科迪亚E6E7讲义.课件.ppt

1、2014.06.16HPV癌基因E6/E7mRNA检测目录 病例分析病例分析 E6/E7mRNAE6/E7mRNA检测意义检测意义 临床管理临床管理HPV癌基因E6/E7mRNA检测病例分析病例分析1 1-30岁已婚女性 2013.12.3体检：体检： E6/E7mRNA(+)E6/E7mRNA(+) 低度风险低度风险未进行干预性治疗，3个月复查 2014.3.25 细胞学：细胞学：ASC-US E6/E7mRNA(+)E6/E7mRNA(+) 高度风险高度风险 术后病检结果：宫颈术后病检结果：宫颈1点、点、6点点慢性宫颈炎，部分区域呈湿疣慢性宫颈炎，部分区域呈湿疣性改变；性改变；12点处小灶

2、区域点处小灶区域CIN2LEEPHPV癌基因E6/E7mRNA检测病例分析病例分析2-50岁已婚女性 2007年前绝经，后无阴道异常排液、出血及白带中带血等不适，就诊前年前绝经，后无阴道异常排液、出血及白带中带血等不适，就诊前10天无诱因出现阴道出血，量少（每天护垫一张），色鲜红，有异味。天无诱因出现阴道出血，量少（每天护垫一张），色鲜红，有异味。 2013.12.9 门诊细胞学及门诊细胞学及B超检查，同时病人自行口服妇炎康胶囊。超检查，同时病人自行口服妇炎康胶囊。2天后，出血少但仍腰骶部疼痛，无尿频、排尿困难、畏寒、发热等症状。天后，出血少但仍腰骶部疼痛，无尿频、排尿困难、畏寒、发热等症状。

3、细胞学检查细胞学检查ASC-H,E6/E7mRNA(+)E6/E7mRNA(+) 高风险，高风险，B B超结果示子宫内膜厚超结果示子宫内膜厚0.6cm0.6cm 行子宫行子宫+双附件双附件+盆腔淋巴结切除术盆腔淋巴结切除术术后病检结果：术后病检结果：宫颈非角化鳞状细胞癌，癌灶环状累及宫颈宫颈非角化鳞状细胞癌，癌灶环状累及宫颈1/2周（癌灶最大径约周（癌灶最大径约2.5cm），间质浸润深约），间质浸润深约0.8cm，水平扩散约，水平扩散约2cm，可见脉管癌栓；萎缩性子宫内膜。阴道断端部分区域可见脉管癌栓；萎缩性子宫内膜。阴道断端部分区域VIN；HPV癌基因E6/E7mRNA检测病例分析小结病例分

4、析小结 2 2例例ASCASC细胞学结果的病人，都在接受干预性手术前筛查过细胞学结果的病人，都在接受干预性手术前筛查过癌基因癌基因E6/E7mRNAE6/E7mRNA检测检测，及早的发现了癌前病变。，及早的发现了癌前病变。 我们乐见病人的细胞学筛查管理又多了一个我们乐见病人的细胞学筛查管理又多了一个高特异性高特异性的分的分流手段，通过进一步的筛查确认，尽量采取保守的干预治流手段，通过进一步的筛查确认，尽量采取保守的干预治疗手段，从而大大提高了患者的生活质量。疗手段，从而大大提高了患者的生活质量。HPV癌基因E6/E7mRNA检测目录 E6/E7mRNAE6/E7mRNA检测意义检测意义 病例分

5、析病例分析 临床管理临床管理HPV癌基因E6/E7mRNA检测E6/E7E6/E7癌蛋白癌蛋白: : 外源性高危外源性高危HPVHPV病毒核酸片段插入正常人类基因组病毒核酸片段插入正常人类基因组引入的癌蛋白；引入的癌蛋白；E6E6蛋白蛋白能与人体自身抑癌蛋白能与人体自身抑癌蛋白P53P53结合，而结合，而E7E7癌蛋白癌蛋白能与另一种能与另一种人体抑癌蛋白人体抑癌蛋白RbRb结合，二者综合作用导致细胞分裂机制的破坏，结合，二者综合作用导致细胞分裂机制的破坏，进而引起宫颈基底层细胞无限制恶性增生进而引起宫颈基底层细胞无限制恶性增生HPV致癌过程图示：致癌过程图示：HPV癌基因E6/E7mRNA检

