TP抗体的测定及临床意义概要课件.ppt

1、梅毒螺旋体抗体的测定梅毒螺旋体抗体的测定及临床意义及临床意义南方医院检验科南方医院检验科 裘宇容裘宇容梅毒螺旋体（苍白密螺旋体）梅毒螺旋体（苍白密螺旋体） 梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、系统性性传播梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、系统性性传播疾病。人体受感染后，螺旋体很快播散到全身，几乎可疾病。人体受感染后，螺旋体很快播散到全身，几乎可侵犯全身各组织与器官，临床表现多种多样，且时显时侵犯全身各组织与器官，临床表现多种多样，且时显时隐，病程较长。隐，病程较长。 2005年国家卫生部公布年国家卫生部公布,在全国在全国27 种法定报告的种法定报告的 甲、乙类传染病中甲、乙类传染病中,梅毒发病人

2、数仅次于肺结核、乙型肝梅毒发病人数仅次于肺结核、乙型肝 炎、细菌性和阿米巴性痢疾、淋病而高居第五位炎、细菌性和阿米巴性痢疾、淋病而高居第五位(2002 年为第七位年为第七位)。 二二. 传播途径传播途径 一一. 概况概况n1、性接触传播、性接触传播 占占95%。 主要通过性交或其他性行为，如同性恋、主要通过性交或其他性行为，如同性恋、接吻等。梅毒密螺旋体大量存在于一、二接吻等。梅毒密螺旋体大量存在于一、二期梅毒患者的生殖器和其他部位的皮肤粘期梅毒患者的生殖器和其他部位的皮肤粘膜表面，也存在于唾液、精液、乳汁、尿膜表面，也存在于唾液、精液、乳汁、尿液和血液等体液中。未经治疗的梅毒患者液和血液等体

3、液中。未经治疗的梅毒患者在感染在感染12期内最具传染性。随着病期延期内最具传染性。随着病期延长，传染性越来越小，长，传染性越来越小，4年后通过性接触年后通过性接触无传染性。无传染性。n3、胎盘传播、胎盘传播 未经治疗的梅毒孕妇在整个病程都可经胎盘未经治疗的梅毒孕妇在整个病程都可经胎盘传播给胎儿。其中在一期或二期患者，血中传播给胎儿。其中在一期或二期患者，血中螺旋体最多。如不治疗造成流产或死胎的约螺旋体最多。如不治疗造成流产或死胎的约为为50%，发生胎传播梅毒的危险约，发生胎传播梅毒的危险约50%，感染梅毒感染梅毒1年后的胎盘传播的危险性逐渐降年后的胎盘传播的危险性逐渐降为为50%以下。病期超过

4、以下。病期超过4年虽通过性接触无年虽通过性接触无传染性，但仍可传给胎儿，病期越长，传染传染性，但仍可传给胎儿，病期越长，传染性越小。性越小。2、输血传染、输血传染4、产道传播、产道传播 新生儿在出生时，头部、肩部损伤或接新生儿在出生时，头部、肩部损伤或接触了母体生殖器都能受母体阴部的螺旋触了母体生殖器都能受母体阴部的螺旋体感染，而引起婴儿的后天性梅毒。体感染，而引起婴儿的后天性梅毒。5、其他传播、其他传播 哺乳、接触梅毒患者污染的衣被、毛巾、哺乳、接触梅毒患者污染的衣被、毛巾、食具或污染的医疗器械，都可引起梅毒食具或污染的医疗器械，都可引起梅毒的间接传播。的间接传播。人类对梅毒无先天免疫性，尚

5、无疫苗接种进人类对梅毒无先天免疫性，尚无疫苗接种进行人工免疫，仅能在受感染后产生感染性免行人工免疫，仅能在受感染后产生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染染三、梅毒的免疫性三、梅毒的免疫性首先产生首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后周后即可测出，早期梅毒抗梅治疗即可测出，早期梅毒抗梅治疗39个月后或晚个月后或晚期梅毒治疗期梅毒治疗2年后，大部分病人年后，大部分病人IgM可转阴性，可转阴性，再感染时又出现阳性，故再感染时又出现阳性，故IgM型抗体的存在是型抗体的存在是活动性（现症）梅毒活动性（现症）梅毒的表现。的表

6、现。感染梅毒感染梅毒4周左右产生周左右产生IgG型抗梅毒螺旋体抗体，型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，很长时间，IgG抗体仍可通过记忆细胞的作用抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出。继续产生，甚至终生在血清中可测出。l一种是梅毒特异性抗体一种是梅毒特异性抗体IgM和和IgG胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎晚期（胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎晚期（69个月）已能合成个月）已能合成IgM型抗体，出生后第型抗体，出生后第3个月个月开始形成开始形成IgG型抗体；型抗体；IgM抗体不能通过胎盘，抗体不能通

