自体骨髓干细胞移植治疗冠心病的临床研究课件.ppt

1、南京医科大学第一附属医院心脏科张馥敏 南 京 医 科 大 学 第 一 附 属 医 院南 京 医 科 大 学 第 一 附 属 医 院 南 京 大 学 模 式 动 物 研 究 所南 京 大 学 模 式 动 物 研 究 所 美 国 东 田 纳 西 州 大 学美 国 东 田 纳 西 州 大 学 常 州 市 第 二 人 民 医 院常 州 市 第 二 人 民 医 院 苏北人民医院苏北人民医院 镇镇 江江 市市 第第 一一 人人 民民 医医 院院心肌细胞坏死南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 心衰治疗手段心衰治疗手段南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 干细胞是

2、多功能，能自我更新的细胞，其生长和分化受niche cell调控。南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 干细胞生长和分化依赖于其接触的内外源性因子。南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 干细胞来源干细胞来源参与血管新生参与血管新生减少心肌细胞凋亡减少心肌细胞凋亡激活心肌细胞分化激活心肌细胞分化分化为心肌样细胞分化为心肌样细胞南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 骨髓干细胞南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 研究方法研究方法南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 研究对象研究对象南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 研究目的研究目的南京医科大学

3、第一附属医院心脏科 张馥敏 随访人群随访人群南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 方 法南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 骨髓干细胞的形态学特征骨髓干细胞的形态学特征南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 术前评价术前评价南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 术后随访术后随访南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 细胞移植细胞移植南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 移植细胞数移植细胞数病例病例 B M S C（106）B M N N C（106）123456789101112131415161718192021222324252627282

4、930311.12.71.21.60.92.63.51.01.61.21.91.30.91.21.91.21.11.81.51.32.01.32.12.42.21.82.41.91.8 8.3 6.1 3.71.63.42.83.23.43.13.82.23.62.432.72.33.32.03.13.63.33.03.12.83.13.03.6南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 2 2例患者因梗死相关动脉狭窄小于例患者因梗死相关动脉狭窄小于5050，仅从梗死相关动脉进行骨髓干细胞移植；仅从梗死相关动脉进行骨髓干细胞移植； 1 1例患者因无法开通例患者因无法开通LADLAD及及RCARCA

5、，从提供侧从提供侧支循环的支循环的LCXLCX中进行骨髓干细胞移植；中进行骨髓干细胞移植； 1 1例患者例患者1 1年前曾行年前曾行PCIPCI术，只行骨髓干细术，只行骨髓干细胞移植；胞移植； 其余其余2020例患者均在梗死相关血管例患者均在梗死相关血管PCIPCI术后术后进行干细胞移植进行干细胞移植 。南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 安全性安全性南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 术前 术后 术前、术后LVDd比较（ mm ）南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 58.217.757.75 58.258 8.31 P0.05南京医科大学第

6、一附属医院心脏科 张馥敏 51.139.689.68 42.5812.4912.49 P0.05典型病例（一）典型病例（一） 患者患者, ,男，男，3838岁，前壁心肌梗死，因岁，前壁心肌梗死，因梗死相关血管狭窄小于梗死相关血管狭窄小于5050，仅接，仅接受干细胞移植受干细胞移植 移植后移植后6 6月心功能由月心功能由级提高至级提高至级级 超声结果提示超声结果提示LVDdLVDd扩大扩大4 4mmmm（术前术前42 mm，术后术后46mm），LVEFLVEF提高提高4 4（术前（术前65.665.6 % %，术后术后69.6%69.6%）南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 术前、术后术前、

7、术后6月二维超声心动图心功能对比月二维超声心动图心功能对比 南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 治疗前后心肌灌注对比治疗前后心肌灌注对比（未行（未行PCIPCI）南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 典型病例（二典型病例（二）南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 治疗前后心肌灌注对比治疗前后心肌灌注对比（未行（未行PCIPCI）南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 典型病例（三）典型病例（三）南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 讨论南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 讨论讨论南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 讨论讨论南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 讨论讨论 南京

8、医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 需大规模随机对照临床试验进行评价需大规模随机对照临床试验进行评价结结 论论南京医科大学第一附属医院心脏科 张馥敏 近期研究近期研究尽管骨髓干细胞移植可使心功尽管骨髓干细胞移植可使心功能改善，但改善有限。能改善，但改善有限。目前认为移植细胞在心肌微环目前认为移植细胞在心肌微环境下发生境下发生凋亡凋亡可能是影响心功能可能是影响心功能改善效率的重要原因之一。改善效率的重要原因之一。促进移植的干细胞存活，减少促进移植的干细胞存活，减少移植后的移植后的凋亡凋亡，是进一步提高，是进一步提高心功能的关键步骤心功能的关键步骤抗凋亡基因转染抗凋亡基因转染( (AktAkt等等

9、) )协同应用细胞因子协同应用细胞因子( (EPOEPO等等) ) 促红细胞生成素（促红细胞生成素（EPOEPO）主要由肾主要由肾脏皮质及外髓部肾小管周围的毛细血脏皮质及外髓部肾小管周围的毛细血管内皮细胞生成，是调节红细胞系增管内皮细胞生成，是调节红细胞系增殖、分化及生存的主要细胞因子，临殖、分化及生存的主要细胞因子，临床主要应用于床主要应用于肾性贫血肾性贫血。研究证实研究证实EPOEPO能刺激内皮祖细胞迁移能刺激内皮祖细胞迁移出骨髓；出骨髓； rHuEPOrHuEPO能够促进内皮祖细胞增殖、形能够促进内皮祖细胞增殖、形成新生血管。成新生血管。 有实验显示有实验显示EPO-EPOREPO-EP

