高中生物基础实验教材实验高三复习课件.pptx

1、考点1 观察类实验1.实验归类实验名称细胞的状态染色剂生物材料观察DNA、RNA在细胞中的分布死细胞甲基绿吡罗红人的口腔上皮细胞观察线粒体活细胞健那绿观察细胞的减数分裂死细胞无(为固定装片)蝗虫精母细胞低温诱导植物染色体数目的变化死细胞改良苯酚品红染液洋葱根尖细胞观察细胞的有丝分裂死细胞龙胆紫(或醋酸洋红)观察多种多样的细胞活或死细胞无(无需染色)酵母菌细胞、水绵细胞、叶的保卫细胞、鱼的红细胞等观察叶绿体活细胞藓类的叶(或菠菜叶、黑藻叶)观察植物细胞的质壁分离与复原活细胞紫色洋葱鳞片叶表皮细胞镜筒压片夹载物台遮光器与光圈反光镜镜座镜柱镜臂细准焦螺旋粗准焦螺旋物镜目镜显微镜的结构：显微镜的结构：

2、（一）使用高倍显微镜观察几种细胞（1-P7）2显微镜相关的知识 (1)观察：高倍镜使用要诀先低后高，找移转调说明：(1)以上实验除了“观察植物细胞的质壁分离与复原”使用低倍镜即可外，其余均需使用高倍镜。(2)鉴定类实验中的“脂肪的切片法鉴定”、探究性实验中的“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”都需用显微镜观察。若在低倍镜下看不到细胞，不可改用高倍物镜继续观察。若在低倍镜下看不到细胞，不可改用高倍物镜继续观察。考点 2用显微镜观察多种多样的细胞一、显微镜的使用一、显微镜的使用注：注：高倍镜的使用方法高倍镜的使用方法2.物像移动与装片移动的关系：显微镜下所成的像是物像移动与装片移动的关系：显微镜下

3、所成的像是倒像倒像，物，物像移动的方向与载玻片移动的方向是像移动的方向与载玻片移动的方向是相反的相反的，即偏哪移哪。，即偏哪移哪。3.镜头长度与放大倍数的关系：镜头长度与放大倍数的关系：“反目成仇反目成仇”4.放大倍数是目镜放大倍数是目镜*物镜，且放大的是长度或宽度物镜，且放大的是长度或宽度5.低倍镜低倍镜高倍镜，有哪些变化高倍镜，有哪些变化6. 视野光线亮度的调整与切片颜色、厚度的关系视野光线亮度的调整与切片颜色、厚度的关系7.7.污染物位置的判断污染物位置的判断注：制片时，需注意若材料为动物，一注：制片时，需注意若材料为动物，一般滴般滴生理盐水生理盐水制片，若为植物，一般滴制片，若为植物，

4、一般滴蒸馏水或清水蒸馏水或清水制片制片2.2.实验：观察实验：观察DNADNA和和RNARNA在细胞中的分布在细胞中的分布1、实验原理：、实验原理：2、材料与试剂：、材料与试剂：DNA + DNA + 甲基绿甲基绿 绿色绿色RNA + RNA + 吡罗红吡罗红 红色红色材料：材料： 试剂：试剂：口腔上皮细胞、口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶内表皮细胞（组织颜色浅）洋葱鳞片叶内表皮细胞（组织颜色浅）质量分数质量分数0.90.9的的NaClNaCl溶液溶液质量分数质量分数8 8的盐酸：的盐酸：吡罗红甲基绿染色剂（吡罗红甲基绿染色剂（现配现用现配现用）蒸馏水蒸馏水（一）取口腔上皮细胞（一）取口腔上皮细胞制片

