耳聋基因诊断和咨询课件.ppt

1、聋病的临床基因诊断概 况 每1000个儿童里 1.3-2.3名儿童受耳聋困扰 50% 儿童感音神经性聋归结于遗传因素, 20-25% 归结为环境因素， 25-30% 为散发性病例 遗传性感音性耳聋的相对增加促动医生必须熟悉这一疾病 75-80% 遗传性耳聋为常染色体隐性遗传，18-20% 为常染色体显性遗传，其余为线粒体、 X-连锁 或染色体疾病在中国，每年有30000新生儿患重度或极重度耳聋。另有相当比例的婴幼儿患迟发性听力下降，每年新发耳聋患儿8万名。两千万人患各种听力疾病。第一步：耳聋的基因诊断（突破坚硬耳蜗外壳的限制）第二步：耳聋的预防和产前诊断第三步：耳聋的基因治疗耳聋基因诊断应达到

2、的目的在分子水平明确病因（意义等同于发现肺炎的致病子）预防耳聋发生指导耳聋治疗判断预后进行耳聋遗传咨询进行产前诊断，迎接正常听力新生儿常染色体显性遗传常染色体隐性遗传线粒体遗传解放军总医院聋病分子诊断中心的数据：在500例各地的先天性耳聋患者20%具有GJB2 235delC纯合或杂合突变在针对100例先天性耳聋患者的GJB2基因全序列分析中发现：先天性耳聋患者中GJB2基因存在高突变率235delC是频率最高的致病突变已发现一系列新突变，表明中国人有其独特的突变热点和频率?广义：不明原因的双侧中重度感音性耳聋强烈推荐：先天性双侧中重度感音性耳聋耳聋的分子学，终止大范围盲目的病因学检查配合新生

3、儿的听力筛查手段，及早明确GJB2基因突变的耳聋诊断，进行提示良好的电子耳蜗移植的治疗效果适合于杂合性GJB2基因突变仍强烈提示耳聋的遗传因素病例：患儿语言发育不良，听力检查显示重度感音性耳聋，2岁时于北京行电子耳蜗移植术，患儿父母及双方家族内均无类似病例。测序证实纯合性GJB2 235del C，突变导致终止密码子提前出现，使其蛋白产物大大短于正常产物。野生型野生型GGGCCC纯合纯合235缺失缺失C诊断结果提示：患儿的先天性耳聋是由于GJB2基因突变导致的。父母均为携带者，后代有25%的风险成为先天性耳聋患者。1. 基因诊断结合产前诊断可以遴选出确定的耳聋胎儿以避免再次生育聋儿。产前诊断：

4、羊水检测产前诊断：羊绒毛膜检测（CVS）大前庭水管大前庭水管常合并耳蜗和（或）半规管畸常合并耳蜗和（或）半规管畸形，如耳蜗形，如耳蜗 畸形、前庭池扩大、半规管畸形、前庭池扩大、半规管壶腹扩大等。听力下降呈进行性或波动性，壶腹扩大等。听力下降呈进行性或波动性，与轻度的头部外伤有密切的关系。与轻度的头部外伤有密切的关系。PDS基因突变与散发性大前庭水管综合征及先天性神经性耳聋联系密切在东亚，5%的语前聋由PDS(SLC26A4)基因突变引起以下三张图片来自一对同卵双生姐妹，均患大前庭水管，具有中、重度听力下降。 基因诊断结果证实她们均具有PDS IVS7-2 A-G突变，明确了其分子致病原因。野生

5、型 IVS 7-2 A突变型 IVS 7-2 A-G 已完成的已完成的2626例针对大前庭水管患者基例针对大前庭水管患者基因诊断在因诊断在2222例患者中发现例患者中发现PDSPDS基因、纯合突基因、纯合突变、复合突变或杂合突变，提示这类患者变、复合突变或杂合突变，提示这类患者中中PDSPDS可能的高突变率以及存在突变热点。可能的高突变率以及存在突变热点。PDSPDS基因突变检测的意义：基因突变检测的意义：配合或代替影象学（颞骨CT)明确耳聋的分子学病因或进行远程诊断指导诊断明确患儿的日常行为及注意事项,提前注意甲状腺异常情况适合于产前诊断和筛查氨基糖甙类抗生素种类（链霉素、庆大霉素、卡那霉素

