《药物分析》-第七章课件.ppt

1、 一、掌握芳胺类、苯乙胺类药物的鉴别一、掌握芳胺类、苯乙胺类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。和含量测定的基本原理与方法。 二、熟悉苯丙胺类药物鉴别和含量测定二、熟悉苯丙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。的基本原理与方法。 芳胺类药物分为两类芳胺类药物分为两类芳伯氨基未被取代芳伯氨基未被取代芳伯氨基被酰化芳伯氨基被酰化一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物（一）基本结构与典型药物COOR2NR1HCOOC2H5H2N苯佐卡因苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N C2H52.HCl盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因C

2、OOCH2CH2N(C2H5)2CH3(CH2)3NHHCl盐酸丁卡因盐酸丁卡因CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺1.1.芳伯氨基特性芳伯氨基特性：重氮化偶合反应；芳醛缩合成重氮化偶合反应；芳醛缩合成Schiff碱；易碱；易 氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。2. 水解特性：水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸 丁卡因外水解产物为对丁基苯甲酸外，上述丁卡因外水解产物为对丁基苯甲酸外，上述 均为对氨基苯甲酸。均为对氨基苯甲酸。3. 弱碱性：弱碱性：除苯佐卡因外，其余均含有叔胺

3、氮的侧链，故具除苯佐卡因外，其余均含有叔胺氮的侧链，故具 有弱碱性。有弱碱性。4. 其它特性：其它特性：因结构中有因结构中有 芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链，其芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链，其 游离碱多为碱型油状液体或低熔点固体，难溶于游离碱多为碱型油状液体或低熔点固体，难溶于 水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物一）基本结构与典型药物NH C R2OR1R3R4HONHCOCH3对乙酰氨基酚（扑热息痛）对乙酰氨基酚（扑热息痛）SOONHCOCH3CH3

4、CONH醋氨苯砜醋氨苯砜NHCONC4H9CH3CH3HCl盐酸布比卡因盐酸布比卡因NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl盐酸利多卡因盐酸利多卡因 1.1.水解后显芳伯氨基特性：水解后显芳伯氨基特性：分子结构中含有芳酰氨基，酸分子结构中含有芳酰氨基，酸 水解后显芳伯氨基的特性反应。水解后显芳伯氨基的特性反应。 注意空间位阻的影响。注意空间位阻的影响。 2.2.水解产物易酯化：水解产物易酯化：对乙酰基酚和醋氨苯砜，酸水解生成对乙酰基酚和醋氨苯砜，酸水解生成 醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋 酸乙酯香味。酸乙酯香味。 （二）主要化学性质（二）主要化学性质3

5、.3.酚羟基特性：酚羟基特性：对乙酰氨基酚有游离酚羟基；醋氨苯砜酸对乙酰氨基酚有游离酚羟基；醋氨苯砜酸 水解有酚羟基，可与水解有酚羟基，可与FeClFeCl3 3发生显色反应，发生显色反应， 可相互区别。可相互区别。4.4.弱碱性：弱碱性：利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮，显利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮，显 碱性，可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可碱性，可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可 相互区别。相互区别。5.5.与金属离子发生沉淀反应：与金属离子发生沉淀反应：利多卡因和布比卡因酰胺利多卡因和布比卡因酰胺 基上氮可与基上氮可与CuCu2+2+,Co,Co2+2+生成生成 有色配位化合物沉

6、淀。有色配位化合物沉淀。w （一）重氮化（一）重氮化- -偶合反应偶合反应 分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。Ar-NH2HClNaNO2重氮盐重氮盐OH- - -萘酚萘酚橙黄橙黄猩红色猩红色 直接反应：直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、 盐酸普盐酸普 鲁卡因胺鲁卡因胺间接反应：间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜对乙酰氨基酚、醋氨苯砜 利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。生此反应。H2ONH2COOCH2CH2N(C2H5)2OHNHCOCH3Ar-NH2NaNO2+HClAr-N2+Cl-OHOH-

