梅毒检测ppt课件.ppt

1、n梅毒实验室检测技术梅毒实验室检测技术n梅毒血清学试验检测技术进展梅毒血清学试验检测技术进展n梅毒实验室检测策略探讨梅毒实验室检测策略探讨主要内容主要内容梅毒实验室检测技术梅毒实验室检测技术梅毒实验室检测的意义梅毒实验室检测的意义n临床服务临床服务 筛查、确定现症梅毒患者；判断疗效。筛查、确定现症梅毒患者；判断疗效。n梅毒筛查梅毒筛查筛查梅毒感染者，尽早发现梅毒患者（筛查梅毒感染者，尽早发现梅毒患者（保证安全用血保证安全用血 预防经血传播病原体和抗体）预防经血传播病原体和抗体）n流行病学监测流行病学监测掌握梅毒流行趋势；了解不同高危人群的梅毒感染率掌握梅毒流行趋势；了解不同高危人群的梅毒感染率

2、、发病率。、发病率。概述概述- -梅毒病原体梅毒病原体小而纤细的螺旋状微生物小而纤细的螺旋状微生物长长5 520m20m，粗细，粗细0.2m22年），年），但妊娠时仍可传染给胎儿但妊娠时仍可传染给胎儿, ,病期越长，传染性病期越长，传染性越小越小; ; 发病机理n入侵途径入侵途径 n在性行为过程中，苍白螺旋体通过皮肤或黏膜在性行为过程中，苍白螺旋体通过皮肤或黏膜微小损伤入侵机体，也能在妊娠过程中经胎盘微小损伤入侵机体，也能在妊娠过程中经胎盘传给胎儿。传给胎儿。n感染的播散感染的播散n感染后数小时，在临床症状出现之前，梅毒螺感染后数小时，在临床症状出现之前，梅毒螺旋体经淋巴系统到达局部淋巴结，再

3、经血流扩旋体经淋巴系统到达局部淋巴结，再经血流扩散至全身散至全身 n梅毒螺旋体在梅毒的任何时期均有可能侵犯中枢梅毒螺旋体在梅毒的任何时期均有可能侵犯中枢神经系统神经系统梅毒体液免疫nIgMIgM抗体抗体n感染梅毒后，首先产生感染梅毒后，首先产生IgMIgM型抗梅毒螺旋体抗体型抗梅毒螺旋体抗体，感染，感染2 2周后即可测出周后即可测出n早期梅毒治疗早期梅毒治疗3-93-9个月后，或晚期梅毒治疗个月后，或晚期梅毒治疗2 2年年后，大部分病人后，大部分病人IgMIgM抗体转阴抗体转阴n再感染梅毒时，再感染梅毒时， IgMIgM抗体又重新出现抗体又重新出现nIgMIgM抗体出现是活动性梅毒表现抗体出现

4、是活动性梅毒表现nIgMIgM抗体不能通过胎盘抗体不能通过胎盘n胎儿在宫内感染梅毒螺旋体抗体后，在胚胎晚期胎儿在宫内感染梅毒螺旋体抗体后，在胚胎晚期(6-9(6-9个月个月) )能合成能合成IgMIgM抗体抗体n新生儿或婴儿检出新生儿或婴儿检出 IgMIgM抗体是诊断先天梅毒证抗体是诊断先天梅毒证据据梅毒体液免疫nIgGIgG抗体抗体n感染梅毒第感染梅毒第4 4周后产生周后产生IgGIgG型抗梅毒螺旋体抗体型抗梅毒螺旋体抗体nIgGIgG抗体可以持续存在：梅毒治疗后，梅毒螺抗体可以持续存在：梅毒治疗后，梅毒螺旋体抗原消失很长时间，旋体抗原消失很长时间， IgGIgG抗体仍可继续产抗体仍可继续产