6、测E6/E7癌蛋白诱使细胞转化HPVDNA检测DNA预示着HPV病毒的存在E6/E7 mRNA检测E6/E7 mRNA预示着HPV癌基因的活跃程度E6/E7 mRNA检测： 提示病毒癌基因转录表达情况。 评估宫颈癌变的风险与发展趋势；明确锁定关键风险因素：活跃的HPV癌基因HPV癌基因E6/E7mRNA检测 HPV E6/E7mRNAHPV E6/E7mRNA在宫颈组织中表现癌基因活性，是宫颈癌变在宫颈组织中表现癌基因活性，是宫颈癌变开始开始和和进展进展的的必要条件。必要条件。 E6/E7E6/E7癌基因癌基因E6/E7mRNAE6/E7mRNA筛查对于常规细胞学束手无策的筛查对于常规细胞学束

7、手无策的ASC-ASC-USUS病人拥有更高的病人拥有更高的特异性检出率特异性检出率。 E6/E7 mRNAE6/E7 mRNA与子宫颈癌癌前病变程度呈与子宫颈癌癌前病变程度呈正相关正相关。 HPV癌基因E6/E7mRNA检测 E6/E7 E6/E7 癌基因筛查：癌基因筛查： 相较于液基细胞学筛查又相较于液基细胞学筛查又积极积极了一些，了一些， 相比于相比于HPV DNAHPV DNA检测，检测，E6/E7mRNAE6/E7mRNA癌基因检测又更为癌基因检测又更为保守保守一些。一些。 感染了感染了HPVHPV并不一定会患宫颈癌：并不一定会患宫颈癌： E6/E7mRNA E6/E7mRNA大大大

8、大削减削减了女性患者在接受治疗时的心理了女性患者在接受治疗时的心理压力压力。HPV癌基因E6/E7mRNA检测 共共16291629例进行例进行 E6/E7 mRNA E6/E7 mRNA检测，检测，3030岁以下的女性有岁以下的女性有691691例，例，占总量的占总量的42.4%42.4%。 共共5959例进行了组织学诊断，其中细胞学例进行了组织学诊断，其中细胞学ASCUSASCUS女性有女性有1010例，例，占总量的占总量的16.9%16.9%。 细胞学细胞学ASCUSASCUS的的1010例患者：例患者： 3030岁以下的女性有岁以下的女性有5 5例；例； HPV E6/E7 mRNAH

9、PV E6/E7 mRNA检测阳性的有检测阳性的有9 9例。例。 细胞学细胞学ASCUSASCUS且且E6/E7 mRNAE6/E7 mRNA（+ +）的）的9 9例：例： CIN1CIN1的女性有的女性有3 3例，例，CIN2+CIN2+的女性有的女性有2 2例，鳞状细胞癌的女性例，鳞状细胞癌的女性有有1 1例。例。HPV癌基因E6/E7mRNA检测HPV癌基因癌基因E6/E7mRNA检测试剂盒（宫颈稳态检测试剂盒）检测试剂盒（宫颈稳态检测试剂盒）检测检测靶标靶标：WHO公布的公布的14种高危种高危HPV的癌基因的癌基因E6/E7的转录的转录 产物产物-E6/E7mRNA。检测检测技术技术：

10、分支链：分支链DNA(b-DNA) 德国西门子的核心专利技术；德国西门子的核心专利技术； 无需检测靶标的扩增，而是对检测信号进行放大。无需检测靶标的扩增，而是对检测信号进行放大。HPV癌基因E6/E7mRNA检测Amplification calculation: amplifier no. (6,20) x label probe no. (4; 20) x tree no. (3; 6-8)分支链DNA技术,branched DNA, bDNA)HPV癌基因E6/E7mRNA检测检测优势：检测优势： 1、无需、无需PCR实验室实验室, 可做分子检测实验。可做分子检测实验。 2、检测准确：、

