工具酶的发现和基因工程的诞生课-件课件.ppt

1、发光的水母发光的水母设想？设想？蜘蛛羊蜘蛛羊自然界的自然界的“蓝玫瑰蓝玫瑰”基因工程基因工程培育蓝玫瑰培育蓝玫瑰1.1.获取蓝色基因获取蓝色基因限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶剪刀剪刀1.1.作用：作用： 2.2.作用部位：作用部位： 和和DNA分子内的一小段特殊核苷酸序列分子内的一小段特殊核苷酸序列磷酸二酯键磷酸二酯键识别与切割特定核苷酸序列识别与切割特定核苷酸序列作用结果：形成作用结果：形成2个粘性末端个粘性末端 如果其中一种限制性核酸内切酶的识别序列是如果其中一种限制性核酸内切酶的识别序列是GAATTC,它能在它能在G与与A之间切断之间切断DNA。 1.试写出下面三种限制性核酸内切酶切割

2、后所产生的粘性末端试写出下面三种限制性核酸内切酶切割后所产生的粘性末端切割出来的粘性末端有什么特点？切割出来的粘性末端有什么特点？-AGATCT-TCTAGA-碱基互补配对碱基互补配对作用结果：平末端 某种酶识别某种酶识别CCCGGG,CCCGGG,能在能在C C与与GG之间切断之间切断DNA.DNA.-CCCGGG-GGGCCC- Sma -CCC GGG-GGG CCC-思考：思考：有有2个识别序列个识别序列2.切割后产生几个粘性末端？切割后产生几个粘性末端？4个粘性末端个粘性末端目的基因目的基因我们已获得蓝色基因，我们已获得蓝色基因，如何把获得蓝色基因和载体如何把获得蓝色基因和载体DNA

3、DNA连接起来连接起来, ,需要什么工需要什么工具？具？2.重组含有蓝色基因的质粒重组含有蓝色基因的质粒DNADNA连接酶连接酶针线针线B质粒-运输工具目的基因不是一个完整的DNA分子，是DNA的一个 片段，它不能自我复制和表达（转录和翻译）。因此蓝色基因不可以直接导入玫瑰细胞。 需要载体作为运输工具质粒阅读材料，概括质粒的特点阅读材料，概括质粒的特点小组讨论小组讨论均用同一种限制性内切酶切割，产生相同的粘性末均用同一种限制性内切酶切割，产生相同的粘性末端，碱基互补配对，再用端，碱基互补配对，再用DNA连接酶连接。连接酶连接。以便于外源基因插入以便于外源基因插入课堂活动：课堂活动：模拟蓝玫瑰培

4、育过程中的形成重组DNA分子的步骤。材料：三色堇的一段DNA序列（含蓝色基因）、环状质粒剪刀、胶水三色堇的一段DNA序列和质粒上均只有EcoR酶的识别序列以及酶切位点（如图） 1.剪刀和胶水分别代表什么工具？2.提示步骤： 1.获得蓝色基因 2.重组含有蓝色基因的质粒四人一组，实验结束由组长汇报。（怎么导入玫瑰细胞？）（如何筛选出成功导入的细胞？）总结-基因工程的重要工具基因工程实质：基因重组基因工程实质：基因重组能力提升能力提升A.DNA连接酶、限制性内切酶、解旋酶B.限制性内切酶、解旋酶、DNA连接酶C.解旋酶、限制性内切酶、DNA连接酶D.限制性内切酶、DNA连接酶、解旋酶Ca酶切割产物（酶切割产物（bp）b酶再次切割产物（酶再次切割产物（bp）2100.1400.1000.5001900.200.800.600.1000.500A.a酶与b酶切断的化学键相同B.限制性内切酶a和b切除的DNA片段不能相互连接C.该DNA分子中，a酶有3个酶切位点D.仅用b酶切割该DNA分子，可得到3种DNA片段BA.大小为4.7kbB.大小为4.9kbC.能被E但不能被F切开D.能被F但不能被E切开A