5、生，甚至终生可以检出生，甚至终生可以检出nIgGIgG抗体能通过胎盘抗体能通过胎盘n新生儿出生后第新生儿出生后第3 3个月开始形成个月开始形成IgGIgG抗体抗体梅毒体液免疫n反应素反应素( (reaginreagin) )n梅毒螺旋体破坏人体组织，在体内释放一种梅毒螺旋体破坏人体组织，在体内释放一种抗原性心磷脂，能刺激机体产生反应素抗原性心磷脂，能刺激机体产生反应素n反应素是具有抗体性质的物质，能与从牛心反应素是具有抗体性质的物质，能与从牛心中提取的心磷脂发生抗原中提取的心磷脂发生抗原- -抗体反应抗体反应n反应素一般在感染后反应素一般在感染后5-75-7周产生周产生( (或硬下疳出或硬下疳

6、出现后现后2-32-3周产生周产生) )n反应素在治疗后可以逐步消失反应素在治疗后可以逐步消失n检测反应素可以评价治疗效果检测反应素可以评价治疗效果概述概述- -梅毒的诊断梅毒的诊断梅毒的诊断必须依靠病史、症状及实验检查进行综梅毒的诊断必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析。合分析。梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义。梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义。常用梅毒实验室检测方法常用梅毒实验室检测方法n病原学检测病原学检测n血清学检测血清学检测病原学检查病原学检查n原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器

7、的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。n方法：病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法病原学检查的临床意义病原学检查的临床意义n病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。n螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。n如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，14梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测方法梅毒实验室检查分类梅毒实验室检查分类n暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查n梅毒血清学试验梅毒血清学试验n非梅毒螺旋体抗原血清试验

8、非梅毒螺旋体抗原血清试验n梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验n脑脊液检查脑脊液检查n其它检查其它检查n直接荧光抗体检查：免疫荧光染色检查直接荧光抗体检查：免疫荧光染色检查n病理检查病理检查n聚合酶链式反应（聚合酶链式反应（PCRPCR）n蛋白质印迹（蛋白质印迹（Western blotWestern blot）暗视野显微镜检查n苍白螺旋体可以通过普通光学显微镜观察到，苍白螺旋体可以通过普通光学显微镜观察到，暗视野中可以通过典型特点确定，包括螺旋外暗视野中可以通过典型特点确定，包括螺旋外形，形，10101414个螺旋，螺旋状运动方式，个螺旋，螺旋状运动方式，6 62020微米长度。微米

9、长度。n一期梅毒硬下疳的溃疡渗出物有大量的梅毒螺一期梅毒硬下疳的溃疡渗出物有大量的梅毒螺旋体旋体n二期梅毒肛周及外阴部的扁平湿疣表面分泌物二期梅毒肛周及外阴部的扁平湿疣表面分泌物中都有大量的梅毒螺旋体中都有大量的梅毒螺旋体n以玻片压片后，滴加生理盐水，在暗视野显微以玻片压片后，滴加生理盐水，在暗视野显微镜下可看到呈螺旋状、活动的螺旋体镜下可看到呈螺旋状、活动的螺旋体暗视野显微镜检查n 暗视野检测的优点暗视野检测的优点n可立即确诊（在一期和二期梅毒）可立即确诊（在一期和二期梅毒）n快速检测快速检测n暗视野检测的缺点暗视野检测的缺点n需要有经验的专业镜检人员和专业设备（除特殊实验需要有经验的专业镜

10、检人员和专业设备（除特殊实验室外一般不具备）室外一般不具备）n易与其他致病性和非致病性的螺旋菌混淆，一般不推易与其他致病性和非致病性的螺旋菌混淆，一般不推荐用来检测口腔皮损，因为口腔中存在非致病性的螺荐用来检测口腔皮损，因为口腔中存在非致病性的螺旋菌旋菌n必须立即镜检，因为螺旋体的运动性对确诊有重要价必须立即镜检，因为螺旋体的运动性对确诊有重要价值，随着皮损愈合，暗视野检测的敏感性降低值，随着皮损愈合，暗视野检测的敏感性降低n局部使用香皂，水以及抗生素软膏等会增加假阴性的局部使用香皂，水以及抗生素软膏等会增加假阴性的可能性可能性 梅毒血清学试验n一般硬下疳出现2-3周才开始出现，7-8周后全部

