性传播疾病的实验诊断课件.ppt

1、性传播疾病的实验诊断第一节 概述一、概述二、重点介绍艾滋病、梅毒、淋病、非淋菌性尿道炎、生殖器疱疹、尖锐湿疣、软下疳、性病性淋巴肉芽肿的临床检测方法及临床意义；2个概念性病（性病（VD）：）： 是指通过性交传染的、具有明显生殖器损 害症状的全身性疾病。4种性传播疾病（性传播疾病（STD）：）： 是指通过性接触可以传染的一组传染病,在 我国,人们简称为性病 。包容20余种概述历史上：（传统） 把通过性活动传染的疾病称为性病性病 （Venereal diseases, VD） 主要指主要指: : 梅毒梅毒(syphilis)(syphilis) 淋病淋病(gonorrhea)(gonorrhea)

2、 性病肉芽肿性病肉芽肿 软性下疳四种软性下疳四种又称经典性病概念更新上世纪年代以来发现：许多病原体也可以通过性生活传播迄今为止大约已发现余种性病同时：四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法，明显地得到了抑制1970年，世界卫生组织把旧名称“性病”改为“性传播疾病”。 （Sexually transmitted diseases, STD）我国重点防治的性病v艾滋病(AIDS):(AIDS):获得性免疫缺陷综合症，获得性免疫缺陷综合症，HIVHIVv梅毒(syphilis)(syphilis)：由梅毒螺旋体梅毒亚种所致慢性性：由梅毒螺旋体梅毒亚种所致慢性性传播疾病传播疾病v尖锐湿疣(condyl

3、oma acuminatum)：由人乳头瘤状病由人乳头瘤状病毒（毒（hpvhpv）引起）引起v淋病(Gonorrhea)Gonorrhea)：淋病奈瑟菌：淋病奈瑟菌v生殖器疱疹(genital herpes)genital herpes)：由单纯疱疹病毒感染：由单纯疱疹病毒感染v非淋菌性尿道炎(NGUNGU)：沙眼衣原体和解脲脲原体沙眼衣原体和解脲脲原体v软下疳(chancroid)chancroid)：杜克嗜血杆菌所致生殖器部位：杜克嗜血杆菌所致生殖器部位v性病性淋巴肉芽肿(lymphogranulomalymphogranuloma Venereum) Venereum)：由：由沙眼衣原体

4、引起，第四性病沙眼衣原体引起，第四性病STD的诊断： 病史接触史 临床表现 实验室检查STD监测和疗效判断的重要依据 实验室检查一、艾滋病的实验室诊断理论依据大量血清学流行病学资料: V几周IgM抗体出现很快IgG抗体出现并一直存在（无免疫源性）实验目的：检测抗HIV抗体（ IgG 主）用于诊断实验： HIV血清学初筛试验 HIV血清学确证试验HIV血清学初筛试验v一、酶联免疫吸附试验一、酶联免疫吸附试验 vELISA法的基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物，酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后加入酶底物,经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色,用肉

5、眼、分光光度计观察结果初筛实验方法明胶颗粒凝集试验（PA）双抗原夹心法：p24抗原免疫荧光试验(IFA) 标本要求：新鲜全血2 ml ，无抗凝确证实验方法v二、免疫印迹试验二、免疫印迹试验 v基本原理：HIV全病毒抗原经过PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应,血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合物和底物后, 抗体结合带呈现

6、紫褐色。临床意义初筛试验： 阴性结果阴性结果: 基本可排除HIV感染，必要 时2-3月复查 阳性结果阳性结果: 其它初筛方法重复试验， 阳性报告HIV抗体待查， 进一步做确证试验确诊试验： 结果阳性的标本可报告HIV抗体阳性其它相关试验用于预后及抗病毒治疗疗效观察实验室指标的检测 ：1CD4+细胞和CD8+细胞计数 CD4+淋巴细胞正常值为500-1600个/ul,CD4+/CD8+的正常比值为（1.5-1.7）：1 2病毒载量测定(viral load, VL) 实际上，体内复制的病毒的数量是不能直接测量的，一般用血浆中HIV RNA的拷贝数代表HIV的病毒载量。HIV病毒载量与疾病进展速率

7、和预后有强相关关系，其它相关试验P3实验室： 病毒分离培养 相关抗原检测二、梅毒的临床分期后天梅毒 ：一期梅毒 二期梅毒 三期梅毒(晚期梅毒) 先天梅毒梅毒一期皮损梅毒一期皮损-硬下疳硬下疳梅毒二期皮损梅毒二期皮损梅毒晚期损害梅毒晚期损害二、梅毒的实验室诊断梅毒：由梅毒螺旋体梅毒亚种所致慢性性传播 疾病。检查病原体的试验 测抗体血清学检查 检查病原体的试验暗视野显微镜检查法（WHO推荐）v临床意义：直接检查到 梅毒螺旋体，可确证梅毒；v是早期梅毒检测最好的方法。梅毒螺旋体抗体检测两组试验：1.非密螺旋体抗原试验（初筛）2.密螺旋体抗原试验 （确证）两组试验的目的都是检测抗体非密螺旋体抗原试验（