7、过胎盘，而而IgG抗体能通过胎盘，如患儿血清中检侧出抗体能通过胎盘，如患儿血清中检侧出19S-IgM抗梅毒螺旋体抗体是诊断先天梅毒的抗梅毒螺旋体抗体是诊断先天梅毒的有力证据有力证据l一种是非特异性抗体一种是非特异性抗体-反应素（反应素（reagin） 是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。一般种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。一般在感染后在感染后57周（或下疳出现后周（或下疳出现后23周）产生。周）产生。经正规治疗后可逐渐消失经正规治疗后可逐渐消失。四四. 梅毒的诊断梅毒的诊断1、病史、病史2、临床表现、临床表现3

8、、实验室检查。、实验室检查。（1）血清学检验）血清学检验(测抗体测抗体) （2）病原学检查：直接查梅毒螺旋体）病原学检查：直接查梅毒螺旋体(暗暗 视野显微镜视野显微镜,直接荧光抗体法直接荧光抗体法)（3）梅毒螺旋体核酸测定。）梅毒螺旋体核酸测定。 非特异性类脂质抗原血清试验非特异性类脂质抗原血清试验： 是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反反应素应素，用于初筛试验及疗效观察，用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种试可以分为以下四种试验，原理基本相同：验，原理基本相同： 1、性病研究实验室玻片试验（、性病研究实验室玻片试验（VDRL) ：

9、由于试剂需现配：由于试剂需现配 现用，故而国内实验室很少采用。但现用，故而国内实验室很少采用。但VDRL是唯一可用是唯一可用于神经性梅毒诊断的血清学方法于神经性梅毒诊断的血清学方法 2、快速血浆反应素环状卡片试验、快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)：在特制的纸片：在特制的纸片 上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现 凝集，用肉眼可观察结果。凝集，用肉眼可观察结果。 3、甲苯胺红试验（、甲苯胺红试验（TRUST)：在试剂中加入甲苯胺红代替：在试剂中加入甲苯胺红代替炭粉炭粉 颗粒，使结果更易于观察。颗粒，使结果更易于观察。 4、不加热血清反

10、应素试验（、不加热血清反应素试验（USR)梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验非特异性类脂质抗原非特异性类脂质抗原血清试验的缺陷：血清试验的缺陷： 1、特异性：不高。在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免、特异性：不高。在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、麻风病、静脉吸毒者以及怀孕妇女中均可出现疫性疾病、麻风病、静脉吸毒者以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性反应假阳性反应。用于初筛用于初筛试验。试验。 2、敏感性：不高。抗体过量可引起前带现象（、敏感性：不高。抗体过量可引起前带现象（1-2二期梅二期梅毒病人）；由于感染梅毒后反应素的出现晚

11、于特异性梅毒毒病人）；由于感染梅毒后反应素的出现晚于特异性梅毒螺旋体抗体；晚期梅毒反应素又可能转阴螺旋体抗体；晚期梅毒反应素又可能转阴-假阴性反应假阴性反应，因此这类试验不适于一、三期梅毒，对隐性梅毒和神经梅因此这类试验不适于一、三期梅毒，对隐性梅毒和神经梅毒也不敏感。因此此类试验做梅毒初筛时，存在一定数量毒也不敏感。因此此类试验做梅毒初筛时，存在一定数量的漏检的漏检非梅毒螺旋体抗原血清试验的优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的优点： 1、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随治疗逐渐下降，、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随治疗逐渐下降， 故可以作为疗效观察的指标故可以作为疗效观察的指标 2、此

12、类方法简便，价格低廉、此类方法简便，价格低廉梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验 梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验： 用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgMIgM和和/ /或或IgGIgG抗体，其敏感性和特异性均较高。常用的有以下五种方法：抗体，其敏感性和特异性均较高。常用的有以下五种方法： 1 1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)FTA-ABS)最敏感的方法最敏感的方法 技术操作上也是最困难的，故常不被临床实验室作为首选技术操作上也是最困难的，故常不被临床实验室作为首选 方法方法 2 2、梅毒螺

13、旋体血球凝集试验（、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHATPHA）国内使用的商品化国内使用的商品化 TPHA试剂盒均未通过国家的批批检试剂盒均未通过国家的批批检 3 3、梅毒螺旋体明胶凝集试验（、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)TPPA)确证试验方法确证试验方法 4 4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISATP-ELISA） 5 5、梅毒螺旋体快速诊断试验（、梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RTTP-RT）未通过国家的批批未通过国家的批批 检检梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验 梅毒螺旋体明胶凝集试验（梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA IgG） 原理：用超声裂解