11、阳性，故早期血清反应常是阴性非梅毒螺旋体抗原血清试验n性病研究实验室试验(VDRL)n不加热血清反应素玻片试验(USR)n快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)n甲苯胺红试验(TRUST)n这些实验检测非梅毒螺旋体抗体(反应素)：IgM和IgG抗体非梅毒螺旋体抗原血清试验n非梅毒螺旋体抗原血清实验的滴度通常与病情活动相关，非梅毒螺旋体抗原血清实验的滴度通常与病情活动相关，滴度改变四倍或者稀释度改变两倍（例如，从滴度改变四倍或者稀释度改变两倍（例如，从1 1：1616到到1 1：4 4或者或者1 1：8 8到到1 1：3232）具有临床意义。）具有临床意义。n在同一患者进行连续的血清学检测需采用同

12、一种方法（例在同一患者进行连续的血清学检测需采用同一种方法（例如，如，VDRLVDRL或或RPRRPR），并在同一实验室进行。），并在同一实验室进行。nVDRLVDRL与与RPRRPR的结果均有效，但两者结果不能直接比较，因的结果均有效，但两者结果不能直接比较，因为为RPRRPR的滴度一般比的滴度一般比VDRLVDRL的滴度稍高，的滴度稍高，TRUSTTRUST结果与结果与RPRRPR相相当，当，USRUSR与与VDRLVDRL相当。相当。n非梅毒螺旋体抗原检测通常在治疗后不阴转，很多病人在非梅毒螺旋体抗原检测通常在治疗后不阴转，很多病人在治疗后非梅毒螺旋体抗体在较长时间内保持低滴度，有时治疗

13、后非梅毒螺旋体抗体在较长时间内保持低滴度，有时会维持终身，称为会维持终身，称为“血清固定血清固定”。非梅毒螺旋体抗原血清试验n非梅毒螺旋体血清抗原实验的优点非梅毒螺旋体血清抗原实验的优点 n快速，费用低快速，费用低n可以用血浆不用血清（可以用血浆不用血清（RPR,TRUSTRPR,TRUST）n易于操作，可以在诊室或办公室进行易于操作，可以在诊室或办公室进行n结果定量结果定量n可以用来评估治疗效果与再感染可以用来评估治疗效果与再感染n非梅毒螺旋体抗原血清实验的缺点非梅毒螺旋体抗原血清实验的缺点 n对梅毒螺旋体无特异性，不能用于确证对梅毒螺旋体无特异性，不能用于确证n对某些梅毒不太敏感（早期梅毒

14、，晚期潜伏梅毒，晚期梅毒）对某些梅毒不太敏感（早期梅毒，晚期潜伏梅毒，晚期梅毒）n可发生假阳性反应可发生假阳性反应n前带现象，可造成假阴性结果。前带现象的发生是因为过多的前带现象，可造成假阴性结果。前带现象的发生是因为过多的抗体抑制了阳性反应，二期梅毒中发生较多。如果临床上高度抗体抑制了阳性反应，二期梅毒中发生较多。如果临床上高度疑似二期梅毒，实验室应疑似二期梅毒，实验室应1 1：1616稀释血清并重复实验以排除前稀释血清并重复实验以排除前带现象。带现象。 梅毒螺旋体抗原血清试验n梅毒螺旋体颗粒凝集实验：梅毒螺旋体颗粒凝集实验：TPPATPPAn梅毒螺旋体血凝试验：梅毒螺旋体血凝试验：TPHA