5、制片 1. 0.9NaCl溶液：溶液：保持细胞形态保持细胞形态 2.烘干：烘干：使细胞固定在载玻片上使细胞固定在载玻片上（二）（二）水解水解 （三）（三）冲洗冲洗涂片涂片 蒸馏水（缓冲）：蒸馏水（缓冲）：洗去盐酸洗去盐酸（四）（四）染色染色 （五）（五）观察观察3、过程：、过程： 低倍镜观察：低倍镜观察：选择染色均匀、色泽浅的区域选择染色均匀、色泽浅的区域高倍镜观察高倍镜观察制片制片水解水解冲洗冲洗染色染色观察观察盐盐酸酸a、改变细胞膜通透性，改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞加速染色剂进入细胞b、使染色体中使染色体中DNA和蛋白质分离和蛋白质分离，利于，利于 DNA和染色剂结合和染色剂结合

6、考点 3观察线粒体和叶绿体一、材料一、材料新鲜藓类叶、黑藻叶或新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶略带叶肉细胞的下表皮菠菜叶略带叶肉细胞的下表皮，口腔上皮细胞口腔上皮细胞。二、原理二、原理1.叶绿体具有叶绿素，本身具有颜色，叶绿体具有叶绿素，本身具有颜色，不需要染色不需要染色。2. 用用 健健 那那 绿绿 染染 液液 染色后的口腔上皮细胞中，染色后的口腔上皮细胞中，线粒体线粒体呈呈_色，色，细胞质接近无色细胞质接近无色。（唯一的活细胞染料，。（唯一的活细胞染料，制片时直接将材料放入制片时直接将材料放入健那绿染液健那绿染液中）中）蓝绿蓝绿三、步骤三、步骤1.观察叶绿体时观察叶绿体时，直接用显微镜观察。（装

7、片要保持有水状态），直接用显微镜观察。（装片要保持有水状态）2.观察线粒体时，将上皮细胞染色后用显微观察线粒体时，将上皮细胞染色后用显微镜观察。镜观察。4.4.质壁分离质壁分离（失水）和（失水）和质壁分离复原质壁分离复原（吸水）（吸水）（1）质壁分离的原因分析）质壁分离的原因分析内因内因外界溶液浓度外界溶液浓度 细胞液浓度细胞液浓度原生质层相当于一层半透膜原生质层相当于一层半透膜细胞壁的伸缩性细胞壁的伸缩性小于小于原生质层原生质层外因：外因： （2）质壁分离与复原的实验流程）质壁分离与复原的实验流程必须是成熟的植物活必须是成熟的植物活细胞，细胞，最好有颜色最好有颜色外界溶液浓外界溶液浓度应适中

8、，度应适中，不能过低或不能过低或过高过高（5 5）质壁分离）质壁分离实验实验的拓展应用的拓展应用 判断成熟植物细胞是否有生物活性判断成熟植物细胞是否有生物活性 测定细胞液浓度范围测定细胞液浓度范围 比较不同植物细胞的细胞液浓度比较不同植物细胞的细胞液浓度 鉴别不同种类的溶液鉴别不同种类的溶液会发生会发生质壁分离自动复原质壁分离自动复原现象的溶液：现象的溶液：一定浓度一定浓度的的KNO3、NaCl 、尿素、甘油、尿素、甘油、乙二醇乙二醇等等、实验原理、实验原理 、方法步骤、方法步骤(五)观察植物细胞的有丝分裂（1-p115) (1) (1) 根尖根尖、茎尖的分生区、茎形成层、愈伤、茎尖的分生区、

9、茎形成层、愈伤组织可观察到有丝分裂。组织可观察到有丝分裂。(2)(2)细胞核细胞核内的染色体容易被内的染色体容易被碱性染料碱性染料着色着色（1 1）根尖培养（材料）根尖培养（材料）（2 2）装片制作装片制作：解离解离漂洗漂洗染色染色制片制片（顺序不能交换）（顺序不能交换）（3 3）观察观察：低倍镜观察低倍镜观察 高倍镜观察高倍镜观察 （4 4）绘图绘图： 、 注意事项注意事项培养根尖：培养根尖：应每天应每天换水换水 ( (防止水中缺氧烂根防止水中缺氧烂根) ) 取材取材：取生长旺盛、带有取生长旺盛、带有分生区的根尖分生区的根尖，长度，长度 为根尖的为根尖的2-3mm(2-3mm(时间：上午时间

