免疫组化病理诊断-PPT课件.ppt
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1、免疫组化在病理诊断中免疫组化在病理诊断中的正确应用的正确应用引言引言免疫组化技术已广泛应用于病理诊断:免疫组化技术已广泛应用于病理诊断:l在解决疑难病例诊断方面起着重要作用;在解决疑难病例诊断方面起着重要作用;l随着人们医疗风险意识的增强,许多普通的病随着人们医疗风险意识的增强,许多普通的病例也常常需要免疫组化进一步证实;例也常常需要免疫组化进一步证实;l成为病理医生常规工作不可缺少的重要工作;成为病理医生常规工作不可缺少的重要工作;常规手段常规手段;引言引言免疫组化技术广泛应用于病理诊断工免疫组化技术广泛应用于病理诊断工作得益于免疫组化技术的进步:作得益于免疫组化技术的进步:l抗原修复技术;
2、抗原修复技术;l更加敏感的检测系统或放大系统的建立;更加敏感的检测系统或放大系统的建立;l更多可用于常规标本的抗体的出现;更多可用于常规标本的抗体的出现;l快捷地抗体流通及良好的售后服务。快捷地抗体流通及良好的售后服务。引言引言肿瘤病理诊断:肿瘤病理诊断:lHE形态(标准模糊):形态(标准模糊):经验、权威主观性经验、权威主观性强强lHE形态形态 + 特染,电镜特染,电镜lHE形态形态 + 免疫组化免疫组化 + 分子病理?分子病理?免疫组化:免疫组化:l新的诊断标准!新的诊断标准!l更客观!更权威!更客观!更权威!l肿瘤分类有了本质的区别肿瘤分类有了本质的区别l有了客观标准作为对照,有了客观标
3、准作为对照,再不仅仅靠积累经验再不仅仅靠积累经验, 专家专家l大大缩短学习周期大大缩短学习周期l年青人有了更多的机会!年青人有了更多的机会!引言引言Experience based? Experience-Evidence based!The days of saying “It is what it is because I say it is” are gone!病理诊断进入新时代!病理诊断进入新时代!当代合格的病理医生当代合格的病理医生l临床知识临床知识 lHEHE形态知识形态知识 l免疫组化知识免疫组化知识l分子病理知识分子病理知识引言引言目前国内免疫组化在病理诊断应用中目前国内免疫组
4、化在病理诊断应用中存在的问题亟待解决存在的问题亟待解决:技术操作不规范,缺乏室内、室间质控技术操作不规范,缺乏室内、室间质控不充分了解应用范围不充分了解应用范围知识更新太快:每年知识更新太快:每年12000篇新的文献篇新的文献(2005年年, 人体病理),知识老化!人体病理),知识老化!简单化!抗体选择及结果判断失误简单化!抗体选择及结果判断失误过分或单纯依赖免疫组化!忽视临床、过分或单纯依赖免疫组化!忽视临床、HE结合!结合!带来新的误诊!带来新的误诊!不做误诊更多!不做误诊更多!必须做!但要正确应用!必须做!但要正确应用!一、免疫组化的应用范围一、免疫组化的应用范围肿瘤的病理诊断:肿瘤的病
5、理诊断:l帮助良恶性病变鉴别;帮助良恶性病变鉴别;l未分化恶性肿瘤(癌或肉瘤)性质的判断;未分化恶性肿瘤(癌或肉瘤)性质的判断;l各种圆细胞、梭形细胞、多形性肿瘤的鉴别各种圆细胞、梭形细胞、多形性肿瘤的鉴别诊断;诊断;l帮助确定转移性肿瘤的原发部位等。帮助确定转移性肿瘤的原发部位等。 CKAE3 T GCK20 CK7肺结肠癌转移肺结肠癌转移细胞角蛋白细胞角蛋白: CK 7 and 20: CK 7 and 20 CK7+ CK7 -CK20+ 泌尿上皮癌,卵巢黏液癌,泌尿上皮癌,卵巢黏液癌, 消化道癌消化道癌 (结肠)(结肠) 部分胃癌,部分胰胆道癌部分胃癌,部分胰胆道癌 Merkel细胞癌
