基因的结构和功能课件.ppt

1、4七七.重组频率的计算重组频率的计算 (一一) 等级传递绘图等级传递绘图1956年年Wollman,Jacob和和 Hayes HfrH thr+ leu+ azis lac+ gal+ ()+ str+ mal+ mtl+ F thr- leu- azir lac- gal - ()- str- mal- mtl-HfrF 杂交中的传递等级 选择标记 非选择标记 thr+ /leu+ azis lac+ gal+ ()+ mal+ mtl+thr+leu+ strr 92 49 31 15 0 0gal+ gal+ 75 75 74 84 0 0 Leu arg met arg+ met a

2、rg+ met met met met 图 8-15 根据自然转移的梯度所预期的受体片断的分 配 (二) 中断杂交作图 (interrupted matingexperiment)41961年 Jacob 和 Wollman供体：Hfr H strs thrleuazir tonr lac gal受体：F strr thr leu azis tons lacgal表8-5 HfrF中断杂交中不同时间非选择标记标记的重组率各非选择标记标记的重组频率（）thr取样时间（分）leuazistonslacgal5000001010012300151007031002010088711220401009

3、0753820（1）不同的非选择标记进入受体且重组 的时间不同，但都是稳定的；（2）各基因的重组频率随着时间的增加 而增加，直至极值；（3）按时间顺序，先重组和后重组的基 因，重组率的极值在逐步减少； 0 5 10 15 20 25 (分钟) 起点 thr,leu azi ton lac gal 图 8-13 利用中断杂交进行 E.coli 染色体作图 (三) 重组作图E.coli染色体连锁图4部分二倍体部分二倍体（partial diploid）4部分合子部分合子（merozygote）也称半合子半合子，4内基因子内基因子 (endogenote) 4外基因子外基因子（exogenote）p

4、urlacpro Pur+100%=22% strs pur lac pro Hfr H strr purlacpro strr pur lac pro F strs pur lac pro strr purlacpro strr pur lac strs pur lac pro strr purlacpro strr pur lac strs pur lac pro strr purlacpro strr pur lac pro 图 8-16 Hfr H strs Fpro lac pur，以 strr pur选择标记的重组类型 (仿 Griffiths A.J.F.et al： An In

5、troduction to Genetic Analysis5th Ed. 1993, Fig.10-13)八.性导 (Sexduction)1959年 Adelberg & Burns重复高频重组实验发现一个新的品系，既可以高频，又可高频致育。特点：(1)F因子能高频传递；(2)给体能力的传递与染色体无关；(3)F变为Hfr时，整合到相同位点，F+变为Hfr时整合到不同位点，(4)高频传递特定的基因；(5)形成的部分二倍体不稳定，约10-3会失去F因子。第五节第五节噬菌体染色体的连锁和交换噬菌体染色体的连锁和交换4一、噬菌体的结构和形态一、噬菌体的结构和形态 表 8-6 几种病毒染色体的特点

6、病毒宿主核酸结构染色体类型T-偶数噬菌体E.coli双链 DNA线状；环状排列末端有 RST7E.coli双链 DNA线状；单一顺序E.coli双链 DNA线状；单股粘性末端P22沙门氏菌双链 DNA线状；单一顺序174E.coli单链 DNA环状QE.coli单链 RNA线状（呼肠病毒）哺乳动物双链 RNA几个片段SV40人类双链 DNA超螺旋环鼠白血病病毒鼠单链 RNA几个片段烟草花叶病毒烟草单链 RNA线状二二噬菌体噬菌体41951年 Esther Lederberg 发现K12中有原噬菌体，并命名为。4附加体附加体( (episome) )4合子诱导合子诱导（zygotic induc

7、tion） Hfr（） F 无重组子Hfr F（） 有重组子 三、噬菌体的基因重组三、噬菌体的基因重组4菌苔菌苔（lawn）4噬菌斑噬菌斑（plaque）表 8-7 hr+h+r混合感染 E.coliB 和 B2 的结果表型推导的基因型透明 小hr+半透明 大h+r半透明 小h+r+透明 大hrhrh r重组值总噬菌斑数100 四、四、T2的环形遗传图的环形遗传图 表表8-8 8-8 T2 hrT2 hr 杂交的重组率杂交的重组率各种基因型的百分比各种基因型的百分比（% %）重组率重组率（% %）杂交杂交hrhrhrhrhr+h+r112124242343412122424hr+h+r75.9

8、5.9565632326.46.41313hr+h+r130.740.74595939390.940.941.71.7 24 r 1 h 13a) r 7 h 1.7 r13 h r1 r7 r13 h r1 r13 h r7 b) r1 r7 h r13 r1 h r13 r7 图图 8-24 r-h 的的 图图 距距 和和 r1,r7,r13 的的 不不 同同 排排 列列 第六节 转导转导（transduction）一、转导的发现一、转导的发现1952年J.Lederberg ，N. Zinder发现发现（1）P22的侵染性和FA的能力都可被一些水解酶，如DNase和胰蛋白酶所抑制；（2）

9、FA的大小和质量与P22相同。（3）用P22抗血清或加热处理都可以使P22 和FA失活，且失活速率相同；（4）FA和P22的宿主范围相同。 转导频率可用以下方法来计算： 侵染 裂解P1 供体(野生型 E.coli) 收集子噬菌体 (基本培养基) 受体(缺陷型 E.coli) 选出重组子 菌苔计数噬菌斑(完全培养基)转导子数转导子数转导频率侵染受体的 P1 颗粒数100噬菌斑数转导子数100三三.共转导共转导（contransduc）表 8-9 P1 共转导实验结果实验选择标记非选择标记1leuazir:5%, thr:2%2thrleu:3%,3leu,thrazir:0%单个转导子数RFab

10、=总转导子数100当我们选择标记为 a时，公式为 abRFab=abab100当我们选择标记为 b时，公式为:ab数RFab=abab100 三、特异性转导三、特异性转导又称局限性转导（restricted transduction） J. Lederberg & N. Zinder发现发现 野生型E.coli UV 细胞裂解 K12 () gal 诱导 感染非溶原的品系 基本 106 gal 培养基 选择 转导体4进一步发现:（1）这些转导子是溶原的，具有 “ 免疫 力” 。说明什麽？（2）gal 转导子遗传特点不稳定， 有1-10又变成gal。表明什麽？ （3）gal转导子在细菌裂解时不能

11、产生 成熟的噬菌体。作何推论？进一步发现:（1）这些转导子是溶原的，具有 “ 免疫 力” 。说明什麽？（2）gal 转导子遗传特点不稳定， 有1-10又变成gal。表明什麽？ （3）gal转导子在细菌裂解时不能产生 成熟的噬菌体。作何推论？4附着位点附着位点（attachment site ,att ） att B（又叫att）， att P4正常的切离正常的切离4非正常切离非正常切离4dg(d gal)4pgal4dbio4低频转导低频转导(low-frequency transduction, LFT）4高频转导高频转导(High-feequency transduction, HFT)4双重溶原双重溶原（double lysoge）细菌