微生物次生代谢产物研究方法1课件.ppt

1、传统方法色谱方法波谱学手段单晶衍射化学反应活性引导分离或系统分离1) 时间短；时间短；2) 温度低；温度低；3) pH适中（比较稳妥）；适中（比较稳妥）；4) 生物安全（不可忽视）生物安全（不可忽视）发酵液预处理加热（使蛋白质等大分子变性沉淀，慎用/预试验）调pH（同上，慎用/预试验）絮凝（使菌体、悬浮物、大分子、粘稠物等沉淀或吸附聚集，有助滤作用，对于细菌、放线菌、微藻很适用，明矾、硅藻土、纤维素等）固液分离抽滤，过滤，板框式压滤机滤渣（菌体及杂物）水相有机溶剂萃取（按极性递增的顺序）经减压浓缩或不浓缩吸附富集/固相萃取用水、醇的水溶液、丙酮等梯度洗脱大孔吸附树脂、活性炭、亲和柱等通用性好，

2、可按极性实现初步分段，条件简易；但费时、易喷溅、有机溶剂用量大、乳化现象严重大大减少工作量，且可按分子量、极性等实现较好的初步分离，但通用性不及溶剂萃取法溶剂萃取胞内产物甲醇、丙酮、氯仿甲醇等比较/合并？胞外产物微滤截菌及悬浮杂物超滤除蛋白、多糖等大分子反渗透除盐、单糖、氨基酸等过小分子并除水浓缩效率很高的新思路 甲酰胺(109)水(80)甲酸(58)乙腈(36.3)甲醇(33)乙醇(24.3)丙酮(20.7)正丁醇(17.8)乙酸乙酯(6.02)乙醚()氯仿(5.2)二氯甲烷()甲苯苯(2.3)二氯乙烷()四氯化碳(2.24)二硫化碳()环己烷()正己烷(2.0)石油醚()。 影响化合物极性

3、的因素： (1) 化合物分子母核大小（碳数多少）：分子大、碳数多，极性小；分子小、碳数少，极性大。 (2) 取代基极性大小：在化合物母核相同或相近情况下，化合物极性大小主要取决于取代基极性大小。 常见基团极性大小顺序如下；酸酚醇胺醛酮酯醚烯烷。 举例：判断下列各组化合物极性大小。OHOCOCH3O成分类型成分类型 水水 醇类醇类 亲脂性有机溶剂亲脂性有机溶剂 游离生物碱游离生物碱 + +生物碱盐生物碱盐 + + 苷类苷类 + + 苷元苷元 + + 挥发油挥发油 + +糖类（单糖低聚糖）糖类（单糖低聚糖） + （多糖）（多糖） 有机酸（大分子）有机酸（大分子） + + （小分子）（小分子） + + 树脂树脂 + +氨基酸氨基酸 + + 蛋白质、酶蛋白质、酶 鞣质鞣质 + + 色素（亲水性）色素（亲水性） + + （亲脂性）（亲脂性） + + 油脂、蜡油脂、蜡 + + n：单糖：无水醇难溶；：单糖：无水醇难溶；n多糖：对醇多糖：对醇60%以上难溶。以上难溶。n蛋白质、酶：对水热水沉淀；蛋白质、酶：对水热水沉淀；n对醇对醇60%以上沉淀。以上沉淀。水一乙醇 甲醇一水 石油醚一苯 氯仿一醇 苯一无水乙醇 水一丙醇 甲醇一乙醚 石油醚一丙酮 乙醇乙醚一乙酸乙醋 苯一环己烷 水-乙酸 甲醇一二氯乙烷 氯仿一醚 乙醚一丙酮