10、：上午1010时至下午时至下午2 2时最佳）时最佳）解离解离：目的：目的：使组织细胞分离开使组织细胞分离开，杀死并固定细胞；，杀死并固定细胞； 解离液：解离液：15%15%盐酸盐酸95%95%酒精溶液酒精溶液1111； 时间：时间：室温室温3-53-5分钟，至根尖酥软（分钟，至根尖酥软（时间短则细时间短则细胞没有完全分离，长则可能使根尖烂掉）胞没有完全分离，长则可能使根尖烂掉） 漂洗漂洗：用用清水清水漂洗漂洗10min10min，目的目的是是洗去组织中的解洗去组织中的解 离液离液，便于染色，便于染色( (防止酸碱中和防止酸碱中和) )。压片压片：目的目的是使细胞分散开。是使细胞分散开。方法方法

11、（用镊子弄碎（用镊子弄碎根尖，盖上盖玻片，再放上一块根尖，盖上盖玻片，再放上一块载玻片载玻片，压片），压片）（压片过重过猛可能将组织压碎、压烂；过轻则细（压片过重过猛可能将组织压碎、压烂；过轻则细胞未充分分散开而重叠。）胞未充分分散开而重叠。）低倍镜观察：低倍镜观察：找到找到分生区分生区细胞（特点：细胞（特点：细胞呈正细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂方形，排列紧密，有的细胞正在分裂） 高倍镜观察：高倍镜观察：找各时期细胞。可见找各时期细胞。可见处于间期的细处于间期的细胞最多胞最多，中期最少。不能看到某个细胞连续分裂的过，中期最少。不能看到某个细胞连续分裂的过程，因细胞在解离时已被杀死。

12、程，因细胞在解离时已被杀死。染色染色：染液染液（0.01g/mL0.01g/mL的龙胆紫或的龙胆紫或0.02g/mL0.02g/mL的醋的醋酸洋红）酸洋红）; ;时间时间为为3 35 5分钟；分钟；目的目的是使染色体或染色是使染色体或染色质被碱性染料染成深色，便于观察质被碱性染料染成深色，便于观察。(七)低温诱导染色体加倍(2-p88) 进行正常有丝分裂的植物分生组织细胞，在有丝分裂后期，染色体的着丝点分裂，子染色体在纺锤体的作用下，分别移向两极，最终被平均分配到两个子细胞中去。 用低温处理植物分生组织细胞，能够抑制纺锤体形成，以至影响染色体被拉向两极，细胞也不能分裂成两个子细胞，于是植物细胞

13、染色体数目发生变化。（与秋水仙素作用类似）一、实验原理一、实验原理低温诱导：低温诱导：固定形态：固定形态：制作装片：制作装片： 观察：观察：培养洋葱根尖，待根长出约1cm左右将整个装置放入冰箱低温室内（4 ）,诱导培养36小时剪取诱导处理的根尖约0.5-1cm,放入卡诺氏液（甲醇冰醋酸=11）浸泡0.5-1小时，以固定形态，然后用体积分数95%酒精冲洗2次解离漂洗染色（改良苯酚品红染液） 制片（同有丝分裂）视野中既有正常的二倍体细胞,也有染色体数目发生改变的细胞.二、实验过程二、实验过程(六)观察细胞的减数分裂(2-p21)实验材料：蝗虫精巢精母细胞减数分裂固定装片等低倍镜观察在低倍镜下观察蝗