6、、妥布霉素及小诺霉素等）广谱高效价格低廉应用广泛严重的耳毒性副作用受损听力难以逆转 解放军总医院聋病分子诊断中心大部分氨基糖甙类抗生素致聋（AAID）家系为母系遗传方式线粒体基因第1555 位AG均质性点突变与AAID关系密切单次剂量的氨基糖甙类药物应用即可导致携带此突变个体的重度听力损失解放军总医院聋病分子诊断中心我科收集的遗传性耳聋家系中有40个母系遗传耳聋家系携带点突变解放军总医院聋病分子诊断中心据报道：上海地区的药物性耳聋患者30%由A1555G突变引起美国：15%药物性耳聋患者由A1555G突变引起陈观明 武汉（2000）：检测66例药物性耳聋患者中，14例有A1555G突变日本：估

7、计3%门诊耳聋患者携带A1555G突变南京卜行宽教授报道一个特大母系遗传家系：家系总人口507人耳聋患者136人31人轻度、18人中度、31人重度、56人极重度耳聋15人曾用过氨基糖甙类抗生素，均在3个月内发生极重度耳聋耳聋患者均携带和突变mtDNA1555 A to G应用范围：常规临床检测新生儿筛查孕期母亲筛查耳聋患者群中的病因学检查氨基糖甙类药物应用前的预防性检查耳聋基因诊断试剂盒解放军总医院聋病分子诊断中心我们在500例耳聋患者中用此试剂盒进行了筛查，共发现60例患者携带mtDNA A1555G突变，患者多来自母系遗传耳聋家系，其发病多与氨基糖甙类抗生素用药史有关，提示这一筛查的预防性

8、意义。外地病人自行送诊程序外地病人自行送诊程序电话电邮联系当地医院抽血诊断中心进行标本处理和分子诊断明确病因、避免对所有可能病因的猜测和恐惧明确病因、避免对所有可能病因的猜测和恐惧避免再次的伤害和有利于家庭成员的听力保护避免再次的伤害和有利于家庭成员的听力保护可以进行有把握的再次生育可以进行有把握的再次生育指导治疗和日常生活行为、预防并发症指导治疗和日常生活行为、预防并发症对聋儿的下一代生育可以提前检测和干预对聋儿的下一代生育可以提前检测和干预耳聋基因诊断对象：耳聋基因诊断对象：先天性耳聋双侧感音性耳聋大前庭水管综合征患者有家族史的耳聋患者正常夫妇生育前预防性检测耳聋基因诊断程序：耳聋基因诊断

9、程序：由医生开耳聋基因诊断申请单（治疗单、空白验血单或心电图申请单均可）由治疗室护士记价，抽血送耳研所4层登记，标本处理第三天取常规检测结果、一周取序列分析结果GJB2 235 delC检测（ApaI酶切法）线粒体线粒体DNA A1555G突变采用试剂盒方法突变采用试剂盒方法导致大前庭水管的导致大前庭水管的PDS突变检测突变检测突变热点区域测序：Exon7+8亚热点区域测序：Exon191510DHPLC全基因扫描GJB2 全基因序列分析：正常全基因序列分析：正常 GJB2全基因序列分析未发现GJB2的突变和多态性。此结果基本排除了最常见的GJB2相关的先天性耳聋，但不能排除其它较为少见的遗传

10、性聋的可能线粒体基因线粒体基因 A 1555G 突变分析：阴性突变分析：阴性 简介 此结果阴性排除了导致易感耳毒性耳聋个体的线粒体DNA A1555G突变，但不能排除导致易感耳毒性耳聋个体的线粒体DNA的其它较为罕见的突变，建议有明确耳毒性药物使用史的耳聋患者、母系耳聋家系、有糖尿病病史的患者进一步行线粒体DNA其它位点的检测。PDS基因突变分析：未测基因突变分析：未测 简介 PDS基因突变与大前庭水管综合征和耳蜗畸形有非常密切的关系，颞骨CT证实有上述情况者建议行此项检测。GJB2 235位点分析：纯合性位点分析：纯合性235 del C简介 纯合性纯合性235 del C提示其耳聋由GJB