7、OHAr-N=N猩红或红色 丁卡因虽无芳伯氨基，但可与丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNONaNO2 2反反应生成应生成N N亚硝基化合物的乳白色沉淀。亚硝基化合物的乳白色沉淀。 NHC4H9COOCH2CH2(C2H5)2+ HNO2C4H9N-NOCOOCH2CH2(C2H5)2+ H2O 乳白色对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 + + FeClFeCl3 3蓝紫色化合物蓝紫色化合物NHCOCH3O-NHCOCH3OH3+ FeCl33Fe + 3HCl 1. 与铜和钴离子反应：与铜和钴离子反应： 利多卡因与硫酸铜生成利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色蓝紫色配位化合物；配位化合物； 与氯化钴生成与氯化钴生成

8、亮绿色亮绿色沉淀。沉淀。（三）与金属离子反应三）与金属离子反应CH3CH3NHCOCH2N(C2H5)22+ Cu2+CH3CH3NCOCH2N(C2H5)2CH3CH3(C2H5)2NCH2CONCu蓝紫色+Co2+CH3CH3NCOCH2N(C2H5)2CH3CH3(C2H5)2NCH2CONCo亮绿色2. 2. 羟肟酸铁盐反应羟肟酸铁盐反应 基于普鲁卡因胺分子中的基于普鲁卡因胺分子中的 芳酰胺结构。芳酰胺结构。CONHCH2CH2N(C2H5)2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)23H2O2FeCl3紫红，暗棕色，棕黑色NH2CONHCH2

9、CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)23FeH2O2FeCl3紫红，暗棕色，棕黑色1. 1. 盐酸普鲁卡因的鉴别盐酸普鲁卡因的鉴别 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 + + NaOHNaOH普鲁卡因普鲁卡因油状物油状物对氨基苯甲酸钠对氨基苯甲酸钠 + + 二乙氨基乙醇二乙氨基乙醇（使湿润的红色石蕊试纸变蓝色）（使湿润的红色石蕊试纸变蓝色）对氨基苯甲酸钠对氨基苯甲酸钠 + + HClHCl对氨基苯甲酸（白色）对氨基苯甲酸（白色）NH2COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2N

10、H2COONaNaOHNaOH+ HOCH2CH2N(C2H5)2NH2COONaNH2COOHNH2COOHHClHClHCl.2. 2. 苯佐卡因的鉴别苯佐卡因的鉴别 苯佐卡因苯佐卡因 + + NaOHNaOH乙醇乙醇乙醇乙醇 + + I I2 2 + + NaOHNaOHCHICHI3 3（碘仿臭气，黄色碘仿臭气，黄色沉淀）沉淀）1. 三硝基苯酚衍生物的制备：三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因利多卡因和布比卡因NHCOCH2N(C2H5)2CH3H3CNO2NO2O2NOH.熔点为228232CH3NHCOCH3NC4H9NO2NO2O2NOH. 熔点为194 2. 硫氰酸盐衍生

11、物的制备：硫氰酸盐衍生物的制备：盐酸丁卡因盐酸丁卡因 COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNHC4H9COOCH2CH2N(C2H5)2 HSCN.NH4SCNNHC4H9熔点为131 1. 在在max 处测定供试液的百分吸收系数。处测定供试液的百分吸收系数。 例如：对乙酰氨基酚在例如：对乙酰氨基酚在0.4%NaOH中于中于max =240nm;E1%1cm = 715 在在HCl(0.1mol/L)-甲醇于甲醇于max =249nm; E1%1cm = 8802. 在规定的浓度测定在规定的浓度测定max 例如：醋氨苯砜例如：醋氨苯砜5g/ml; max =256nm; 284nm 再例

12、如：盐酸普鲁卡因胺再例如：盐酸普鲁卡因胺5g/ml; max = 280nm（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查 1.1.乙醇溶液的澄清度与颜色：乙醇溶液的澄清度与颜色：因其生产工艺用铁粉作还原剂，可因其生产工艺用铁粉作还原剂，可 能带入，致使乙醇溶液产生浑浊，中间体对氨基酚易氧化产生能带入，致使乙醇溶液产生浑浊，中间体对氨基酚易氧化产生 有色化合物，在乙醇溶液中显橙红色或棕色。有色化合物，在乙醇溶液中显橙红色或棕色。 四、特殊杂质检查四、特殊杂质检查检查方法：检查方法：配制配制0.1g/ml本品乙醇溶液，溶液应澄清，无色；本品乙醇溶液，溶液应澄清，无色； 如显