11、检测准确：无需靶标的提取、纯化、反转录、扩增，特 异性探针捕获靶序列后，仅进行信号级联放大，检测更 准确。 3、操作相对简单：、操作相对简单：细胞裂解后，直接加入探针，进行靶标捕获、 信号放大后，通过仪器读取数据。 4、检测标本多样：、检测标本多样：细胞样本（单独取样、TCT剩余标本等） 组织样本（石蜡切片、新鲜组织等）。 5、临床使用范围广、临床使用范围广：可用于宫颈癌变的早期筛查、辅助诊 断、术后随访。HPV癌基因E6/E7mRNA检测ASCUS/LSIL随访中被诊断为随访中被诊断为CIN2+的可能性的可能性: E6/E7 mRNA(+) 是是E6/E7 mRNA(-)的的69.8倍倍 D

12、NA(+)是是DNA(-)的的5.7倍。倍。 HPV癌基因E6/E7mRNA检测细胞内细胞内E6/E7mRNA量化，与巴氏细胞量化，与巴氏细胞学相比，可以更好的预测学相比，可以更好的预测CIN2+ 病变病变结论指出结论指出E6/E7mRNA定量，可以有效地对定量，可以有效地对ASC-US/LSIL进行分流，进行分流，包括包括30岁以下女性。岁以下女性。HPV癌基因E6/E7mRNA检测用用HPV RNA 和和DNA 检测预测检测预测CIN2+:对巴氏筛查对巴氏筛查为为ASCUS或或LSIL的那行进行的那行进行2年跟踪随访年跟踪随访本文显示本文显示HPV RNA 检测与检测与DNA检测（检测（P

13、CR）相比，敏感度相当，特异性较高。相比，敏感度相当，特异性较高。 为为ASCUS或或LSIL的分流提供一种改进方法。的分流提供一种改进方法。HPV癌基因E6/E7mRNA检测有文献研究有文献研究HPV癌基因E6/E7mRNA检测在组织学鉴定结果为在组织学鉴定结果为CIN1或阴道镜检查为阴性的或阴道镜检查为阴性的妇女中，妇女中，HPV mRNA检测的预后价值：随访研究检测的预后价值：随访研究结论：结论：在组织学阴性，高危型在组织学阴性，高危型-HPV DNA阳性妇女，尤其是为了降低后续阳性妇女，尤其是为了降低后续随访强度，随访强度，E6/E7 mRNA的过量表达检测是一个很好的候选物。的过量表

14、达检测是一个很好的候选物。HPV癌基因E6/E7mRNA检测女性轻度宫颈病变分流：数据表明女性轻度宫颈病变分流：数据表明E6E7 mRNA检测是一种检测是一种“检测和治疗检测和治疗”方法。方法。结论：结论：40岁以上女性，若岁以上女性，若E6/E7 mRNA阳性结果或有相阳性结果或有相应的病变直接治疗的好处：减少随访次数、成本，和不应的病变直接治疗的好处：减少随访次数、成本，和不必要的心里负担等。必要的心里负担等。HPV癌基因E6/E7mRNA检测HPV在年轻女性中感染率高、表达率相对低。仅仅是感染趋势。在年轻女性中感染率高、表达率相对低。仅仅是感染趋势。E6/E7-mRNA已经被证明作为未来

15、疾病进展可能指标！已经被证明作为未来疾病进展可能指标！HPV癌基因E6/E7mRNA检测Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test.HPV Test.Leep锥切术成功后检测剩余/复发的宫颈

