第七章-各类显微镜简介课件.ppt

1、荧光显微镜荧光显微镜 荧光显微镜和普通显微镜的区别：荧光显微镜和普通显微镜的区别： 1.照明方式通常为落射式，即光源通过照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上。物镜投射于样品上。 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜。于普通显微镜。 3.有两个特殊的滤光片有两个特殊的滤光片 激发滤光片激发滤光片：位于光源前，滤除可见光，：位于光源前，滤除可见光，透过紫外光。透过紫外光。 吸收滤光片吸收滤光片：位于目镜和物镜之间，滤：位于目镜和物镜之间，滤除紫外线，用以保护人的眼睛。除紫外线，用以保护人的眼睛。 落射式荧光显微镜落射式荧光显微镜微管呈绿色、微

2、丝呈红色、细胞核呈兰色微管呈绿色、微丝呈红色、细胞核呈兰色荧光显微照片荧光显微照片偏光显微镜（偏光显微镜（polarizing microscope） 用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。胶原、染色体等等。 和普通显微镜不同的是：和普通显微镜不同的是： 1.1.光源前有偏振片（起偏器），使进入显微镜的光源前有偏振片（起偏器），使进入显微镜的光线为偏振光。光线为偏振光。 2.2.镜筒中有检偏器（一个偏振方向与起偏器垂直镜筒中有检偏器（一个偏振方向与起偏器垂直的的检偏器）。的的检偏器）。 3.3.载物台是可以旋转的，当载物台

3、上放入单折射载物台是可以旋转的，当载物台上放入单折射的物质时，无论如何旋转载物台，由于两个偏振片的物质时，无论如何旋转载物台，由于两个偏振片是垂直的，显微镜里看不到光线，而放入双折射性是垂直的，显微镜里看不到光线，而放入双折射性物质时，由于光线通过这类物质时发生偏转，因此物质时，由于光线通过这类物质时发生偏转，因此旋转载物台便能检测到这种物体。旋转载物台便能检测到这种物体。偏光显微镜的光路图偏光显微镜的光路图偏光显微镜偏光显微镜偏光显微镜下的碎屑岩组分偏光显微镜下的碎屑岩组分相差显微镜（相差显微镜（phasecontrast microscope） 观察未经染色的标本和活细胞。观察未经染色的标

4、本和活细胞。 结构特点结构特点： 1.环形光阑（环形光阑（annular diaphragm） 位于光源与位于光源与聚光器之间，使透过聚光器的光线形成空心光锥，聚光器之间，使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。焦聚到标本上。 2.相位板（相位板（annular phaseplate）在物镜中加了在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟位推迟1/4。分为两种：。分为两种：A+相板：将直射光推迟相板：将直射光推迟1/4，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加明亮，形成亮反差

5、（或称本结构比周围介质更加明亮，形成亮反差（或称负反差）。负反差）。 B+相板：将衍射光推迟相板：将衍射光推迟1/4，两组光，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗。称正反差），结构比周围介质更加变暗。 相差显微镜相差显微镜相差显微镜的工作原理相差显微镜的工作原理相差显微镜显微照片相差显微镜显微照片倒置显微镜倒置显微镜 物 镜 在 载物 镜 在 载物 台 之 下 ，物 台 之 下 ，照 明 系 统 在照 明 系 统 在载物台之上，载物台之上，用 于 观 察 培用 于 观 察 培养的活细胞，养的活细胞，具 有

6、相 差 物具 有 相 差 物镜。镜。 微分干涉差显微镜微分干涉差显微镜（differential interference contrast microscope）简称）简称DIC显微镜。显微镜。 显示结构的三维立体投影影像，适合于显示结构的三维立体投影影像，适合于显微操作。像基因注入、核移植、转基因显微操作。像基因注入、核移植、转基因等的显微操作常在这种显微镜下进行。等的显微操作常在这种显微镜下进行。 DICDIC利用的是偏振光，有四个特殊的光利用的是偏振光，有四个特殊的光学组件：偏振器（学组件：偏振器（polarizerpolarizer）、）、DICDIC棱镜、棱镜、DICDIC滑行器和

7、检偏器（滑行器和检偏器（analyzeranalyzer）。）。 微 分 干 涉微 分 干 涉差 显 微 镜差 显 微 镜的 光 学 原的 光 学 原理理微分干涉差显微镜下的硅藻微分干涉差显微镜下的硅藻暗视野显微镜（暗视野显微镜（dark field microscope） 特点：特点：聚光镜中央有挡光片，使照明光聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜。因而视野的背景是衍射的光线进入物镜。因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。黑的，物体的边缘是亮的。 利用这种显微镜能看到小至利用这种显微镜能看到小至 4200nm

8、的微粒子，分辨率可比普通显微镜高的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。倍。 暗视野显微镜的光学原理暗视野显微镜的光学原理暗视野显微镜下的莱姆病毒暗视野显微镜下的莱姆病毒激光扫描共聚焦显微镜（激光扫描共聚焦显微镜（Laser scanning Laser scanning Confocal Microscopy Confocal Microscopy ，简称，简称LSCMLSCM） 在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或利用计算机进行图像处理，从而

9、得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象。组织内部微细结构的荧光图象。 由于物镜和会聚透镜的焦点在同一光轴上，由于物镜和会聚透镜的焦点在同一光轴上，因而称这种方式成像的显微镜为共聚焦显微因而称这种方式成像的显微镜为共聚焦显微镜镜 。激光扫描共聚焦显微镜成像原理激光扫描共聚焦显微镜成像原理 激光器发出的激光束经过扩束透镜和光激光器发出的激光束经过扩束透镜和光束整形镜，变成一束直径较大的平行光束，束整形镜，变成一束直径较大的平行光束，长通分色反射镜使光束偏转长通分色反射镜使光束偏转90度，经过物镜度，经过物镜会聚在物镜的焦点上，样品中的荧光物质在会聚在物镜的焦点上，样品中的荧光物质在激光的激发下发射沿

10、各个方向的荧光，一部激光的激发下发射沿各个方向的荧光，一部分荧光经过物镜、长通分色反射镜、聚焦透分荧光经过物镜、长通分色反射镜、聚焦透镜会聚在聚焦透镜的焦点处，再通过焦点处镜会聚在聚焦透镜的焦点处，再通过焦点处的针孔，由检测器接收。的针孔，由检测器接收。再利用计算机的图再利用计算机的图像处理及三维重建软件，可以得到高清晰度像处理及三维重建软件，可以得到高清晰度的图片。的图片。 激光共聚焦显微镜激光共聚焦显微镜绿色为微管，兰色为细胞核绿色为微管，兰色为细胞核扫描电子显微镜（扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM） 观察标本的表面结构。观察标本的表面结构。

11、 工作原理：用一束极细的电子束扫描样工作原理：用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子品，在样品表面激发出次级电子，次级电子由探测器收集，并被闪烁器转变为光信号，由探测器收集，并被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。同步的扫描图像。扫描电子显微镜扫描电子显微镜 小麦籽粒中的淀粉粒小麦籽粒中的淀粉粒胡桃叶表皮透射电子显微镜透射电子显微镜 用用电子束作光源，用电磁场作透镜。电子束作光源，用电磁场作透镜。 电子显微镜的放大倍数最高可达近百万电子显微镜的放大倍数最高可达近百万倍，由电子照明系统、电磁透镜成像系统、倍，由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等真空系统、记录系统、电源系统等5部分构部分构成。成。 透射电子显微镜透射电子显微镜玉米叶肉细胞透射电镜照片玉米叶肉细胞透射电镜照片