13、浑浊，与如显浑浊，与1号浊度标号浊度标 准液比较，不得更浓；准液比较，不得更浓； 如显色，与棕红色如显色，与棕红色2号或橙红色号或橙红色2号号 标准液比较，标准液比较， 不得更深。不得更深。2. 有关物质检查：有关物质检查：Ch.P是以对氯苯乙酰胺为对照品，是以对氯苯乙酰胺为对照品， 采用采用TLC 法法 中的杂质对照品法中的杂质对照品法。3. 对氨基酚检查：对氨基酚检查：利用对氨基酚在碱性条件下可与利用对氨基酚在碱性条件下可与 亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化 合物，采用比色法。合物，采用比色法。为什么要检查？为什么要检查？H2NH2NCOOH-CO2O =OO黄色怎

14、样检查？怎样检查？采用采用TLCTLC法中的法中的杂质对照品法进行检查。杂质对照品法进行检查。（一）亚硝酸钠滴定法（一）亚硝酸钠滴定法 Ar-NHAr-NH2 2; ; ArAr-NHCOR; Ar-NO-NHCOR; Ar-NO2 2均可采用此法均可采用此法 Ch.PCh.P中的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡中的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺及其制剂可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水因胺及其制剂可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水解后用本法。解后用本法。五、含量测定五、含量测定NHCOR + H2ONH2 + RCOOHH+NO2 + 6HNH2 + 2H2O1. 原理原理：Ar-

15、NHCOR + H2OAr-NH2 + RCOOHH +Ar-NH2 + NaNO2 + 2HClAr-N2+Cl- + NaCl + 2H2O2. 测定主要条件：(1) 加加KBr增加反应速度增加反应速度重氮化的反应历程为：重氮化的反应历程为：NaNO2 + HClHNO2 + NaClHNO2 + HClNOCl + H2OKHClNN+Cl-快N N OH快NNOH慢NO+Cl-NH2KBr + HClHBr + KClHNO2 + HBrNOBr + H2OKKBr KHBr 比比KHCl大大300倍倍生成生成NOBr量大得多量大得多加快反应速度加快反应速度 (2) 加过量加过量HCl

16、加速反应：加速反应： 重氮化速度加快；重氮化速度加快； 重氮盐在酸性介质中稳定；重氮盐在酸性介质中稳定； 防止生成氨基偶氮化合物。防止生成氨基偶氮化合物。 Ar-N2+Cl- + H2N-Ar Ar-N=N-NH-Ar + HCl 一般摩尔比为一般摩尔比为Ar-NH2 : HCl = 1 : 2.56 。 (3) 室温条件下滴定室温条件下滴定: 温度高反应速度快；每升高温度高反应速度快；每升高10加快加快2.5倍倍太高太高,可使可使Ar-N2+Cl- + H2OAr-OH + N2 + HCl(4) 滴定管尖端插入液面下滴定滴定管尖端插入液面下滴定 3. 指示终点的方法指示终点的方法 (1)

17、永停滴定法永停滴定法 溶液溶液 检流计检流计 终点前：终点前： 无过量无过量 无电流无电流 HNO2 终点时：终点时：有过量有过量 有电流（使指针偏离零有电流（使指针偏离零 HNO2 永停在某一位置）永停在某一位置） (2) 外指示剂法外指示剂法 用用KI-淀粉指示剂淀粉指示剂 指示终点的原理：指示终点的原理： 2NaNO2 + 2KI + 4HCl 2NO + I2 + 2KCl + 2NaCl + 2H2OGVVR1R2+V 基于盐酸丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因基于盐酸丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因 侧链叔胺氮具有弱碱性，用冰醋酸溶解。盐酸丁卡因侧链叔胺氮具有弱碱性，用冰醋酸溶解

18、。盐酸丁卡因在冰醋酸中碱性仍较弱，可加醋酐可增加其碱性。因在冰醋酸中碱性仍较弱，可加醋酐可增加其碱性。因醋酐合乙酰氧离子比醋酸和质子的酸性强，可增加碱醋酐合乙酰氧离子比醋酸和质子的酸性强，可增加碱性。采用高氯酸滴定液进行滴定。性。采用高氯酸滴定液进行滴定。2(CH3CO)2O(CH3CO)3O+ + CH3COO-相当于相当于 BHCl + Hg(Ac)2BHAc + HgCl2BHAc + HClO4BHClO4 + HAc 1. 对乙酰氨基酚原料的含量测定对乙酰氨基酚原料的含量测定 在在0.4%NaOH介质中；介质中；257nm D%E1%1cm样样 E1%1cm标标100 ；E1%1cm