15、TPHAn酶联免疫吸附试验：酶联免疫吸附试验：ELISAELISAn酶联免疫实验：酶联免疫实验：EIAEIAn荧光螺旋体抗体吸收实验：荧光螺旋体抗体吸收实验：FTA-ABSFTA-ABSn直接检测梅毒螺旋体抗体直接检测梅毒螺旋体抗体n检测结果即使在足量治疗后通常终身不阴转，梅检测结果即使在足量治疗后通常终身不阴转，梅毒螺旋体抗体滴度与病情活动关系不大，不能用毒螺旋体抗体滴度与病情活动关系不大，不能用来评估治疗效果来评估治疗效果 梅毒螺旋体抗原血清试验n敏感性和特异性均高，用作证实试验敏感性和特异性均高，用作证实试验n一旦阳性，则不管治疗与否或疾病是否活动，一旦阳性，则不管治疗与否或疾病是否活动

16、，通常终身保持阳性通常终身保持阳性 n只有在治愈的一期梅毒患者中，约只有在治愈的一期梅毒患者中，约15%15%25%25%在在2 23 3年后螺旋体抗原血清试验可以转为阴性。年后螺旋体抗原血清试验可以转为阴性。n主要作为确诊试验，不能用于观察疗效、复发主要作为确诊试验，不能用于观察疗效、复发和再感染和再感染梅毒血清试验抗体产生的时间顺序梅毒血清试验抗体产生的时间顺序nIgMIgM- FTA-ABS- FTA-ABS：2 2周周nIgGIgG-TPHA/TPPA-TPHA/TPPA：4 4周周n反应素反应素-RPR/TRUST-RPR/TRUST：5-75-7周周梅毒血清试验抗体阴转时间nIgM

17、IgM- FTA-ABS- FTA-ABS阴转：最快阴转：最快n一期梅毒治疗后一期梅毒治疗后3 3个月：个月：100%100%阴转阴转n二期梅毒治疗后二期梅毒治疗后9 9个月：个月： 100%100%阴转阴转n早期潜伏梅毒治疗后早期潜伏梅毒治疗后2 2年：年： 100%100%阴转阴转n反应素反应素-RPR/TRUST-RPR/TRUST阴转：其次阴转：其次n二期梅毒治疗后二期梅毒治疗后9 9个月：个月： 27.3%27.3%阴转阴转n早期潜伏梅毒治疗后早期潜伏梅毒治疗后2 2年：年：38.4%38.4%nIgGIgG-TPHA/TPPA-TPHA/TPPA阴转：可终生阳性阴转：可终生阳性梅毒

18、血清试验反应的阳性曲线n一期低一期低n二期高二期高n三期降低三期降低梅毒血清学试验的假阳性反应 n非梅毒螺旋体抗原试验和梅毒螺旋体抗非梅毒螺旋体抗原试验和梅毒螺旋体抗原血清试验中均存在假阳性反应原血清试验中均存在假阳性反应引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素n技术性假阳性：由于标本的保存、转送或操作技术性假阳性：由于标本的保存、转送或操作技术不当引起。技术不当引起。n生物学假阳性：非梅毒螺旋体抗原血清试验所生物学假阳性：非梅毒螺旋体抗原血清试验所用抗原也存在其它组织中，检测的梅毒病人体用抗原也存在其它组织中，检测的梅毒病人体内的反应素，而其它疾病甚至极少数正常人也内的反应素，而其它

19、疾病甚至极少数正常人也出现反应素，故而阳性反应发生率高，而梅毒出现反应素，故而阳性反应发生率高，而梅毒螺旋体抗原血清试验检测的是梅毒螺旋体抗体螺旋体抗原血清试验检测的是梅毒螺旋体抗体，特异性高，发生假阳性率低。，特异性高，发生假阳性率低。 引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素 n急性生物学假阳性反应的疾病急性生物学假阳性反应的疾病 n麻疹麻疹n风疹风疹n水痘水痘n传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症n传染性肝炎传染性肝炎n上呼吸道感染上呼吸道感染n猩红热猩红热n肺炎球菌性肺炎肺炎球菌性肺炎n病毒性肺炎病毒性肺炎n牛痘疹牛痘疹n其它：如亚急性细菌性心内膜炎、活动性肺结核、斑疹伤寒