14、虫精母细胞减数分裂固定装片识别初级精母细胞、次级精母细胞和精细胞高倍镜观察先在低倍镜下依次找到减数第一次分裂中期、后期和减数第二次分裂中期、后期的细胞，再在高倍镜下仔细观察染色体的形态、位置和数目根据观察结果，尽可能多地绘制减数分裂不同时期的细胞简图绘图观察类实验有颜色的要脱色有颜色的要脱色注意取材问题 (1)观察DNA、RNA在细胞中的分布不能选用哺乳动物成熟的红细胞(无细胞核，也就几乎不含DNA、RNA)； (2)不能用观察叶绿体的材料来观察线粒体(叶绿体中的色素颜色会掩盖健那绿染色后的颜色变化)； (3)观察细胞的有丝分裂或低温诱导植物染色体数目的变化时，应注意观察呈正方形的根尖分生区细

15、胞(长方形的细胞可能是根尖的伸长区或成熟区的细胞，没有分裂能力)；(4)观察细胞的减数分裂所选的材料可以是动物的精巢和植物的雄蕊，而不宜选用动物的卵巢和植物的雌蕊(雄配子的产生数量远远多于雌配子，更容易观察到减数分裂的细胞)；(5)观察叶绿体时，若选用菠菜叶则取稍带些叶肉的下表皮(靠近下表皮的叶肉细胞中的叶绿体较大而数目较少)；(6)观察植物细胞的质壁分离与复原应选取成熟的植物细胞(含有大的液泡)。鉴定类实验：鉴定类实验：1.1.检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质(1-p18)(1-p18)2.2.叶绿体色素的提取和分离叶绿体色素的提取和分离(1-p97)(1

16、-p97)3.DNA3.DNA的粗提取与鉴定（选的粗提取与鉴定（选1-p54)1-p54)实验原理某些化学试剂能使生物组织中的有机物产生特定的颜色反应鉴定成分还原糖脂肪蛋白质实验材料苹果、梨（不用甘蔗，甜菜）花生种子豆浆或蛋清实验药品斐林试剂苏丹染液双缩脲试剂0.1g/mLNaOH,0.05g/mLCuSO4苏丹染液0.1g/mLNaOH,0.01g/mLCuSO4实验现象砖红色（Cu2O）橘黄色（红色）紫色实验步骤制备样液斐林试剂（现用先配）水浴加热观察（淡蓝色 棕色砖红色）徒手切片苏丹染色50%酒精去浮色制作装片显微镜观察花生匀浆制备样液双缩脲A试剂 双缩脲B试剂 振荡观察(八)检测生物组

17、织中的糖类、脂肪和蛋白质（1-p18)实验名称鉴定对象试剂颜色生物材料备注淀粉的鉴定淀粉碘液蓝色脱色的叶片无可以设置对照试验可以设置对照试验一般含量越多，颜色越深（淀粉酶活性实验特殊）一般含量越多，颜色越深（淀粉酶活性实验特殊）三、蛋白质的检测三、蛋白质的检测1.原理：蛋白质与原理：蛋白质与双缩脲双缩脲试剂试剂常温常温下发生下发生紫色紫色反应。反应。2.过程：加样液过程：加样液加双缩脲试剂加双缩脲试剂 A 液液 1 ml（制造碱性制造碱性环境环境），摇匀），摇匀加双缩脲试剂加双缩脲试剂 B 液液 4 滴（滴（Cu2+与肽键与肽键发生反应），摇匀发生反应），摇匀观察颜色变化观察颜色变化(紫色紫色

18、)。例：生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质例：生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质 3 种有机物的检种有机物的检测中，不测中，不正确的是（正确的是（ ）A.可溶性还原糖的鉴定，可用酒精灯直接加热产生砖红色沉淀可溶性还原糖的鉴定，可用酒精灯直接加热产生砖红色沉淀B.只有脂肪的鉴定需要使用显微镜只有脂肪的鉴定需要使用显微镜C.用双缩脲试剂检测蛋白质不需要加热用双缩脲试剂检测蛋白质不需要加热D.使用斐林试剂和双缩脲试剂最好是现配现用使用斐林试剂和双缩脲试剂最好是现配现用实验原理1.提取：叶绿体中色素溶解于无水乙醇中2.分离：色素在层析液中的溶解度不同-纸层析法实验材料新鲜的绿色叶片实验药品无水乙醇：溶解色素二