19、715 2. 对乙酰氨基酚片溶出度测定对乙酰氨基酚片溶出度测定 （测定条件同上）（测定条件同上） 1片稀片稀HCl 24ml + H2O 1000ml 精密量精密量 取取5ml + 0.4%NaOH10ml + H2O 100ml 257nm测定测定A。 W110005100100C （g/100ml) W(g) = 200 C; C = A/715 溶出度溶出度W标示量标示量10080为合格为合格（三）分光光度法（三）分光光度法中性条件下的重氮化反应中性条件下的重氮化反应（四）比色法（四）比色法盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 +1,2- +1,2-蒽醌蒽醌-4-4-磺酸钠磺酸钠pH4-9棕红色化合

20、物，棕红色化合物， max482nm处测定处测定A AOOSO3NaNH2COOCH2CH2N(C2H5)2OONH(C2H5)2NCH2CH2OOC+棕 红 色 ，在 300 和 482nm 处 有 最 大 吸 收ex400nm（激发波长）、激发波长）、em485nm（发射波长）处测发射波长）处测定荧光强度，标准曲线法定量。定荧光强度，标准曲线法定量。盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺 + + 荧胺荧胺pH7.5荧光物荧光物 此法主要用于盐酸普鲁卡因注射液的测定。因该注射液中此法主要用于盐酸普鲁卡因注射液的测定。因该注射液中 常含有降解产物对氨基苯甲酸；可以苯甲酸为内标同时测定两常含有降解产物对氨

21、基苯甲酸；可以苯甲酸为内标同时测定两 者的含量，该法简单准确。者的含量，该法简单准确。 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为BondapakC18 300mm4mm 流动相为甲醇流动相为甲醇1HAc(40:60); UV检测器检测器250nm. （六）（六）HPLC法法一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物（一）基本结构与典型药物R1CH CH NH R2OH R3*常见的苯乙胺类药物常见的苯乙胺类药物HOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHOHOCH

22、OHCH2NHCH3 HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2 HClHO盐酸异丙肾上腺素 （二）（二）主要化学性质主要化学性质 1.1.弱碱性弱碱性 本类药物结构中有烃氨基侧链，为仲胺氮本类药物结构中有烃氨基侧链，为仲胺氮 显弱碱性。显弱碱性。 2.2.酚羟基特性酚羟基特性 本类药物结构中有酚羟基，可与本类药物结构中有酚羟基，可与 FeCl FeCl3 3; ;发生氧化。发生氧化。 3.3.光学活性光学活性 多数药物结构中有手性碳原子，具有旋多数药物结构中有手性碳原子，具有旋 光性。光性。 (一一)与三氯化铁反应与三氯化铁反应Ar-OHFeCl3络合显色络合显色 碱液碱液

23、颜色变化颜色变化( (二）甲醛硫酸反应二）甲醛硫酸反应 在此试剂中形成醌式结构在此试剂中形成醌式结构而显色。而显色。 药药 物物 三氯化铁三氯化铁 甲醛硫酸甲醛硫酸 肾上腺素肾上腺素 0.1 0.1mol/mol/LHClLHCl显绿色显绿色, ,甲氨试液显红紫红甲氨试液显红紫红 红色红色 重酒石酸去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素 绿色绿色, ,加加NaNa2 2COCO3 3试液显紫色红色试液显紫色红色 淡红色淡红色 盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素 紫色紫色 玫瑰红橙红棕红玫瑰红橙红棕红 盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素 深绿色深绿色, ,加加5 5NaNa2 2COCO3 3试液显蓝紫色

24、红色试液显蓝紫色红色 棕色暗紫色棕色暗紫色( (三）氧化反应三）氧化反应 本类药物具有本类药物具有Ar-OH，易被氧化剂易被氧化剂I2, H2O2, K3Fe(CN)6氧化而显色，氧化而显色，例如：肾上腺素在中性或酸性条件下，被例如：肾上腺素在中性或酸性条件下，被I2, H2O2 氧化后，生成肾上腺素红；氧化后，生成肾上腺素红； 盐酸异丙肾上腺素在酸性条件下，被盐酸异丙肾上腺素在酸性条件下，被I2氧氧 化，生成异丙肾上腺素红。化，生成异丙肾上腺素红。( (四）紫外特征吸收与红外吸收光谱四）紫外特征吸收与红外吸收光谱例如：例如： 盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素 0.05mg/ml max =