20、其它：如亚急性细菌性心内膜炎、活动性肺结核、斑疹伤寒、丝虫病、锥虫病、疟疾、鼠咬热、回归热、钩端螺旋体病、丝虫病、锥虫病、疟疾、鼠咬热、回归热、钩端螺旋体病等。等。引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素n急性生物学假阳性反应的特点急性生物学假阳性反应的特点n滴度低，一般低于滴度低，一般低于1:81:8n持续时间短，多在疾病消退后持续时间短，多在疾病消退后6 6日内转阴日内转阴n用梅毒螺旋体抗原血清试验检测呈阴性用梅毒螺旋体抗原血清试验检测呈阴性引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素n慢性生物学假阳性反应的疾病慢性生物学假阳性反应的疾病n系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮 盘状红斑

21、狼疮盘状红斑狼疮n干燥综合征干燥综合征 n类风湿性关节炎类风湿性关节炎n自家免疫性溶血性贫血自家免疫性溶血性贫血 n桥本氏甲状腺炎桥本氏甲状腺炎n风湿性心脏病风湿性心脏病 n慢性肾炎慢性肾炎 n肝硬化肝硬化 n系统性硬化症系统性硬化症 n毒品瘾者毒品瘾者 n孕妇孕妇n老年老年 n麻风病麻风病引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素n慢性生物学假阳性反应的特点慢性生物学假阳性反应的特点n可持续可持续6 6个月以上，甚至终身。个月以上，甚至终身。n滴度低，一般低于滴度低，一般低于1:81:8n用梅毒螺旋体抗原血清试验检测呈阴性用梅毒螺旋体抗原血清试验检测呈阴性n梅毒螺旋体抗原血清试验假阳性

22、：梅毒螺旋体抗原血清试验假阳性：n发生率比非螺旋体抗原血清试验少发生率比非螺旋体抗原血清试验少n假阳性发生的情况：如系统性红斑狼疮、盘假阳性发生的情况：如系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合结缔组状红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合结缔组织病、硬皮病、肝硬化、自身免疫性溶血性织病、硬皮病、肝硬化、自身免疫性溶血性贫血、麻风、结肠癌、生殖器疱疹、糖尿病贫血、麻风、结肠癌、生殖器疱疹、糖尿病、淋巴瘤、脑膜瘤、海洛因成瘾者、妊娠等、淋巴瘤、脑膜瘤、海洛因成瘾者、妊娠等n其它螺旋体感染：品它、雅司。其它螺旋体感染：品它、雅司。 引起梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素梅毒血清反应假阴性

23、 n一期梅毒硬下疳：一般硬下疳出现一期梅毒硬下疳：一般硬下疳出现2-32-3周周机体才开始出现抗梅毒螺旋体抗体及反机体才开始出现抗梅毒螺旋体抗体及反应素，应素，7-87-8周后全部阳性，故早期血清反周后全部阳性，故早期血清反应常是阴性。应常是阴性。n感染梅毒立即治疗或晚期梅毒：由于血感染梅毒立即治疗或晚期梅毒：由于血清反应素低，出现阴性。清反应素低，出现阴性。 n二期梅毒假阴性：不到二期梅毒假阴性：不到1%1%的二期梅毒患者，其的二期梅毒患者，其未稀释血清非梅毒螺旋体抗原血清试验呈阴性未稀释血清非梅毒螺旋体抗原血清试验呈阴性或弱阳性反应，而在高稀释度后反而为阳性，或弱阳性反应，而在高稀释度后反

24、而为阳性，即即前带现象前带现象，这是因为血清中反应素过多，造，这是因为血清中反应素过多，造成抗原抗体比例不适，抑制了阳性反应的结果成抗原抗体比例不适，抑制了阳性反应的结果。n合并合并HIVHIV感染的梅毒患者：其梅毒血清试验可感染的梅毒患者：其梅毒血清试验可呈阴性。呈阴性。n技术操作或抗原敏感性的出现血清试验阴性。技术操作或抗原敏感性的出现血清试验阴性。 梅毒血清反应假阴性 脑脊液(CSF)检查： 神经梅毒的实验诊断方法 nCSF检查对神经梅毒，尤其是无症状的神经梅毒的诊断、治疗及预后判断均有帮助。n脑脊液检查指征n对所有原因不明的神经系统异常的梅毒患者n病程超过一年n梅毒合并HIV感染n先天

