2.1植物细胞工程-PPT课件.ppt
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1、专题2 细胞工程 19961996年年7 7月月5 5日日, ,世界上第一只体细胞克隆动世界上第一只体细胞克隆动物物-克隆羊克隆羊多利多利诞生于英国诞生于英国, , 标志着一种新标志着一种新的生物技术的生物技术-动物体细胞克隆技术面世动物体细胞克隆技术面世, , 也揭也揭开细胞工程更深层次发展的序幕开细胞工程更深层次发展的序幕! !植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交植物体细胞杂交 细胞工程是指应用细胞生物学和细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过分子生物学的原理和方法,通过细胞细胞水平水平或或细胞器水平细胞器水平上的操作,按照人上的操作,按照人们的意愿来们的意愿来改变改变
2、细胞内的细胞内的遗传物质遗传物质或或获得细胞产品获得细胞产品的一门综合科学技术。的一门综合科学技术。什么叫细胞工程?包括哪两什么叫细胞工程?包括哪两大领域?大领域?细细胞胞工工程程应用的原理和方法应用的原理和方法研究的水平研究的水平研究的目的研究的目的细胞生物学和细胞生物学和分子生物学分子生物学细胞整体水平或细胞器水平细胞整体水平或细胞器水平按照人们的意愿来改按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质变细胞内的遗传物质或获得细胞产品或获得细胞产品概念概念植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程理论基础理论基础细胞的全能性细胞的全能性分类分类细胞工程和基因工程在操作水平上有细胞工程和基因工程在
3、操作水平上有什么不同?什么不同?前者是细胞水平或细胞器水平上的生物前者是细胞水平或细胞器水平上的生物 技术技术后者是后者是DNADNA分子水平上的生物技术分子水平上的生物技术2.1.1 2.1.1 植物细胞工程的基本技术植物细胞工程的基本技术所采用技术的理论基础 植植物物细细胞胞工工程程植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物细胞的全能性植物细胞的全能性通常采用的技术手段 细胞的全能性细胞的全能性1 1、定义、定义: :2 2、原理、原理: :3 3、差异、差异: :4 4、大小:、大小:5 5、潜在全能性的原因、潜在全能性的原因: : 生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个生物
4、体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。体的潜能的特性。 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成为完整个有的全套遗传物质,都有发育成为完整个体所必需的全部基因,从理论上讲,生物体所必需的全部基因,从理论上讲,生物体的每一个体的每一个活细胞活细胞都应该具有全能性。都应该具有全能性。 受精卵的全能性受精卵的全能性最高最高 受精卵分化后的细胞中,体细胞的全受精卵分化后的细胞中,体细胞的全 能性比生殖细胞的能性比生殖细胞的低低。 基因的选择性表达基因的选择性表达受精卵生殖细胞干细胞受精卵生殖细胞干细胞 体细胞体细胞 植物细胞动物细胞
5、植物细胞动物细胞 思考讨论:为什么体内细胞没有表现出思考讨论:为什么体内细胞没有表现出全能性,而是分化成为不同的组织、器官?全能性,而是分化成为不同的组织、器官? 基因在特定空间和时间条件下基因在特定空间和时间条件下选择性表达选择性表达的的结果。在个体发育的不同时期,生物体不同部位结果。在个体发育的不同时期,生物体不同部位的细胞表达的基因是不同的,合成的蛋白质也不的细胞表达的基因是不同的,合成的蛋白质也不一样,从而形成了不同的组织和器官。一样,从而形成了不同的组织和器官。植物组织培养关键词:关键词: 外植体、脱分化、再分化、愈伤组织外植体、脱分化、再分化、愈伤组织在在无菌无菌和和人工控制人工控