16、疾病：mRNA HPV检测可能发挥的作用。14%-70%的阳性切缘患者5-15%的干净切缘患者 存在复发宫颈疾病的风险。HPV癌基因E6/E7mRNA检测治疗后检测残留治疗后检测残留/ /复发宫颈病变时：复发宫颈病变时： E6/E7 E6/E7mRNAmRNA检测具有较高的特异性和阳性预测值检测具有较高的特异性和阳性预测值HPV癌基因E6/E7mRNA检测目录 病例分析病例分析 E6/E7mRNAE6/E7mRNA检测意义检测意义 临床管理临床管理HPV癌基因E6/E7mRNA检测 对应2013版NCCN宫颈癌筛查指南，30岁以下的女性中，HPV感染率很高，同时自主清除率也很高不建议这一部分人

17、群中进行HPV DNA检测。 近年来随着初次性生活年龄的提前化，HPV感染有低龄化的趋势。 我院今年1-4月门诊就诊并进行HPV E6/E7癌基因筛查的1629例女性，30岁以下女性有691例，约占42.4%。重视重视30岁以下女性的宫颈安全！岁以下女性的宫颈安全！HPV癌基因E6/E7mRNA检测v HPV DNA负荷量较活跃，假阳性筛出率比较大，容易造成误诊或过诊过治。v 液基细胞学筛查还是一种相对保守的癌前病变筛查方式，但仍然会对一些容易忽略的ASC-US人群束手无策。 E6/E7mRNA检测，筛查出感染检测，筛查出感染HPV且癌基因已经转录的且癌基因已经转录的患者。患者。 较高的较高的

18、特异性特异性和和阳性预测值阳性预测值，找出，找出真正的癌变高风险者。真正的癌变高风险者。E6/E7mRNA检测用于检测用于30岁以下女性岁以下女性HPV癌基因E6/E7mRNA检测 宫颈管粘膜褶皱、宫颈腺体隐窝形成的复杂结构是导致临床宫颈管粘膜褶皱、宫颈腺体隐窝形成的复杂结构是导致临床漏诊的陷阱之一，由于漏诊陷阱，重视漏诊的陷阱之一，由于漏诊陷阱，重视ASC-USASC-US诊断、分流显诊断、分流显得愈加重要。得愈加重要。 每年有很多女性被诊断为宫颈细胞学异常，如每年有很多女性被诊断为宫颈细胞学异常，如ASC-USASC-US。多数。多数异常会不治而愈，太过积极地治疗既不合理也不必要。异常会不

19、治而愈，太过积极地治疗既不合理也不必要。 较多的宫颈癌前病变和宫颈癌症患者，在早期被诊断为不确较多的宫颈癌前病变和宫颈癌症患者，在早期被诊断为不确定或轻度细胞学异常定或轻度细胞学异常,宫颈细胞异常是不能被忽视的，尤宫颈细胞异常是不能被忽视的，尤其是其是ASC-USASC-US。ASCUS人群的管理人群的管理HPV癌基因E6/E7mRNA检测E6/E7mRNA检测用于检测用于ASC-US女性女性可提前预估个体罹患宫颈癌风险；可提前预估个体罹患宫颈癌风险；可验证细胞学的结果；可验证细胞学的结果；可降低漏检，减少过度诊断治疗；可降低漏检，减少过度诊断治疗；可预测病变趋势。可预测病变趋势。E6、E7

20、mRNA检测检测 筛出真正具有致癌风险者，提高筛查管理效率！筛出真正具有致癌风险者，提高筛查管理效率！HPV癌基因E6/E7mRNA检测小结 我们应该认识到子宫颈癌的疾病转化并不是一蹴而就的，我们应该认识到子宫颈癌的疾病转化并不是一蹴而就的，这是一场病毒感染与人体免疫力之间的拉锯战；这是一场病毒感染与人体免疫力之间的拉锯战； 目前，从筛检性价比以及医师的认可度上来讲，细胞学筛目前，从筛检性价比以及医师的认可度上来讲，细胞学筛查还是一种不可替代的常规筛查方式，因而，二者结合的查还是一种不可替代的常规筛查方式，因而，二者结合的联合筛检联合筛检将会是未来的一个将会是未来的一个方向方向。HPV癌基因E6/E7mRNA检测人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。