25、梅毒患儿应检查脑脊液。脑脊液检查项目nVDRL试验n白细胞计数n总蛋白测定n胶体金试验等nCSF-VDRL试验：n是CSF的标准试验n对神经梅毒特异性较高，偶尔也出现假阴性反应，如脊髓痨病人。n试验阳性，对神经梅毒具有诊断意义n如果CSF-VDRL试验阴性，而临床考虑为神经梅毒，可使用CSF的梅毒螺旋体抗原试验(如FTA-ABS/ TPHA)，其敏感性高，但特异性不如CSF-VDRLn神经梅毒患者CSF-FTA-ABS均呈阳性，故CSF-FTA-ABS为阴性，可排除神经梅毒感染脑脊液检查项目n白细胞(淋巴细胞)计数：n正常人3106/L，n如10106/L提示中枢神经系统有炎症。n蛋白测定：n

26、正常人总蛋白0.1-0.4g/Ln神经梅毒可升高至1.0-2.0g/L，白蛋白和球蛋白比例改变，球蛋白升高。 脑脊液检查项目梅毒血清学检测分类梅毒血清学检测分类(1) (1) （非特异性梅（非特异性梅毒抗体）毒抗体）(2) (2) （特异性梅毒抗（特异性梅毒抗体）两类方法。体）两类方法。非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理n梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主迅速对螺旋体表面的脂质作出免应答，在3周-4周产生抗类脂抗原的抗体（反应素）。抗体主要是IgM和IgG混合抗体。n未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。问题问题2 2：临床

27、上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法定性和定量两种检测方法 非梅毒螺旋体抗原血清学原理非梅毒螺旋体抗原血清学原理n所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样n方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。n基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇n抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见n上述方法的敏感性和特异性都基本相似非梅毒螺旋体抗原血清学原理非梅毒螺旋体抗原血清学原理VDRLVDRL试验试验USRRPR/TRUSTV

28、DRL试验n抗原组成：0.03%心磷脂n 0.21%卵磷脂n 0.90%胆固醇n抗原需新鲜配制 不能保存n待检血清需灭活n目前主要用于脑脊液检查n显微镜观测结果USR试验n是VDRL试验的改良n抗原组成：同VDRL，另含 （1）乙二胺四醋酸(EDTA) 使抗原可长期保存，能维持一年； （2）含有氯化胆碱 对血清能起到化学灭活的作用 不必加热灭活 （3）制成试剂盒 使用方便RPRRPR试验试验n在USR试剂成分的基础上 加入黑色碳颗粒 作为沉淀的指示物 n用白色的硬纸片替代玻片n血清不需要灭活n不需要显微镜观测结果n可作定量试验n有现成的试剂盒 携带方便n操作简单n价格便宜 非梅毒螺旋体抗原血清

29、学原理非梅毒螺旋体抗原血清学原理TRUSTn其原理和成分与RPR试验相同n用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒 n其余的特点均与RPR相同非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1 1、仪器：水平旋转仪。仪器：水平旋转仪。2、定性试验n加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内n加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原n反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果3、定量试验n稀释夜准备：在圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。n加样：吸

30、取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。n 下同定性试验。RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断滴度：出现凝集反应的血清最高稀释倍数。非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义n早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。n 一期梅毒1年后转为阴性n 二期梅毒2年后转为阴性。n 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n非梅毒螺旋体抗原血

31、清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。n早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。n经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点n非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性，此现象称为梅毒血清反应假阳性。n 技术性假阳性反应 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。n 生物学假阳性反应 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点n梅毒假阳性反应的处理n技术性假阳性反

32、应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。n对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点n前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点耐血清性（血清固定） 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因