6、细胞癌CK20- 消化道以外的腺癌:肺、消化道以外的腺癌:肺、 肝癌、肾细胞癌、前列肝癌、肾细胞癌、前列 乳腺、浆液性及宫内膜癌乳腺、浆液性及宫内膜癌 , 腺癌、鳞状细胞癌腺癌、鳞状细胞癌 间皮瘤、膀胱、宫颈、胰腺间皮瘤、膀胱、宫颈、胰腺 内分泌癌(除甲状腺)内分泌癌(除甲状腺) 唾腺来源的癌唾腺来源的癌(90%)透明细胞癌的免疫组化鉴别透明细胞癌的免疫组化鉴别肾透明细胞癌肾透明细胞癌肝透明细胞癌肝透明细胞癌肾上腺腺瘤肾上腺腺瘤卵巢透明细胞癌卵巢透明细胞癌HEPPAR1HEPPAR1- -+ +- - -CD10CD10+ + +- - -34E-1234E-12- - - -+ +Inhab
7、inInhabin-/+-/+- -+ +- -Melan-AMelan-A- - -+ + - -EMAEMA+ + +- -+ +pCEApCEA- -+ +- -+/-+/-CK19CK19+/-+/- - -+ +CK7CK7- - - -+ +CK8/CK18CK8/CK18+ + +- -+ +一、免疫组化的应用范围一、免疫组化的应用范围淋巴造血系统疾病的淋巴造血系统疾病的诊断:诊断:l鉴别反应性增生性疾鉴别反应性增生性疾病与淋巴瘤;病与淋巴瘤;l各类淋巴瘤分型的重各类淋巴瘤分型的重要依据。要依据。在淋巴造血疾病的病在淋巴造血疾病的病理诊断中免疫组化目理诊断中免疫组化目前已成为常规
8、开展的前已成为常规开展的工作项目。工作项目。 Bcl-2 Bcl-2一、免疫组化的应用范围一、免疫组化的应用范围内分泌肿瘤的诊断:不仅可以帮助确定内分泌肿瘤的诊断:不仅可以帮助确定诊断,还可以通过检测肿瘤分泌激素达诊断,还可以通过检测肿瘤分泌激素达到功能分类的目的。到功能分类的目的。在软组织肿瘤、神经系统肿瘤等其他各在软组织肿瘤、神经系统肿瘤等其他各系统肿瘤的病理诊断中免疫组化也具有系统肿瘤的病理诊断中免疫组化也具有重要的作用。重要的作用。 一、免疫组化的应用范围一、免疫组化的应用范围小活检病理检查:能明确地显示癌细胞的小活检病理检查:能明确地显示癌细胞的存在(如胃粘膜活检中的印戒细胞癌);存
9、在(如胃粘膜活检中的印戒细胞癌);肿瘤穿刺活检时肿瘤类型的确定。肿瘤穿刺活检时肿瘤类型的确定。微小癌、微小转移灶(淋巴结及骨髓)、微小癌、微小转移灶(淋巴结及骨髓)、甚至不易察觉的病变得以确诊。甚至不易察觉的病变得以确诊。 CgAEMAM, 54, M, 54, 胃胃大弯溃疡大弯溃疡CD3CD3,CD20CD20,CD68CD68均散在细胞均散在细胞阳性,数量不等阳性,数量不等活检活检手术手术类癌类癌SCC类癌活检类癌活检手术手术CK类癌类癌SCCCgA类癌类癌SCCSCCSCCTTF-1类癌类癌Ki67类癌类癌活检标本类癌和小细胞癌的相对鉴别活检标本类癌和小细胞癌的相对鉴别 特点特点 类癌类
10、癌 小细胞癌小细胞癌肿瘤部位肿瘤部位 中央或周围中央或周围 中央多见中央多见核染色质核染色质 颗粒状,有时粗糙颗粒状,有时粗糙 细致、均匀细致、均匀血管血管 薄壁薄壁 厚壁、肾小球样厚壁、肾小球样核分裂像核分裂像 10/10HPF 10/10HPF CgA, Syn 阳性强阳性强 阳性弱阳性弱Ki-67 低(典型的低(典型的20%) 高(典型的高(典型的50%)From AJSP 2005, 29(2):179-187一、免疫组化的应用范围一、免疫组化的应用范围细针穿刺、细胞学诊断主要是定性细针穿刺、细胞学诊断主要是定性诊断?诊断?免疫组化的应用有可能对部分肿瘤免疫组化的应用有可能对部分肿瘤进