8、抗-脂质抗体-非特异性）密螺旋体抗原试验（抗-梅毒螺旋体抗体-特异性）非密螺旋体抗原血清学试验方法：1.性病研究实验室试验VDRL2.不加热血清反应素试验USR3.快速血浆反应素环状卡片试验RPR4.甲苯胺红试验TRUST 四种初筛方法原理： 当人体感染梅毒螺旋体4周10周左右后，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是IgM和IgG) 目的： 抗-脂质抗体四种初试验筛方法的比较四种初试验筛方法的比较VDRLVDRLUSRUSRRPRRPRTRUSTTRUST抗原成分抗原成分心磷脂、卵磷心磷脂、卵磷脂、脂、 胆固醇胆固醇同前同前+EDTA+EDTA+氯氯化胆碱化胆碱同前同

9、前+EDTA+EDTA+氯氯化胆碱化胆碱+ +活性炭活性炭同前同前+EDTA+EDTA+氯化氯化胆碱胆碱+ +甲苯胺红甲苯胺红抗原稳定性抗原稳定性不稳定不稳定,1,1天天稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月血清试验前处理血清试验前处理需灭活需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活反应板及结果反应板及结果判断判断玻片，肉眼或玻片，肉眼或显微镜显微镜玻片，肉眼或玻片，肉眼或显微镜显微镜纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼注释注释唯一用于检查脑唯一用于检查脑脊液的试验

10、，诊脊液的试验，诊断神经梅毒断神经梅毒结果容易判断结果容易判断结果容易判断结果容易判断一期敏感性一期敏感性（未经治疗）（未经治疗）74%-87%74%-87%77%-88%77%-88%77%-99%77%-99%77%-99%77%-99%二期敏感性二期敏感性（未经治疗）（未经治疗）100%100%100%100%100%100%100%100%晚期敏感性敏感性（未经治疗）（未经治疗）98%99%98%99%密螺旋体抗原血清学试验原理：人体感染梅毒螺旋体后会产生特异性梅毒螺旋体抗体，可通过检测该抗体对梅毒进行诊断。密螺旋体抗原血清学试验1.梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）2.梅毒螺旋体明胶

11、凝集试验（TPPA） 快速、简便、准确而青睐3.荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)4.梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（ TP-Ab ） 它用双抗原夹心法，同时检测IgM/IgG抗体，故可用 于早期诊断，并避免了单片段抗原混合干扰 其他实验免疫印迹法： 是一种诊断梅毒感染的特异性实验，PCR试验： 多聚酶链反应检测梅毒螺旋体DNA 三、淋病(gonorrhea)淋病：由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖系统化脓性炎症。是八种性病中发病人数最多的一种。可入侵泌尿生殖道其他部位附睾、前列腺炎、输卵管炎及盆腔炎甚至经血液传播全身其他部位淋菌性关节炎、心内膜炎及脑膜炎等。淋菌性尿道炎淋病的实验室检查1、

12、涂片染色革兰阴性卵圆形或肾形，成双排列。有些脓细胞内可有许多淋球菌2、分离培养及鉴定实验室诊断步骤淋菌感染淋菌感染 男性患者男性患者 女性患者女性患者尿频、尿急、尿道分泌物尿频、尿急、尿道分泌物 脓性宫颈分泌物脓性宫颈分泌物/ /无症状无症状 脓性分泌物涂片脓性分泌物涂片G G- -染色染色 拒绝做拒绝做 G G- -双球菌细胞内双球菌细胞内 取宫颈分泌物取宫颈分泌物 初步诊断初步诊断 MTM MTM培养基培养培养基培养 治疗治疗 典型菌落形态典型菌落形态 G G- -双球菌、双球菌、OX(+)OX(+)、糖发酵试验、糖发酵试验 确诊确诊培养标本采集关键是深度一定要够男性取材：拭子深入尿道2c

13、m-4cm处并转动 蘸取少量粘膜女性取材：子插入宫颈12厘米处稍转动并停留10秒30秒，以获得上皮细胞，取出棉拭子时不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染其他相关试验1.直接免疫银光染色2.SPA协同实验3.酶反应4.固相酶免疫试验四、非淋菌性尿道炎-NGU病因： 沙眼衣原体CT（DK）40%50% 支原体（UU、MH）20%30% 阴道滴虫、白念和10%20%NGU-CT检测血清学试验对诊断衣原体感染价值有限1.迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的CT的检测2.CT感染轻微，潜伏期长，影响急性期采血时间配对血清难 以得到3.血清抗体持续时间长，单一血清标本只能显示曾经感以前染过CT4.双份血清