33、素有关。梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体抗原血清学试验原理n梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。n感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。问题问题3 3：的定量试验在的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？梅毒诊疗中有意义吗？梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体抗原血清学试验方法n梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)n 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)n 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）n 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT)n 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）n 化学发光免疫分析法（CLIA）n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验

34、（WB）TPPA/TPHATPPA/TPHA TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。+Sheep red cellT.pallidum+Sensitised cellSensitised cellSpecific AntibodyHemagglutinationTPPA(TPHA)TPPA(TPHA)试验原理示意图试验原理示意图TPPATPPA试验检测试验检测流程流程试验前期准备n微量振荡仪

35、n试剂检查n25l移液器、吸头n记号笔、废物缸n有盖湿盒n工作服n一次性手套、口罩、帽子n生物安全柜TPPATPPA试验检测流程试验检测流程n使用前将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟。n在96孔U型板上编上相应的待检样本的编号。n按标签标明量（0.6ml)向每瓶冻干致敏粒子（C液）和未致敏粒子（D液）各加入溶解用液（A液）复溶，置室温不得少于30分钟。TPPATPPA试验检测流程试验检测流程n每份标本做4孔，加标本稀释液（B液）至U型反应板，第1孔100l，第24孔各25 l。n用移液器取血清25 l至第1孔，反复混匀后取25 l至第2孔，连续倍比稀释至第4孔，最后1孔混匀后弃去25l。n

36、第3孔加未致敏粒子D液25 l，第4孔加致敏粒子C液25 l n将微量反应板置震荡器震荡30秒。n置微量反应板于有盖湿盒内，37孵箱或室温（15-30）静置2小时后，观察结果。TPPATPPA试验检测流程试验检测流程结果报告:n观察加D液的第3孔，不出现凝集为有效试验 。n阳性：第3孔不出现凝集，第4孔出现1+4+凝集反应。 n阴性：第3、4孔均不产生凝集反应。FTA-ABSFTA-ABS试验试验 FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。其原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标

37、记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 FTA-ABSFTA-ABS试验示意图及结果试验示意图及结果TPELISATPELISA试验原理试验原理 TPELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。本法可用于大规模血清检测。梅毒免疫层析快速检测方法梅毒免疫层析快速检测方法梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义n 梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验，它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性

38、反应是真阳性还是假阳性。n 一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义n试验特异性强，很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有1%的生物学假阳性发生。n如系统性红斑狼疮患者血清可使FTAABS试验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。n传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使TPHA呈假阳性。n 麻风患者也可使特异试验呈阳性。梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。n梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体抗体试验试验仍可阳性

39、，故TPPA等试验阳性不能作为疗效观察的指标。nTPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。非梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图非梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图早期晚期一期二期早期潜伏晚期潜伏三期 治疗前治疗前 治疗后治疗后 阳性阴性梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图早期一期二期早期潜伏晚期晚期潜伏三期 治疗前治疗前 治疗后治疗后阳性阴性梅毒血清学试验结果的临床意义总汇梅毒血清学试验结果的临床意义总汇 RPR TPPA TRUST TP-ELISA 临床意义 VDRL TP-RT _ _ _ _ 排除梅毒排

40、除梅毒 + + + + 现症梅毒现症梅毒 + + - - 生物学假阳性生物学假阳性 - +- + 早期梅毒经治疗后早期梅毒经治疗后 先天梅毒的实验室诊断方法先天梅毒的实验室诊断方法依据实验指标诊断n查到螺旋体n其抗心磷脂抗体滴度持续上升n其抗心磷脂抗体滴度高于其母亲四倍n检测抗梅毒的IgM特异性抗体阳性n随访18个月观察抗体的变化梅毒检测知识要点n1.梅毒诊断标准：WS273-2007n (代替GB15974-1995，梅毒诊断标准及 处理原则 )n2.梅毒血清学实验：非梅毒螺旋体抗原实验，梅毒螺旋体抗原实验。检测的是抗原还是抗体？n3.非梅毒螺旋体抗原实验阳性标示什么？nA.现症感染梅毒检测