11、一步地进行分类或明确来源。进一步地进行分类或明确来源。LCA一、免疫组化的应用范围一、免疫组化的应用范围乳腺癌激素受体(乳腺癌激素受体(ER、PR)的检测在)的检测在指导临床治疗方面已起到了重要的作用。指导临床治疗方面已起到了重要的作用。针对肿瘤基因产物(针对肿瘤基因产物(C-erbB2, P53, ALK,CD117等)的抗体为基因治疗提供重要等)的抗体为基因治疗提供重要的参考依据。的参考依据。细胞增殖核抗原(细胞增殖核抗原(Ki-67)等免疫组化染)等免疫组化染色可为肿瘤的预后提供依据。色可为肿瘤的预后提供依据。已用于临床的新型靶向治疗药物已用于临床的新型靶向治疗药物美罗华:美罗华:CD2
12、0单克隆抗体,用于治疗单克隆抗体,用于治疗CD20+的的B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤Herceptin:c-erbB-2(neu)单克隆抗)单克隆抗体,用于治疗体,用于治疗c-erbB-2过度表达的乳腺过度表达的乳腺癌癌STI-571(Gleevec,imatinib):小分):小分子选择性蛋白酪氨酸激酶抑制剂,用于子选择性蛋白酪氨酸激酶抑制剂,用于CML和和GIST治疗治疗一、免疫组化的应用范围一、免疫组化的应用范围某些感染性疾病的病因诊断,如某些感染性疾病的病因诊断,如HBV、HCV、EBV、CMV等病毒的检测。等病毒的检测。但与分子生物学等技术相比,免疫组化但与分子生物学等技术相比,免疫组化检
13、测病原微生物敏感性常常较差,因此检测病原微生物敏感性常常较差,因此应用范围有限。应用范围有限。 HPVHBsAg二、免疫组化的局限性免疫组化的局限性对于许多非肿瘤性疾病由于常常无特异对于许多非肿瘤性疾病由于常常无特异的抗原表达,因此其诊断仍依据于特异的抗原表达,因此其诊断仍依据于特异的常规光镜及电镜形态表现,如肾小球的常规光镜及电镜形态表现,如肾小球肾炎的诊断,多种感染性疾病、各种代肾炎的诊断,多种感染性疾病、各种代谢性疾病,细胞内谢性疾病,细胞内/外异常物质沉积性疾外异常物质沉积性疾病(如淀粉样变性),肌活检诊断等;病(如淀粉样变性),肌活检诊断等; 二、免疫组化的局限性二、免疫组化的局限性
14、至今无绝对特异的抗体!至今无绝对特异的抗体!相当多的肿瘤缺乏特异的抗原表达;相当多的肿瘤缺乏特异的抗原表达;同一种抗原常常可在多种肿瘤中表达,同一种抗原常常可在多种肿瘤中表达,不少肿瘤又由于分化太差或细胞分子结构不少肿瘤又由于分化太差或细胞分子结构改变而不表达相关的抗原。改变而不表达相关的抗原。 二、免疫组化的局限性二、免疫组化的局限性不同抗体滴度有不同的阳性结果:不同抗体滴度有不同的阳性结果:lHBME-1 1:100 (推荐浓度推荐浓度)间皮膜阳性,间皮膜阳性,几乎所有腺癌胞浆阳性几乎所有腺癌胞浆阳性l1:200015000 仅仅间皮膜阳性仅仅间皮膜阳性内源性生物素:假阳性(胞浆),如肝内