14、效价比有4被增高才有临床意义 NGU-CT检测方法1.细胞涂片的吉姆萨染色-发现一定数量的包涵体（原体呈紫色，包涵体呈金黄色）NGU-CT检测方法2.涂片碘染色法：包涵体中有糖原遇碘呈棕色，敏感性 差，不适用于NGU3.直接免疫荧光法染色：敏感性93%，特异性96与 培养并列为金标准对试剂，显微镜质量要求很高， 操作人员技术要求高，价格昂贵4.衣原体酶免疫测定EIA：抗CT单抗包被固相载体+ 标本再+多克隆抗体+IgG酶标抗体酶标仪检测 适用于批量筛查NGU衣原体感染5.衣原体分离培养：McCoy、Hela、 BHK-21细胞培养NGU-CT检测方法6.PCR7.“立明“（Clearview)

15、衣原体快速免疫测定法：原理：沙眼衣原体检测试剂盒采用高特异性的抗体 抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测临 床标本中是否含有沙眼衣原体抗原。该试验是目前诊断NGU衣原体感染普遍采用的方法沙眼衣原体沙眼衣原体胶体金法胶体金法 v检验原理：检验原理： 用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂，应用胶体金免疫层析技克隆抗体及其他试剂，应用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测术，采用双

16、抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法。方法。Colloidal gold immunochromatography strip0755-83376489检验结果的解释v阴性结果：仅质控线（C）有一条红线。v阳性结果： C 和T 都有一条红线。v无效结果：质控线不出现红线。v注意：检测线很强时，质控线可能相对减弱，属正常现象。 注意事项1试验敏感性87%,特异性98.8%，但标本中需要有 一定的抗原量，量低于敏感性可出现假阴性；2.检测试剂盒仅证明标本中存在沙眼衣原体抗原， 不能区别是衣原体感染还是携带者，也不能区别 衣原体死活，不能作为判愈试验；3.标本采集是关键NGU-支原体感染非淋支原体感染

17、：UU为主，MH次之我国报道7个地区健康人携带率解脲支原体（UU）占10.59%人型支原体（MH）占5.34%正常菌群的组成部分支原体检测方法1.分离培养2.聚合酶链反应-PCR/DNA探针技术诊断3.血清学检测：代谢抑制试验、ELISA、间接免疫荧光 都仅用于科研和流行病学调查上，不适于诊断用支原体培养固体培养基：生长耗时5天左右液体培养基-原理：UU尿素氨 PH 含酚红培养基由黄红MH精氨酸氨 PH 含酚红培养基由黄红生殖道支原体生殖道支原体v方法方法R1R2运送运送溶解溶解R1+R2接种试剂条接种试剂条(55 l)+ 2滴矿物油滴矿物油OUuMhUuMh 104 1044211410.1

18、212Mycoplasma IST237C培养培养2448 h 五、生殖器疱疹实验室检查病因：单纯疱疹病毒HSV SHV-1主要感染上半身部位（15岁以下多） SHV-2主要感染腰以下部位（多见于青春期后）生殖器疱疹检查方法病原体检查：1.病毒体外细胞培养和鉴定： 技术条件要求较高，不宜用于临床2.单纯疱疹病毒抗原检查(1）ELISA (3）DNA杂交(2)IFA (4）PCR PCR和DNA不能单独作为确诊指标 病原学检查ELISA有敏感性高，特异性强，准确率高应用面广，操作简便等优点生殖器疱疹检查方法血清学检查-抗体检测：1.所有用于检测抗原的方法经适当改良后，均可用于抗体检查2.SHV感

19、染个体中的不均一性和不稳定性成年人群中有很高的HSV 抗体检出率，大多获自隐性感染，且抗体的存在尚不能完全保护机体免受疱疹病毒的重复感染; HSV 抗体检测阳性对临床诊断帮助不大;3.对新生儿、婴幼儿感染诊断有一定意义六、尖锐湿疣实验室检查病因：人类乳头瘤病毒-HPV发病率：持续增长，我国急剧上升，已占 各种性病第二位六、尖锐湿疣实验室检查 尖锐湿疣检测：典型的尖锐湿疣通常不需作实验室检测便可作出诊断临床医生观察为主醋酸白试验有助于检查不明显的疣尖锐湿疣检查方法1.细胞学检查 ： 病理皮损活检:发现有HPV感染的特征性凹空细胞的组织病理变化特点.(较可靠的办法)2. 组织病理：基本上为角化不完