10、OR信号通路除信号通路除促进缺氧条件下新生血管形成外，促进缺氧条件下新生血管形成外，还有减少细胞还有减少细胞( (内皮祖细胞、心肌细内皮祖细胞、心肌细胞、造血干细胞等胞、造血干细胞等) )凋亡凋亡，提高细胞，提高细胞生存能力作用生存能力作用。 研研 究究 目目 的的 探讨骨髓干细胞移植期探讨骨髓干细胞移植期应用应用EPOEPO干预手段能否提高干预手段能否提高骨髓干细胞移植治疗心肌骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的效率梗死的效率 实验对象：实验对象： WistarWistar大鼠大鼠( (雄性、雄性、2102102020g)g)实验分组：实验分组：( (n=8)n=8) 1 1组：联合治疗（组：联合治

11、疗（MSC+EPOMSC+EPO）组组 2 2组：骨髓干细胞移植（组：骨髓干细胞移植（MSCMSC）组组 3 3组：促红细胞生成素（组：促红细胞生成素（EPOEPO）组组 4 4组：急性心肌梗死（组：急性心肌梗死（MIMI）组组骨髓干细胞骨髓干细胞的体外培养的体外培养：细胞培细胞培养养2 2天后进行首次换液，经天后进行首次换液，经2-32-3次换次换液后，可基本去除不贴壁的骨髓造液后，可基本去除不贴壁的骨髓造血干细胞，得到血干细胞，得到以以骨髓间充质干细骨髓间充质干细胞胞为主的骨髓干细胞（为主的骨髓干细胞（间充质干细间充质干细胞胞、内皮祖细胞等）、内皮祖细胞等）结扎左前降支冠状动脉中上结扎左前

12、降支冠状动脉中上1/31/3处处 制备大鼠急性心肌梗死模型制备大鼠急性心肌梗死模型骨髓干细胞心肌梗死区移植骨髓干细胞心肌梗死区移植围移植期应用围移植期应用EPOEPO：围移植期围移植期3 3天，天，1 1周后连续周后连续3 3天；天；30003000u/kgu/kg（腹腔）腹腔）检测指标：检测指标：超声心动图超声心动图心肌梗死面积心肌梗死面积毛细血管密度毛细血管密度BclBcl-2-2及及BaxBax变化变化技术流程图技术流程图 制备大鼠急性心梗模型制备大鼠急性心梗模型骨髓穿刺，骨髓干细胞获取骨髓穿刺，骨髓干细胞获取骨髓干细胞分离、培养骨髓干细胞分离、培养干细胞移植干细胞移植大鼠心梗后一日大鼠

13、心梗后一日大鼠心梗前一日大鼠心梗前一日EPO注射注射EPO注射注射EPO注射注射大鼠心梗后一周大鼠心梗后一周EPO连续注射连续注射3天天大鼠心梗后三周大鼠心梗后三周大鼠心梗后二日大鼠心梗后二日心脏超声检查心脏超声检查心脏超声检查、处死动物，心脏超声检查、处死动物，进行病理学及相关机制研究进行病理学及相关机制研究5.675.615.575.635.395.515.696.253.563.03.453.323.483.453.524.2275.1984.3975.8679.4472.6075.2476.2669.120.7 24.0 26.0 28.1 12.95 10.78 10.43 10.4

14、3 6.31 各组毛细血管密度各组毛细血管密度MI 组组rHuEPO组组BMSC组组rHuEPOBMSC组组0.128 0.117 0.116 0.103 各组各组Bcl-2蛋白表达蛋白表达MI 组组rHuEPO组组 BMSC组组rHuEPOBMSC组组0.113 0.126 0.125 0.147 MI 组组rHuEPO组组BMSC组组rHuEPOBMSC组组 各组各组Bax蛋白表达蛋白表达讨讨 论论研究观察到研究观察到MSCMSC移植和移植和EPOEPO注射均注射均能有效地提高急性心肌梗死后心能有效地提高急性心肌梗死后心功能的恢复。功能的恢复。与与MSCMSC组和组和EPOEPO组相比，联

15、合治疗组相比，联合治疗组心功能改善最为明显，心肌梗组心功能改善最为明显，心肌梗死面积最小。死面积最小。免疫组织化学检查结果显示联免疫组织化学检查结果显示联合治疗组合治疗组毛细血管密度毛细血管密度最为明最为明显，说明联合治疗有显著的显，说明联合治疗有显著的协协同同作用作用联合治疗组联合治疗组BclBcl-2-2表达值较其余表达值较其余三组显著增强，三组显著增强，BaxBax表达明显下表达明显下调。提示调。提示EPOEPO具有抗凋亡作用具有抗凋亡作用 激活激活JAK/STATJAK/STAT信号通路信号通路激活激活PI3K/PI3K/AKtAKt信号通路信号通路EPOEPO可以提高可以提高BMSCBMSC移植治疗急性梗移植治疗急性梗死的效果，可能与提高死的效果，可能与提高BclBcl-2-2表达、表达、抑制抑制BaxBax活化以及促进血管发生有活化以及促进血管发生有关。关。