实验四、Vc的含量测定(草酸)课件.ppt

1、一、实验目的一、实验目的1、学习维生素、学习维生素C C 2，6-二氯酚靛酚二氯酚靛酚定量测定量测定法的原理和方法。定法的原理和方法。2 2、进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操、进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。作技术。3 3、了解蔬菜、水果中维生素了解蔬菜、水果中维生素C C含量情况。含量情况。 二、原理二、原理 维生素维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。）。它对物质代谢的调节具有重要它对物质代谢的调节具有重要的作用。的作用。 维生素维生

2、素C C是具有是具有L L系糖型的不饱和多羟基物，系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。丰富。 抗坏血酸分子中存在烯醇式结构抗坏血酸分子中存在烯醇式结构 C=C OH OH 因而具有很强的还原性，氧化失去两因而具有很强的还原性，氧化失去两个氢原子而转变成脱氢抗坏血酸。个氢原子而转变成脱氢抗坏血酸。维生素维生素C的结构的结构2，6二氯酚靛酚钠盐（二氯酚

3、靛酚钠盐（C12H6O2NCl2Na)染料染料 2，6二氯酚靛酚钠盐（二氯酚靛酚钠盐（C12H6O2NCl2Na)染染料具有氧化性，可氧化抗坏血酸而其本身被还原料具有氧化性，可氧化抗坏血酸而其本身被还原为为无色的衍生物无色的衍生物，可作为维生素，可作为维生素C含量测定的滴含量测定的滴定剂和指示剂。定剂和指示剂。 在酸性环境中氧化型在酸性环境中氧化型2，6-二氯酚靛酚呈红色，二氯酚靛酚呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。在中性或碱性溶液中呈蓝色。 用用2，6二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗血酸尚未完全被氧化时，滴下的性溶液时，在抗血酸尚未完全被氧化时，滴下

4、的2，6-二氯酚靛酚立即被还原为无色，当抗坏血二氯酚靛酚立即被还原为无色，当抗坏血酸全被氧化时，则滴下的酸全被氧化时，则滴下的2，6-二氯酚靛酚溶液二氯酚靛酚溶液呈红色。所以在滴定过程中当溶液从无色转变为呈红色。所以在滴定过程中当溶液从无色转变为微红色微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定的终点滴定的终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸（维生素可以计算出被测定样品中抗坏血酸（维生素C）的含量。的含量。三、器材三、器材1、研钵、研钵 2、移液管、移液管 3、容量瓶、容量瓶 4、锥形瓶、锥

5、形瓶 5、微量滴定管（微量滴定管（5ml） 6、漏斗漏斗7、纱布、纱布 8、滤纸、滤纸9、分析天平、分析天平附微量滴定管使用附微量滴定管使用：微量滴定管的操作微量滴定管的操作1 1、检查检查：用蒸馏水检查滴定管的活塞是否漏：用蒸馏水检查滴定管的活塞是否漏水，活塞转动是否灵活。水，活塞转动是否灵活。2 2、装滴定剂装滴定剂：摇匀试剂溶液，用试剂润洗滴：摇匀试剂溶液，用试剂润洗滴定管定管2-32-3次，约装次，约装10-1510-15mlml左右。左右。3 3、排气泡排气泡：调节起始刻度（最好在整：调节起始刻度（最好在整mLmL的刻的刻度处，或调零，并记录初始刻度数。度处，或调零，并记录初始刻度数

6、。4 4、滴定滴定：勿顶活塞，防漏液，轻轻转动活塞，：勿顶活塞，防漏液，轻轻转动活塞，滴定时边用手腕轻轻摇动锥形瓶，近终点时要滴定时边用手腕轻轻摇动锥形瓶，近终点时要“半滴半滴”操作操作冲洗。冲洗。V1读数偏小读数偏小V2正确读数正确读数V3读数偏大读数偏大5 5、观察颜色的变化和读数观察颜色的变化和读数。注意滴定管。注意滴定管要垂直，视线与刻度平行，保留小数点要垂直，视线与刻度平行，保留小数点后三位。后三位。6、滴定完毕，清洗干净，凉干后在活塞、滴定完毕，清洗干净，凉干后在活塞处放一小纸片存放。处放一小纸片存放。四、试剂和材料四、试剂和材料1、苹果苹果 、Vc 注射液 2、1、2草酸溶液草酸