25、280nm A =0.50 这一类药物均可采用红外吸收光谱进行鉴别这一类药物均可采用红外吸收光谱进行鉴别( (五）与亚硝基铁氰化钠五）与亚硝基铁氰化钠 ( (RiminiRimini试验）试验） 是鉴别脂肪伯氨基的特殊反应；可用于重酒石是鉴别脂肪伯氨基的特殊反应；可用于重酒石酸间羟胺鉴别。酸间羟胺鉴别。D D 亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠 丙酮丙酮 NaNa2 2COCO3 3红紫色红紫色( (六六) ) 双缩脲反应双缩脲反应 是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱鉴别：碱，盐酸伪麻黄碱鉴别：D D CuSO CuSO4 4 + +

26、 NaOHNaOH显显蓝紫色蓝紫色乙醚，醚层乙醚，醚层( (紫红色紫红色) )水层水层( (蓝色蓝色) ) ( (一一) ) 酮体检查酮体检查 本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得，若氢本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得，若氢化不完全，易引入酮体杂质。化不完全，易引入酮体杂质。 采用采用UVUV法检查：法检查： 利用酮体在利用酮体在310310nmnm有吸收，本类药物无吸收。有吸收，本类药物无吸收。 例如：肾上腺素本项检查例如：肾上腺素本项检查 配配2.02.0mg/ml =310nm A0.05mg/ml =310nm A0.05 盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素 配配2.02.0mg

27、/ml =310nm Amg/ml =310nm A0.020.02 盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素 配配2.02.0mg/ml =310nm Amg/ml =310nm A0.150.15 三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查( (二二) ) 有关物质的检查有关物质的检查 盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇TLCTLC 盐酸苯乙双胍盐酸苯乙双胍-PC-PC 盐酸氨溴索盐酸氨溴索HPLCHPLC采用采用TLCTLC法中的高低浓度对比法进行检查。法中的高低浓度对比法进行检查。 盐酸氨溴索的检查方法盐酸氨溴索的检查方法对照样品制备：本品对照样品制备：本品供试品溶液供试品溶液

28、对照溶液对照溶液(1/100)供试样品制备：本品供试样品制备：本品甲醇溶解甲醇溶解加甲醛溶液加甲醛溶液加热加热吹干溶剂吹干溶剂用水和流动相溶解用水和流动相溶解HPLC分析分析色谱条件：色谱条件：RP-HPLC 0.01mol/lNH4H2PO4-CH3CN (50:50); 248 nm分析：对照溶液主成分峰为满量程的分析：对照溶液主成分峰为满量程的2025%，记，记录至主成分峰保留时间的录至主成分峰保留时间的2倍，注入供试品溶液，如倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之一。的三分之一。( (三三) ) 盐酸苯

29、乙双胍中有关双胍的检查盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查PCPC法法样品制备：本品甲醇溶解即得样品制备：本品甲醇溶解即得展开：展开：7.550 cm，EtOAc-ethanol-water (6:3:1)显色：显色：10铁氰化钾铁氰化钾10亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠10NaOH检测：剪下显色斑点后甲醇萃取用检测：剪下显色斑点后甲醇萃取用UV法测定法测定 ( (一一) ) 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 本类药物的原料药多采用此法。本类药物的原料药多采用此法。 1. 1. 重酒石酸去甲肾上腺素的测定重酒石酸去甲肾上腺素的测定 相当于相当于B B的有机酸盐可直接滴定。的有机酸盐可直接滴定。 2.2.盐酸

30、克仑特罗的测定盐酸克仑特罗的测定 相当于相当于B B的的HXHX酸盐不能直接滴定，需加酸盐不能直接滴定，需加Hg(Ac)Hg(Ac)2 2处理后滴定处理后滴定。 3.3.硫酸沙丁醇的测定硫酸沙丁醇的测定 相当于相当于B B的的H H2 2SOSO4 4盐可直接滴定盐可直接滴定, , 也可处理后滴定。也可处理后滴定。四、含量测定四、含量测定( (二二) ) 溴量法溴量法 本类药物重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及本类药物重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及其注射液用此法。其注射液用此法。基本原理：基本原理：HOOHCH-CH2NHCH3 + Br2HOOHCH-CH2NHCH3 + 3HBrBrB