6、制条件下,将离体的条件下,将离体的植物植物器官、组织、细胞器官、组织、细胞,培养在人工,培养在人工配置的培养基上,给予适宜的培养条配置的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成终形成完整的植株完整的植株。外植体灭菌消毒外植体灭菌消毒接种于培养基上接种于培养基上避光诱导愈伤组织的形成避光诱导愈伤组织的形成在分化培养基上诱导植物体的形成在分化培养基上诱导植物体的形成脱分化:让已经分化的细胞,经过诱导后,脱分化:让已经分化的细胞,经过诱导后, 失去其特有的结构和功能而转变成未分失去其特有的结构和功能而转变成未分 化细胞的过程。化细胞的过程。再分
7、化:脱分化的细胞,在一定的条件下,再分化:脱分化的细胞,在一定的条件下, 又重新分化成各种特异性的组织细胞又重新分化成各种特异性的组织细胞 的过程。的过程。外植体:离体的植物器官、组织或细胞。外植体:离体的植物器官、组织或细胞。愈伤组织:细胞排列疏松、无规则、高度愈伤组织:细胞排列疏松、无规则、高度 液泡化的无定形的薄壁细胞。液泡化的无定形的薄壁细胞。切取切取形成层形成层无菌无菌接种接种诱导愈伤组织诱导愈伤组织的形成的形成试管苗的形成试管苗的形成培养室培养室移栽移栽脱分化脱分化再分化再分化方法步骤:方法步骤:1.1.植物细胞表现出全能性的条件有哪些?植物细胞表现出全能性的条件有哪些?2.2.在
8、植物组织培养过程中,为什么要进行一在植物组织培养过程中,为什么要进行一系列的消毒,灭菌,并且要求无菌操作?系列的消毒,灭菌,并且要求无菌操作?3.3.为什么诱导愈伤组织的过程中应避光培养?为什么诱导愈伤组织的过程中应避光培养?4.4.请根据书上实验过程,讨论并概括出植物请根据书上实验过程,讨论并概括出植物组织培养技术的流程简图。组织培养技术的流程简图。思考和讨论:思考和讨论:1.1.植物细胞表现出全能性的条件有哪些?植物细胞表现出全能性的条件有哪些?(温度、无菌、光照等)(温度、无菌、光照等)离体离体营养物质营养物质激素激素其他外界条件其他外界条件(无机物、有机物)(无机物、有机物)(生长素、
9、细胞分裂素等)(生长素、细胞分裂素等)(外植体)(外植体)植物组织培养培养基 定义:含有一定营养成分,供组织培养植物生定义:含有一定营养成分,供组织培养植物生长的基质长的基质 矿质元素:大量元素及微量元素矿质元素:大量元素及微量元素 有机营养成分有机营养成分 含含N物质:包括维生素和某些有机添加物物质:包括维生素和某些有机添加物 碳源:蔗糖碳源:蔗糖 琼脂:起支持作用琼脂:起支持作用 植物激素:生长素、细胞分裂素等植物激素:生长素、细胞分裂素等生长素生长素/ /细胞分裂素细胞分裂素比例低时比例低时:诱导脱分化和根的形成诱导脱分化和根的形成诱导再分化和芽的形成诱导再分化和芽的形成生长素生长素/
10、/细胞分裂素细胞分裂素维持在高水平时维持在高水平时:2.2.在植物组培过程中,为什么要进行一在植物组培过程中,为什么要进行一系列的消毒,灭菌,并且要求无菌操系列的消毒,灭菌,并且要求无菌操作?作?避免杂菌在上面迅速生长消耗营养,避免杂菌在上面迅速生长消耗营养,且有些杂菌会危害培养物的生长。且有些杂菌会危害培养物的生长。在有光时,往往容易形成维管组织,在有光时,往往容易形成维管组织,而不易形成愈伤组织。而不易形成愈伤组织。3.3.为什么诱导愈伤组织的过程中应避光为什么诱导愈伤组织的过程中应避光培养?培养?4.4.请根据书上实验过程,讨论并概括请根据书上实验过程,讨论并概括出植物组织培养技术的流程
11、简图。出植物组织培养技术的流程简图。脱分化脱分化再分化再分化离体离体的植的植物器官、组物器官、组织、细胞织、细胞愈伤组织愈伤组织根、芽根、芽植植物物体体避光避光光光激素激素切取接种愈伤组织的形成植物组织培养(试管苗的形成)培养室试管苗大规模培养移栽经过炼经过炼苗的小苗的小苗,可苗,可以和一以和一般植物般植物一样进一样进行大规行大规模栽培模栽培过程过程离体的植物器官、组织或细胞离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织愈伤组织根、芽根、芽植物体植物体外植体外植体脱分化脱分化植物激素:植物激素:细胞分裂素、生长素细胞分裂素、生长素再分化再分化植物组织培养植物组织培养条件植物组织培养条件: 含有全部营养成分
12、的含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的气、无菌环境、适合的PHPH、适时光照等。适时光照等。请同学们讨论如何实现请同学们讨论如何实现? ? 于是,这些科学家试图用这两种植物的于是,这些科学家试图用这两种植物的体细胞进行杂交,来实现这一美妙的设想。体细胞进行杂交,来实现这一美妙的设想。二、植物体细胞杂交技术二、植物体细胞杂交技术这幅番茄这幅番茄马铃薯图利用马铃薯图利用传统有性杂交方法能实现传统有性杂交方法能实现吗?为什么?吗?为什么? 因为不同种生物之间存因为不同种生物之间存在着生殖隔离,所以用传在着生殖隔离,所以用传统的有性杂交方法是不可统的有性杂