7、溶液3、2，6-二氯酚靛酚溶液二氯酚靛酚溶液 100ml/组 称取0.21 g碳酸氢钠，0.26g 2,6-二氯酚靛酚，溶于250ml蒸馏水中，稀释到1000ml. 过滤，装入棕色瓶内，置冰箱内备用，保存不超过3天。每次临用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。已配好全班公用。4、标准抗坏血酸溶液标准抗坏血酸溶液 准确称取纯抗坏血酸结晶准确称取纯抗坏血酸结晶100mg溶于溶于1草酸草酸溶液定容到溶液定容到100ml。装入装入棕色瓶棕色瓶中贮中贮存冰箱内。（已配好，全班公用）存冰箱内。（已配好，全班公用）五、操作五、操作1、维生素、维生素C提取液制备提取液制备 待测样品待测样品1：水洗干净整株新鲜蔬

8、菜或整个新：水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取称取20g，加入加入20ml 2草酸草酸，用研钵研磨，用研钵研磨，四层纱布过滤，反复抽提四层纱布过滤，反复抽提2-3次，（纱布可用次，（纱布可用少量少量2草酸草酸洗几次）合并滤液，定容至洗几次）合并滤液，定容至50ml（滤液混浊可离心）备用。滤液混浊可离心）备用。2、标定、标定 准确量取准确量取1ml标准抗坏血酸溶液加入标准抗坏血酸溶液加入9ml 1草酸草酸溶液于溶液于100ml锥形瓶。然后用锥形瓶。然后用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为微

9、红色微红色持续持续15 15秒不退色为终点。秒不退色为终点。计算计算2，6-二氯酚二氯酚靛酚溶液的浓度，以每靛酚溶液的浓度，以每ml2，6-二氯酚靛酚二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的溶液相当于抗坏血酸的mg 数来表示。数来表示。（取（取10ml 1草酸草酸液做空白对照，按以上液做空白对照，按以上方法滴定）方法滴定）3 3、滴定、滴定量取量取10ml样品样品1提取液于锥形瓶中。用微量滴提取液于锥形瓶中。用微量滴定管，以定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定样品提取二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，液，呈微弱的玫瑰色，持续呈微弱的玫瑰色，持续5 5秒钟不退色为终秒钟不退色为终点，点，记录所用记录所用2，6-

10、二氯酚靛酚的二氯酚靛酚的ml数。注意数。注意整个滴定过程不要超过整个滴定过程不要超过2分钟。分钟。另取另取10ml 1草酸草酸做空白对照滴定。做空白对照滴定。样品及空白同时各做二份。样品及空白同时各做二份。注意事项注意事项(1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。(2) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所滴定所用的染料不应小于用的染料不应小于1ml或多于或多于4ml，如果样品含如果

11、样品含维生素维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。或改变提取液稀释度。(3) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。下，干扰物反应进行得很慢。(4) 干扰滴定因素有：干扰滴定因素有： 色素色素：若提取液中色素很多时，滴定不易看出：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，。颜色变化，可用白陶土脱色，。 还原剂还原剂：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时

12、，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于于15s内不消退为终点。内不消退为终点。 (5) 提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。取上清液进行滴定。六、结果计算六、结果计算 （VA-VB）*S 维生素C mg数/100g样品= *100 VA为滴定样品提取液所用的为滴定样品提取液所用的 2，6-二氯酚靛酚溶二氯酚靛酚溶液的液的mL数数VB为滴定空白对照所用的为滴定空白对照所用的 2，6-二氯酚靛酚溶液二氯酚靛酚溶液的的mL数数S为为1mL染料能氧化抗坏血酸染料能氧化抗坏血酸mg数数W为待测样品的重量。为待测样品的重量。W七、思考题七、思考题1、2，6-二氯酚靛酚溶液、标准抗坏血二氯酚靛酚溶液、标准抗坏血酸为何要在棕色瓶冰箱内保存？酸为何要在棕色瓶冰箱内保存？2、为何整个滴定过程不要超过、为何整个滴定过程不要超过2分钟？分钟？3、为何要用、为何要用1草酸草酸做空白对照，其滴做空白对照，其滴定终点如何判定？定终点如何判定？八、分析讨论八、分析讨论