度为将丝状物溶解在质量浓度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色即呈蓝色D D. .用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同C C课堂巩固课堂巩固B B25HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number3.3.下图为下图为“DNADNA粗提取和鉴定粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是实验的相关操作。这些操作目的正确的是( () )A

38、A. .是洗涤红细胞，去除血细胞表面的杂质是洗涤红细胞，去除血细胞表面的杂质B B. .是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的杂质，去除不溶于酒精的杂质C C. .是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于质量浓度为，去除不溶于质量浓度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的杂质溶液的杂质D D. .是稀释是稀释NaClNaCl溶液，去除不溶于低浓度溶液，去除不溶于低浓度NaClNaCl溶液的杂质溶液的杂质C C26HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number4.4.下下图为图为“DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”的实验装置，请回答下的实验装置，

39、请回答下列相关的问题。列相关的问题。(1)(1)实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中有较实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中有较高含量的高含量的_。(2)(2)在图在图A A所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是_，通过图，通过图B B所示的步骤所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入质量浓度为取得滤液，再在溶液中加入质量浓度为2 mol/L2 mol/L的的NaClNaCl溶液的目的是溶液的目的是_(3)(3)图图C C所示实验步骤中加蒸馏水的目的是所示实验步骤中加蒸馏水的目的是_。DNA使血细胞破裂使血细胞破裂使滤液中的使

40、滤液中的DNA溶于浓溶于浓NaCl溶液溶液使使DNA析出析出27HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number5.5.下图表示以鸡血为实验材料进行下图表示以鸡血为实验材料进行DNADNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分的粗提取与鉴定的操作程序，请分析回答下列问题：析回答下列问题：（1 1）步骤一中，向鸡血细胞液中加入）步骤一中，向鸡血细胞液中加入并搅拌，可使鸡血细并搅拌，可使鸡血细胞破裂。胞破裂。（2）步骤二中，过滤后收集含有）步骤二中，过滤后收集含有DNA的的。蒸馏水蒸馏水滤液滤液28HONEYWELL - CONFIDENTIALFile Number（3 3）步骤三

41、、四的操作原理是）步骤三、四的操作原理是_；步骤四中，通过向溶液中加入步骤四中，通过向溶液中加入调节调节NaClNaCl溶液的物质的量浓溶液的物质的量浓度至度至 mol/L mol/L时，时，DNADNA将会析出，过滤去除溶液中的杂质。将会析出，过滤去除溶液中的杂质。（4 4）步骤七：向步骤六过滤后的）步骤七：向步骤六过滤后的中加入等体积的冷却的中加入等体积的冷却的，静置，静置2 23 min3 min，溶液中会出现，溶液中会出现色丝状物，这就是粗提取的色丝状物，这就是粗提取的DNADNA。（5 5）步骤七：）步骤七：DNADNA遇遇试剂，沸水浴试剂，沸水浴5 min5 min，冷却后，溶液，冷却后，溶液呈呈色。色。DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，通过控制溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质溶液的浓度去除杂质蒸馏水蒸馏水0.14滤液滤液酒精酒精白白二苯胺二苯胺蓝蓝