14、的梅毒螺旋体为抗原，致敏惰性明胶颗原理：用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原，致敏惰性明胶颗 粒，此致敏明胶颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋粒，此致敏明胶颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋 体抗体结合，产生肉眼可观察的凝集反应。是体抗体结合，产生肉眼可观察的凝集反应。是TPHA 的升级产品。的升级产品。 优点：优点： 1、试剂稳定，批间差小试剂稳定，批间差小 2、结果判读清晰明确结果判读清晰明确 3、敏感性和特异性高敏感性和特异性高不足：结果判定主观，不易保存不足：结果判定主观，不易保存. 成本较高，成本较高， 不适合大批量检测不适合大批量检测梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验Serodia TPPA的操作步

15、骤的操作步骤6、结果判读、结果判读1、加入样品稀释液、加入样品稀释液100l25l25l25l孔号143212、加入测试样品、加入测试样品25l孔号14321致敏颗粒4、加入明胶颗粒、加入明胶颗粒最终稀释倍数孔号143211:401:8025l25l未致敏颗粒5、混匀，加盖，孵育、混匀，加盖，孵育2个小时个小时3、样品的倍比稀释、样品的倍比稀释孔号14321最终稀释倍数1:201:4025l25l25l25l弃去弃去Serodia TPPA的结果判读（定性试验）的结果判读（定性试验）梅毒螺旋体酶联免疫试验（梅毒螺旋体酶联免疫试验（TP-ELISA） 原理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加原

16、理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加入待检血清以及酶标抗原，形成双抗原夹心，同时入待检血清以及酶标抗原，形成双抗原夹心，同时检测检测IgG、IgM抗体。少数试剂采用间接法，检测抗体。少数试剂采用间接法，检测IgG 优点：优点：1、敏感性和特异性较高、敏感性和特异性较高 2、价格较低，适合于对大量样品的筛查、价格较低，适合于对大量样品的筛查 3、可实现操作的自动化、客观化、可实现操作的自动化、客观化 不足：各家不足：各家ELISA试剂盒采用的抗原和工艺不试剂盒采用的抗原和工艺不 同，使测定的敏感性和特异性产生较大的同，使测定的敏感性和特异性产生较大的 差异，临床实验室在选用差异，临床实验室在

17、选用ELISA试剂前应认试剂前应认 真进行评估真进行评估. 基因重组抗原基因重组抗原,假阴性假阴性. 梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验n有研究表明有研究表明:使用由使用由rTP47,rTP17和和rTP15这这3种重组表达相关抗原包被的种重组表达相关抗原包被的ELISA试剂盒试剂盒,有非常好的敏感性和特有非常好的敏感性和特异性异性.nELISA试剂对试剂对II期、潜伏期和疗后梅毒期、潜伏期和疗后梅毒的特异性和敏感性都较好，但对的特异性和敏感性都较好，但对I期梅期梅毒的敏感性尚有待提高。毒的敏感性尚有待提高。样品对样品对ELISA及及PA检测结果的影响检测结果的影响 X：假阳性：假阳性 O加热灭

18、活加热灭活 X：与底物有关：与底物有关O溶血溶血O黄疸黄疸 O脂血脂血 OO血浆血浆 O O血清血清 ELISAPA样品类型样品类型O：无影响：无影响：部分有影响：部分有影响X：有影响：有影响n敏感性和特异性敏感性和特异性nELISA比比TPPA法稍差。法稍差。n13736份标本份标本nTPPA法法 阳性阳性214nRPR法法 阳性阳性192(18例确诊假阳性例确诊假阳性 22例假阴性例假阴性)nELISA法法 阳性阳性204(4例假阳性例假阳性) 无偿献血者无偿献血者(1855岁岁)中中, ELISA法为法为0.58%。 其中其中5155岁阳性率达岁阳性率达2.14 ( 9 /421)n无临

19、床症状，只有抗体阳性。阳性结果难以用无临床症状，只有抗体阳性。阳性结果难以用正在或曾经感染梅毒解释。正在或曾经感染梅毒解释。普通人群：阳性率普通人群：阳性率 1.5% ( 1.52% 1.61% ) 。 其中其中 50岁岁 53.3% 62.3% 7180岁岁 27.7% 27.9%。ELISA或或TPPA法假阳性（老年人）法假阳性（老年人）n梅毒螺旋体抗体试验所测为抗T. pa llidum的IgG/ IgM类抗体。试验中所用抗原nFTA2ABS：T. pallidum subsp pallidum 的Nichols株冻干悬液nTPPA：Nichols株超声处理nEL ISA：纯化的/基因重