11、2基因突变导致，建议进一步进行GJB2基因测序以证实此结果，亦建议患者父母进行同样检测以确定传递模式并证实此项诊断。 GJB2 235位点分析：杂合性位点分析：杂合性235 del C 简介 此结果在先天性耳聋患者强烈提示GJB2基因突变可能是耳聋的致病原因，建议进一步进行GJB2全基因测序以发现GJB2基因上其它可能导致耳聋的突变。线粒体基因线粒体基因 A 1555G 突变分析：阳性突变分析：阳性简介 此结果阳性显示患者或个体携带有导致对耳毒性药物敏感的线粒体DNA A1555G突变，本人及家族成员绝对禁止使用氨基糖甙类抗生素（链霉素Streptomycin、新霉素Neomycin、卡那霉素

12、Kanamycin、庆大霉素Gentamycin、西索米星Sisomicin、奈替米星Netilmicin、阿米卡星Amikacin、核糖霉素landamycin、小诺米星Micronomicin等），建议进一步行测序检测证实此项诊断，并建议家族成员进行相应检测。PDS基因突变分析：基因突变分析：PDS IVS7-2 A-G 纯合突变纯合突变简介 PDS基因突变与大前庭水管综合征和耳蜗畸形有非常密切的关系， PDS IVS7-2 A-G 纯合突变是大前庭水管的致病原因。建议患者父母同时进行检测并注意患者的甲状腺功能情况。 家庭1：(散发性先天性耳聋）患儿胡*，2岁，先天性重度耳聋，基因检测示纯

13、合GJB2 299-300delAT突变。父母听力正常，基因检测均示杂合GJB2 299-300delAT突变。咨询要点：患者个体：明确诊断，指导治疗父母：阐明遗传模式和再生育风险整个家庭：所有成员可以受益于基因诊断和产前干预家庭2：母系遗传药物性耳聋家系基因检测结果示IV-5、 IV-6及其母亲携带mitoDNA A1555G突变，推算家系内存在21名携带者，除了三例死亡和五名发病者，其余13名应严格避免应用氨基糖甙类药物。 家庭3：大前庭水管综合征患儿张*，波动性听力下降，98年ABR阈值为R 75、L 65dB；2003年双侧均为100dB，父母听力正常。基因检测：患儿为IVS7-2 A

14、-G和IVS15+5 G-A复合突变，父亲为IVS15+5 G-A突变携带者，母亲为IVS7-2 A-G突变携带者。咨询要点：确定此病为遗传性指导患儿治疗和预防确定其再生育风险，告之可能由基因诊断获得的益处和技术的限制家庭4：要求生育第二胎的聋儿家庭陈*：先天性耳聋，语言差，测听示双耳重度感音性聋。父母及双方家庭无其他类似病例，母怀孕6个月。基因检测：陈*、胎儿、父、母GJB2 235 delC和mitoDNA A1555G突变。GJB2全基因测序示陈*无任何突变和多态性，胎儿有GJB2 79G-A杂合多态和341A-G杂合多态变化。 家庭4：要求生育第二胎的聋儿家庭咨询要点：由患者家族史基本

15、排除显性遗传耳聋由患者病史基本排除综合征性耳聋由mitoDNA1555位点检测排除最常见的母系遗传药物敏感性耳聋由GJB2的阴性检测结果排除了最常见的常染色体隐性遗传结论：患者遗传性耳聋的诊断概率由50%降低至10%，实际聋儿出生危险性不大于2.5%,大大增加了胎儿正常听力的可能性。范例5：耳聋家庭成员婚前的预防性检测ZY，女，听力正常，父母均为聋哑人；ZR，男，听力正常，家族内无耳聋患者。检测结果：ZY，GJB2 79G-A纯合多态和341A-G纯合多态，PDS基因E7+8和E19未见突变。ZY母， GJB2 79G-A杂合多态和341A-G杂合多态。ZR， GJB2 79G-A杂合多态和341A-G杂合多态。以上受检者mitoDNA 1555位点正常。咨询要点：ZY父母不是GJB2所致的耳聋由mitoDNA1555位点检测排除最常见的母系遗传药物敏感性耳聋ZY和ZR结合生育隐性遗传耳聋后代的可能性不大（排除GJB2耳聋和大前庭水管综合征）基因检测在任何夫妇不能排除环境因素或少见的遗传因素致聋