20、整，棘层深层肥厚，奶头瘤样增生。粒层和棘层上部细胞有显著的空泡形成。棘细胞基底细胞有特别数量之核皴裂，很像癌变，但细胞排裂规则，且增生上皮和真皮之间规模清楚。尖锐湿疣检查方法3.核酸杂交试验-PCR 皮损活检中用抗原或核酸检测显示有HPV感染.常见的是HPPV6.11型. 阳性率可达80%左右.当真性和假性尖锐湿疣鉴别困难时.可用HPV-DNA原位分子杂交进行鉴别.此法是目前一种敏感性和特异性很高的鉴别手段.阳性率可高达90%以上.七、软下疳实验室检查病因：杜克雷嗜血杆菌诊断标准1.有不洁性交史2.会阴部发生于1-2个溃疡,周围可发生多个卫星状小溃疡,疼痛明显,基底软,上有脓性分泌物,腹股沟淋

21、巴肿大、触痛、化脓软下疳实验室检查疾病特征：1.潜伏期1-30天，发病快进展快感染道溃疡46天2. 初起一个或数个言行丘疹或结节周围红斑24H糜烂或溃疡圆形或椭圆形，相邻的可融合成大溃疡边缘不整齐，病 变周围可发生卫星状病变，3.溃疡有脓性分泌物或蜡样脓苔，常有潜蚀性坏死和穿凿性 窦道，晚期基地肉芽增生，形成不规则瘢痕可自愈可再发4.溃疡不形成硬韧基底，并变软，明显区别于硬下疳疾病初起都在生殖器也可见肛门、大腿上部、口腔和手软下疳软下疳实验室检查方法1.涂片检查:取软下疳溃疡边缘下贮留脓汁或穿刺横痃抽吸的脓汁涂片行革兰染色, 镜下可见革兰阴性短小杆菌，两端钝圆，有两极浓染现象单个、 成堆或链状

22、排列 易产生假阳性假阴性不推荐用软下疳检查方法2.培养检查: 采用GCHGS或MHHb培养基培养.菌落常于接种后48小时形成,色灰黄而透明,直径约1-2mm, 菌落涂片革兰染色呈阴性球杆菌,呈短链、团块或指纹状排列 过氧化酶试验阴性,非卟嘛试验阴性,硝酸盐还原试验阳性.碱性磷酸酶试验阳性.典型的菌落和镜检典型的菌体形态鉴定结果符合标准结合临床可作出确定诊断报告 软下疳检查方法3.组织病理 中央为溃疡,溃疡边缘表皮增生,溃疡下方可见三个炎症带,垂直排列,分别为:溃疡基底层:多形核白细胞为主、混有红细胞,有嗜中性白细胞、淋巴祖细胞及组织细胞浸泡,可见较多的纤维母细胞.深层:淋巴细胞、浆细胞弥漫性浸

23、润,血管周围明显.用Giemas及-Gram染色,有时可在浅表层或深层查见杜克雷嗜血杆菌组织病理对软下疳有一定的意义，但也要结合临床表现八、性病淋巴肉芽肿LGV病因：沙眼衣原体的L1、L2和L3主要侵犯淋巴组织流行病学：散发北美、欧洲、澳洲及南美、亚洲 部分地区印度及部分东南亚国家； 我国80年代以来偶有报道，真实性有待考证病理：无症状溃疡或尿道宫颈炎二期发热、急性淋巴结 炎横痃形成，可伴急性出血性肠炎，部分病人慢性 炎症、瘘管、职场狭窄或生殖器象皮肿性病淋巴肉芽肿LGV检查方法1.衣原体培养：抽取有波动的淋巴结内的脓液接种于小鼠的脑组织或鸡胚卵黄囊或McCoy细胞（细胞已取代前二者）可分离出

24、病原，但敏感性不高；2.血清学试验 ：(1)对流免疫电泳试验：简便、快速、特异性强，但所需抗原要求高； (2)补体结合试验(CF)检测到抗沙眼衣原体抗体，抗体血清滴度在1：64以上有诊断价值但本试验对性病性淋巴肉芽肿并无特异性，仍要结合临床进行分析。 ；小结1尖锐湿疣的诊断主要依据临床体征和病史， 现有的试验方法无论哪种都只能是辅助参 考2软下疳首选分离培养法3性病淋巴肉芽肿主要根据接触史（有不洁性交史）、临床表现和实验室检查 每一种性病都有适合其特有的检测，此外还有些辅助检查是可选择的1血沉加快、CRP2血象炎性反应或轻度贫血、白细胞增高3高丙球蛋白血症、白球蛋白倒置、IgA、IgG增高等总结1性病的概念2我国重点防治的八种性病 ？3艾滋病(AIDS)(AIDS)的初筛实验和确证实验？的初筛实验和确证实验？4梅毒螺旋体抗体检测检测方法有哪些？除HIV外，每一种性病的初起都是从泌尿生殖器损害开始，部分病人也可无症状不及时治疗都可能会向机体播散，各自都有适合于自己的特殊检查方法