13、交方法是不可能做到这一点的。能做到这一点的。 19721972年卡尔森等通过两个烟草品种之年卡尔森等通过两个烟草品种之间原生质体的融合,获得了第一个体细胞间原生质体的融合,获得了第一个体细胞杂种杂种。 19781978年梅尔彻斯年梅尔彻斯(Melchers)(Melchers)等首次获等首次获得了番茄和马铃薯的属间体细胞杂种得了番茄和马铃薯的属间体细胞杂种“Potamato“Potamato”。 目前,已得到栽培烟草与野生烟目前,已得到栽培烟草与野生烟草、栽培大豆与野生大豆、籼稻与野草、栽培大豆与野生大豆、籼稻与野生稻、籼稻与粳稻、小麦与鹅冠草等生稻、籼稻与粳稻、小麦与鹅冠草等细胞杂种及其后代
14、,获得了有价值的细胞杂种及其后代,获得了有价值的新品系或育种上有用的新材料。新品系或育种上有用的新材料。 1 1、定义:、定义: 用两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂用两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞,且把杂种细胞培育成新的植物体的方法。种细胞,且把杂种细胞培育成新的植物体的方法。2 2、优势、优势(与有性杂交方法比较)与有性杂交方法比较) : 打破了不同种生物间的生殖隔离限制,大大打破了不同种生物间的生殖隔离限制,大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。扩展了可用于杂交的亲本组合范围。植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物细胞植物细胞A A植物细胞植物细胞B B原生质体原生质体A A原生质
15、体原生质体B B原生质体融合原生质体融合正在融合的正在融合的原生质体原生质体再生出细胞壁再生出细胞壁杂种细胞杂种细胞愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株去细胞壁去细胞壁纤维素酶纤维素酶果胶酶果胶酶物理方法物理方法化学方法:化学方法:离心离心振动振动电刺激电刺激聚乙二醇聚乙二醇细胞分裂细胞分裂植植物物组组织织培培养养植物细胞融合植物细胞融合酶解法酶解法人工诱人工诱导方法导方法3 3、过程、过程4 4、成果和尚未解决的问题:、成果和尚未解决的问题:成成 果:果:克服不同生物远缘杂交的障碍,克服不同生物远缘杂交的障碍, 出现自然界没有的新品种。出现自然界没有的新品种。未解决问题:未解决问题:尚未让杂种植
16、物按照人们的需要尚未让杂种植物按照人们的需要 表现出亲代的优良性状表现出亲代的优良性状杂种细胞杂种细胞AAAAA AA A杂种细胞杂种细胞BBBBB BB BA AB B杂种细胞杂种细胞ABAB杂杂种种植植株株融合的融合的原生质原生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A A原生质体原生质体B B原生质体原生质体A A杂种杂种细胞细胞ABAB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法?方法?诱导诱导融合融合的方法?的方法?融合融合完成完成的的标志标志植物细胞植物细胞B B白菜细胞 (AA)
17、(AA)甘蓝细胞 (BB)(BB)白菜原生质体 (AA)(AA)甘蓝原生质体 (BB)(BB)植物细植物细胞融合胞融合植物组植物组织培养织培养白菜甘蓝植株(AABB)(AABB)去细胞壁去细胞壁去细胞壁去细胞壁原生质体融合原生质体融合白菜甘蓝原生质体原生质体(AABB)(AABB)白菜甘蓝杂种细胞(AABB)(AABB)再生出再生出 细胞壁细胞壁白菜细胞白菜细胞甘蓝细胞1.1.为什么为什么“番茄番茄马铃薯马铃薯”超级杂种植株没有如科超级杂种植株没有如科学家所想像的那样,地上长番茄、地下结马铃薯?学家所想像的那样,地上长番茄、地下结马铃薯? 马铃薯马铃薯番茄没有像人们预想的那样地上长番番茄没有像
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