20、组的分子量(MW) 47 000、45500、17000、15500的T. pa llidum特异抗原梅毒血清学试验的假阳性生物学基础梅毒血清学试验的假阳性生物学基础n人类共生的螺旋体很多，虽然有些螺旋体可能人类共生的螺旋体很多，虽然有些螺旋体可能不致病不致病,但可能参与齿龈类、牙周病、腹泻等但可能参与齿龈类、牙周病、腹泻等的发病。已发现抗的发病。已发现抗T. pallidum MW 37 000的鞭毛鞘蛋白的单克隆抗体和抗的鞭毛鞘蛋白的单克隆抗体和抗MW47 000脂蛋白的单克隆抗体可与某些口腔螺旋体反脂蛋白的单克隆抗体可与某些口腔螺旋体反 应。齿龈炎和牙周病患者常产生抗梅毒螺旋体应。齿龈炎

21、和牙周病患者常产生抗梅毒螺旋体( T.pallidum subsp. pallidum )MW 47 000、37 000、14 000和和12 000抗原的抗原的IgG类抗体。甚至少部分健康人也可测出抗类抗体。甚至少部分健康人也可测出抗MW 47 000和和37 000抗原的抗体抗原的抗体。 如何解决假阳性问题？n进行梅毒螺旋体血清学进行梅毒螺旋体血清学试验时，待测血清预先试验时，待测血清预先用非致病性密螺旋体用非致病性密螺旋体T. phageden is的的Reiter株株 提取物吸收（或阳性提取物吸收（或阳性标本进行吸收试验。标本进行吸收试验。n即使如此即使如此,试验的特异性试验的特异性

22、仍只能达仍只能达99%左右左右,不能不能绝对排除假阳性绝对排除假阳性 关于梅毒血清学试验程序的探讨（一）关于梅毒血清学试验程序的探讨（一）先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR、TRUST等）进行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验等）进行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA、TPHA、ELISA等）进行确认。等）进行确认。 优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使 梅毒检测的成本可以保持在低水平梅毒检测的成本可以保持在低水平 缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较 差，导致临床

23、上易出现漏检的情况。差，导致临床上易出现漏检的情况。 先进行梅毒螺旋体先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳抗原血清试验，阳性时再进行非梅毒性时再进行非梅毒螺旋体抗原血清试螺旋体抗原血清试验。验。关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）关于梅毒血清学试验程序的探讨（二） 梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA等）等）（-）阴性报告阴性报告（+）非梅毒螺旋体抗原血清试验（非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR等）等）（+）现症梅毒现症梅毒抗梅治疗，疗效观察抗梅治疗，疗效观察（-）询问梅毒既往感染和治疗史询问梅毒既往感染和治疗史（

24、有）（有）既往感染既往感染（无）（无）随访或抗梅治疗随访或抗梅治疗 为了控制一些传染性疾病的院内感染为了控制一些传染性疾病的院内感染,现现已规定凡是手术、输血已规定凡是手术、输血(供、受血者供、受血者) 、各、各种创伤性检查的患者种创伤性检查的患者, 均须进行包括均须进行包括HBV、HCV、H IV (1 + 2)和梅毒螺旋体的相关和梅毒螺旋体的相关血清学检验。血清学检验。 这这4种病原所致传染病由于对健康和生种病原所致传染病由于对健康和生命造成的危害以及患病后对患者参军、入命造成的危害以及患病后对患者参军、入学、就业、婚嫁、家庭稳定等的影响学、就业、婚嫁、家庭稳定等的影响,因此因此相关检测结

25、果的正确与否一直是十分敏感的相关检测结果的正确与否一直是十分敏感的医学和社会问题。错误的检测结果是很多医医学和社会问题。错误的检测结果是很多医疗纠纷的起因。疗纠纷的起因。 在在全国临床检验操作规程全国临床检验操作规程中中 建议两种方法建议两种方法(RPR与与ELISA)同时进行。同时进行。 梅毒血清学试验阳性结果只提示所测标本中梅毒血清学试验阳性结果只提示所测标本中有抗类脂抗体和有抗类脂抗体和/或抗或抗T. pa llidum抗体存抗体存在在,不能作为患者感染梅毒螺旋体不能作为患者感染梅毒螺旋体(患梅毒患梅毒)的的绝对依据绝对依据;检测结果应结合临床综合分析检测结果应结合临床综合分析 。谢谢 谢！谢！