41、知识要点nB.接受或未接受过治疗的近期感染。nC.生物学假阳性，一般人群假阳性率n1-3%，但滴度1:4。n4.梅毒螺旋体抗原实验阳性可表示：nA.现症感染。nB.接受或未接受过治疗的近期感染。nC.既往感染。梅毒检测知识要点n5.梅毒诊断原则：nA.必须根据病史；nB.临床症状；nC.体检；nD.实验室检测等nE.综合分析，慎重作出诊断。测试题 n关于梅毒螺旋体，下列哪种说法是正确的？n可以在体外培养 n增代时间：3033小时n直径0.3微米 n以上均正确 测试题 n关于梅毒螺旋体，下列哪种说法是正确的？n可以在体外培养 n增代时间：3033小时n直径0.3微米 n以上均正确 测试题n感染梅

42、毒螺旋体后机会产生抗体的时间的顺序依次是nIgG、反应素、IgMn反应素、IgG、IgMnIgM、IgG、反应素nIgM、反应素、IgG测试题n感染梅毒螺旋体后机会产生抗体的时间的顺序依次是nIgG、反应素、IgMn反应素、IgG、IgMnIgM、IgG、反应素nIgM、反应素、IgG测试题n关于RPR或TRUST试验，下面哪个不正确？n用于检测梅毒螺旋体特异性抗体n检测的是反应素n不是确诊试验n可用于评价梅毒治疗效果测试题n关于RPR或TRUST试验，下面哪个不正确？n用于检测梅毒螺旋体特异性抗体n检测的是反应素n不是确诊试验n通过测定滴度的变化来评价梅毒治疗效果测试题n关于TPPA或TPH

43、A试验，下面哪个不正确？n用于检测梅毒螺旋体特异性抗体n为确诊试验n感染梅毒后可以终生阳性n可用于评价梅毒治疗效果测试题n关于TPPA或TPHA试验，下面哪个不正确？n用于检测梅毒螺旋体特异性抗体n为确诊试验n感染梅毒后可以终生阳性n可用于评价梅毒治疗效果测试题n关于梅毒血清学试验，下面哪个不正确n对所有孕产妇均需做梅毒筛查n对所有献血员均需做梅毒筛查n对于性病就诊者开展梅毒检测时，一般先用RPR筛查，RPR阳性者再做TPPA确证n对性病就诊者直接使用TPPA检测，阳性者就可确诊为梅毒测试题n关于梅毒血清学试验，下面哪个不正确n对所有孕产妇均需做梅毒筛查n对所有献血员均需做梅毒筛查n对于性病就

44、诊者开展梅毒检测时，一般先用RPR筛查，RPR阳性者再做TPPA确证n对性病就诊者直接使用TPPA检测，阳性者就可确诊为梅毒测试题n血液中心转诊一位RPR阳性者，下一步应采取哪种合适步骤？ n开展血清RPR定量检测，并做确诊试验TPPAn了解详细病史，尤其是过去梅毒史 n进行全面体格检查 n以上均正确 测试题n血液中心转诊一位RPR阳性者，下一步应采取哪种合适步骤？ n开展血清RPR定量检测，并做确诊试验TPPAn了解详细病史，尤其是过去梅毒史 n进行全面体格检查 n以上均正确 测试题n下列哪种梅毒血清滴度改变应考虑治疗失败或再感染？ n治疗时 RPR 1:128， 6个月后随访 RPR 1:32 n治疗时TRUST1:128，6个月后随访TRUST1:16 n治疗时 RPR: 1:128，6个月后随访 RPR 1:64 n以上随访均反应治疗有效 测试题n下列哪种梅毒血清滴度改变应考虑治疗失败或再感染？ n治疗时 RPR 1:128， 6个月后随访 RPR 1:32 n治疗时TRUST1:128，6个月后随访TRUST1:16 n治疗时 RPR: 1:128，6个月后随访 RPR 1:64 n以上随访均反映治疗有效