31、rBr Br2 + 2KI 2KBr + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6基本操作：供试品基本操作：供试品精密称定精密称定加水溶解后精加水溶解后精密加密加溴滴定液溴滴定液盐酸盐酸放置并振摇放置并振摇加碘化钾加碘化钾振摇振摇用用Na2S2O3滴定滴定至近终点至近终点加淀粉指加淀粉指示液示液继续滴定至蓝色消失继续滴定至蓝色消失同时进行同时进行空白实验空白实验（三）提取酸碱滴定法（三）提取酸碱滴定法 基本原理：药物的盐酸盐或硫酸盐易溶于水，基本原理：药物的盐酸盐或硫酸盐易溶于水，而药物本身不溶于水，加适量碱化试剂后，用适而药物本身不溶于水，加适量碱化试剂后，用适当的有机

32、溶剂萃取，提取也蒸干后用中性乙醇溶当的有机溶剂萃取，提取也蒸干后用中性乙醇溶解，用标准酸液直接滴定，或加入滴定过量的标解，用标准酸液直接滴定，或加入滴定过量的标准酸溶液，用标准碱溶液进行回滴。准酸溶液，用标准碱溶液进行回滴。硫酸苯丙胺的含量测定：硫酸苯丙胺的含量测定：BH2SO4 + NaOH + NaCl乙醚乙醚提取提取B+ H2SO4蒸去乙醚蒸去乙醚NaOHNaOH标准液滴定标准液滴定终点终点( (四四) ) 紫外分光光度法与比色法紫外分光光度法与比色法 利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化偶利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化偶合反应，以及分子结构中的合反应，以及分子结构中的ArAr

33、-OH-OH与与FeFe3 3络合显色，络合显色，进行比色测定。进行比色测定。 盐酸异丙肾上腺素注射液盐酸异丙肾上腺素注射液 重酒石酸间羟胺注射液重酒石酸间羟胺注射液 盐酸甲氧明注射液盐酸甲氧明注射液 硫酸沙丁胺醇注射液及胶囊硫酸沙丁胺醇注射液及胶囊ClN2+Cl -CH(OH)CH2NHC(CH3)3ClClCH(OH)CH2NHC(CH3)3ClNHCH2CH2NH2+N=NNHCH2CH2NH2N-(1-萘基）乙二胺500nm比色测定例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定 上述偶合剂可与上述偶合剂可与HNOHNO2 2显色，干扰比色测定，可先加氨基显色，干扰比色测定

34、，可先加氨基磺酸铵分解过量的磺酸铵分解过量的HNOHNO2 2。HNOHNO2 22H2H2 2NSONSO3 3NHNH4 42N2N2 2 + (NH + (NH4 4) )2 2SOSO4 4 + H + H2 2SOSO4 4 +H +H2 2O O(五五) 荧光分光光度法荧光分光光度法肾上腺素测定肾上腺素测定：ex410nm、em520nm处测定荧光强度，处测定荧光强度，对照法定量。对照法定量。肾上腺素肾上腺素 + +I I2 2 肾上腺红肾上腺红一定条件下一定条件下N-N-甲基甲基-3,5,6-3,5,6-三羟基吲哚三羟基吲哚(六六) HPLC法法 例一、例一、重酒石酸去甲肾上腺素

35、注射液的测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液的测定 采用采用RPIP-HPLC-UV法；用外标一点法进行定量测法；用外标一点法进行定量测 定。定。 例二、例二、血浆中儿茶酚胺类（肾上腺素类）药物的测定血浆中儿茶酚胺类（肾上腺素类）药物的测定 采用采用RPIP-HPLC-ECD 法；用标准曲线法进行定量法；用标准曲线法进行定量 测定。测定。 (七七) 衍生化衍生化GC法法 （GC-FID 以盐酸美西律作内标物以盐酸美西律作内标物) 应用示例：应用示例：盐酸芬氟拉明片的含量测定盐酸芬氟拉明片的含量测定 盐酸芬氟拉明三氟乙酰肝盐酸芬氟拉明三氟乙酰肝 衍生物衍生物基本结构与主要性质基本结构与主要性质R1NH