19、氧化硅：研磨充分碳酸钙：防止叶绿素被破坏层析液：分离色素实验步骤1.取材 2.研磨3.制备滤液 4.准备滤纸5.画滤液细线 6.层析色素观察7.分离的色素 实验结果滤纸条从上到下：橙黄色黄色蓝绿色黄绿色(九)叶绿体色素的提取和分离(1-p97)捕捕获获光光能能的的色色素素类胡萝类胡萝卜素卜素叶绿素叶绿素胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素a叶绿素叶绿素b(占占1/4)(占占3/4)叶绿素叶绿素 a胡萝卜素胡萝卜素三、结果分析三、结果分析1.根据色素带的宽度判断色素含量：根据色素带的宽度判断色素含量：_叶绿素叶绿素 b叶黄素叶黄素_。2.根据色素带的位置判断色素在层析液中的溶解度：根据色素带

20、的位置判断色素在层析液中的溶解度：_ _ _ _。胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素 a叶绿素叶绿素 b思考：收集到的滤液绿色过浅的原因有可能是？思考：收集到的滤液绿色过浅的原因有可能是？滤纸条上滤纸条上色素带重叠色素带重叠的可能原因？的可能原因？滤纸条上滤纸条上无色素带无色素带的可能原因？的可能原因？考点2验证（鉴定）类实验1实验归类实验名称鉴定对象试剂颜色生物材料备注淀粉的鉴定淀粉碘液蓝色脱色的叶片无还原糖的鉴定还原糖斐林试剂砖红色沉淀苹果或梨的匀浆等甲乙液现混现用、水浴加热脂肪的鉴定脂肪苏丹(或)染色橘黄(或红)色花生种子切片需用高倍镜观察实验名称鉴定对象试剂颜色生物材料备注蛋白质

21、的鉴定蛋白质双缩脲试剂紫色豆浆、稀蛋清等先加A液，后加B液，摇匀尿糖的检测葡萄糖葡萄糖试纸有色水、葡萄糖溶液、三份模拟“尿样”无叶绿体中色素的提取和分离四种色素提取液：无水乙醇；分离液：层析液胡萝卜素：橙黄色；叶黄素：黄色；叶绿素a：蓝绿色；叶绿素b：黄绿色新鲜的绿叶(如菠菜叶)加入二氧化硅是为了研磨得更充分；碳酸钙可防止研磨中色素被破坏2.生物学中常用的试剂和药品试剂鉴定(染色)的物质(结构)是否加热颜色注意事项斐林试剂还原糖是砖红色现用现配双缩脲试剂蛋白质否紫色A液与B液不能混合，需先滴加A液，再滴加B液苏丹染液脂肪否橘黄色苏丹染液脂肪否红色甲基绿DNA否绿色DNA、RNA同时存在时要混合

22、使用且现用现配吡罗红RNA否红色健那绿线粒体否蓝绿色龙胆紫溶液(醋酸洋红)染色质(体)否深紫色(红色)染色前必须漂洗彻底注意问题(1)有关蛋白质的鉴定若用蛋清进行蛋白质鉴定时，需将鸡蛋清用水稀释，通常是0.5 mL蛋白液加入5 mL水，搅拌均匀。如果蛋白液稀释程度不够，与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管的内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不容易刷洗干净。鉴定蛋白质时，向样液中加入2 mL双缩脲试剂A摇匀，再向样液中加入34滴双缩脲试剂B摇匀。其中双缩脲试剂B不能过量，因为过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，从而掩盖生成的紫色。(2)叶绿体中色素的提取和分离区分色素提取和分离的原理：色素提取的原理无水乙醇提取法；色素分离的原理纸层析法。注意事项：a.滤液细线要画得细且直，以防止色素带重叠而影响分离效果；待滤液干燥后要再画一两次，目的是积累更多的色素，使分离后的色素带明显。b.分离色素时，层析液不能没及滤液细线，以防止色素溶解于层析液中而无法分离。