15、源性生物素:假阳性(胞浆),如肝细胞及肝细胞癌细胞及肝细胞癌不同克隆不同克隆ERER表达差异表达差异SP16F11二、免疫组化的局限性二、免疫组化的局限性免疫组化的标准免疫组化的标准化(同一实验室化(同一实验室及不同实验室间及不同实验室间结果的一致性)、结果的一致性)、定量结果的判断定量结果的判断等还存在不少的等还存在不少的问题尚待解决。问题尚待解决。 三、如何正确应用免疫组化三、如何正确应用免疫组化 正确、有价值的免疫组化结果:正确、有价值的免疫组化结果:l免疫组化实验室规范、合适的技术操作(包免疫组化实验室规范、合适的技术操作(包括组织固定、抗原修复、检测系统、各类试括组织固定、抗原修复、
16、检测系统、各类试剂的质量保证,染色技术等)是最重要的基剂的质量保证,染色技术等)是最重要的基础保证;础保证;l但病理医生在组织块的选择,抗体的选择,但病理医生在组织块的选择,抗体的选择,结果的判断等方面也起着不容忽视的作用。结果的判断等方面也起着不容忽视的作用。 三、如何正确应用免疫组化三、如何正确应用免疫组化 1、组织块的选择、组织块的选择首选有典型病变、分化较好、固定较好首选有典型病变、分化较好、固定较好的组织块。的组织块。应尽量选择有正常组织(有内对照组织)应尽量选择有正常组织(有内对照组织)的蜡块。的蜡块。对固定时间较长或未及时固定的组织,对固定时间较长或未及时固定的组织,冻融后的组织
17、或脱钙后的组织应尽可能冻融后的组织或脱钙后的组织应尽可能地避免使用。地避免使用。 2. 2. 抗体的选择抗体的选择经验性、知识性要求很高的一项艺术工作。经验性、知识性要求很高的一项艺术工作。选择到组织合适的抗体选择到组织合适的抗体费用最小而又能完费用最小而又能完全达到目的。全达到目的。病理医生须通过认真观察病理医生须通过认真观察HE切片并联系临床相切片并联系临床相关信息,准确地列出要鉴别的几种可能性诊断。关信息,准确地列出要鉴别的几种可能性诊断。l病理医生对病理医生对HE形态要熟练掌握,知识面广,既不能形态要熟练掌握,知识面广,既不能撒大网似的罗列出太多的诊断,使费用增加过多;也撒大网似的罗列
18、出太多的诊断,使费用增加过多;也不能遣漏可能的诊断,造成误诊或再选择抗体延迟报不能遣漏可能的诊断,造成误诊或再选择抗体延迟报告时间。告时间。 大细胞未分化癌?大细胞未分化癌?CKCK,EMAEMA恶黑?恶黑?S100S100,HMB45HMB45淋巴瘤?淋巴瘤?CD20CD20,CD3CD3CK+,EMA+,S100-, HMB45- CK+,EMA+,S100-, HMB45- CD20-,CD3-,CD20-,CD3-,诊断:大细胞未分化癌诊断:大细胞未分化癌ALCLALCL?CD30CD30,ALK1ALK1CD302. 2. 抗体的选择抗体的选择另一方面病理医生要对各种抗体的免疫反另一
19、方面病理医生要对各种抗体的免疫反应谱及交叉反应(应谱及交叉反应(更重要!更重要!)都十分熟)都十分熟悉:悉:l如如CK不仅表达于上皮还可表达于肌纤维母细胞,不仅表达于上皮还可表达于肌纤维母细胞,平滑肌细胞,间皮下细胞平滑肌细胞,间皮下细胞等。等。并熟知各种肿瘤的免疫表型(并熟知各种肿瘤的免疫表型(包括异常的包括异常的免疫组化表达免疫组化表达!)。)。 CKCD312. 2. 抗体的选择抗体的选择如何了解各种抗体的如何了解各种抗体的免疫反应谱及各种肿免疫反应谱及各种肿瘤的免疫表型?瘤的免疫表型?l产品目录产品目录 ?l专业书籍专业书籍 ?l新的文献新的文献 l专家咨询专家咨询 l网上检索网上检索
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