36、R2ACE抑制剂抑制剂NHCH3NOOCOOHOOOHHO马来酸依那普利马来酸依那普利NHOONOCOOHHCL盐酸贝那普利盐酸贝那普利中国药典收载的代表药物中国药典收载的代表药物NHOONNOHOOC西那普利西那普利NHOHOH2NONCOOH赖诺普利赖诺普利主要性质主要性质1、酸碱性：、酸碱性：分子中含有分子中含有-COOH，显酸性；含有烃氨，显酸性；含有烃氨链，显弱碱性链，显弱碱性2、氨基酸特性、氨基酸特性：结构是脯氨酸的衍生物：结构是脯氨酸的衍生物3、光学活性：、光学活性：分子中含有不对称中心，具有旋光性分子中含有不对称中心，具有旋光性4、水解特性：、水解特性：本类药物大多是本类药物大

37、多是Pre-drug，在体内转，在体内转化为活性代谢物化为活性代谢物二、鉴别试验二、鉴别试验一、物理与化学鉴别法一、物理与化学鉴别法1、熔点测定法、熔点测定法BP(马来酸依那普利）马来酸依那普利）2、高锰酸钾反应、高锰酸钾反应红色消失（氧化还原反应）红色消失（氧化还原反应）3、溴间苯二酚反应：先进行溴代反应，、溴间苯二酚反应：先进行溴代反应，使溴颜使溴颜色消失色消失，再与间苯二酚反应，再与间苯二酚反应，显棕红色显棕红色4、羟胺三氯化铁反应：先进行羟胺的生成（羟、羟胺三氯化铁反应：先进行羟胺的生成（羟胺甲醇液胺甲醇液KOH乙醇液）乙醇液）FeCl3 显棕红色显棕红色二、旋光法二、旋光法三、光谱与

38、色谱法鉴别三、光谱与色谱法鉴别三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查1、马赖酸依那普利有关物质的检查：、马赖酸依那普利有关物质的检查：依那普依那普利拉依那普利双酮利拉依那普利双酮采用采用HPLC法检查法检查2、西那普利中有关物质的检查：、西那普利中有关物质的检查：A、B、C、D四个主要杂质四个主要杂质杂质杂质A-TLC法检查（硅胶法检查（硅胶G板，目视比较），板，目视比较），不得超过不得超过0.1BP杂质杂质B、C、D及其它杂质及其它杂质HPLC法，分别不法，分别不得超过得超过0.5、0.1、0.2和和0.1BPTLC法检查法检查A杂质杂质制备样品液：供试品溶液（制备样品液：供试品溶液（40 m

39、g/ml）、对照品溶液）、对照品溶液a（40 g/ml)、对照溶液、对照溶液b（0.5 mg/ml）点样与展开：硅胶点样与展开：硅胶G板，板，HAc-H2O-n-Hex-MeOH-EtOAc (1: 1: 3: 3: 12)显色：显色：KBiI4-HAc (1: 10)比较：比较：供试品如显杂质供试品如显杂质A斑点，颜色斑点，颜色对照液对照液a的主斑点。的主斑点。要要求对照液求对照液b显示两个清晰分开的斑点时，结果有效。显示两个清晰分开的斑点时，结果有效。HPLC法检查法检查B、C、D和其它杂质和其它杂质样品测定液配制：样品测定液配制：供试品溶液（供试品溶液（0.5 mg/ml)、对照溶液、对

40、照溶液a (2.5 g/ml）、对照溶液）、对照溶液b（杂质（杂质D对照品对照品0.5 mg/ml）色谱条件：色谱条件：ODS 色谱柱，四氢呋喃三乙胺为流动相，流色谱柱，四氢呋喃三乙胺为流动相，流速速1.0ml/min，检测波长：，检测波长：214nm色谱系统适用性：色谱系统适用性：分别进样对照溶液分别进样对照溶液a和和b，使对照溶液，使对照溶液a的的主成分峰为满量程的主成分峰为满量程的50，在对照溶液，在对照溶液b中西那普利与杂质中西那普利与杂质D的分离度不得低于的分离度不得低于2.5。测定与评判：测定与评判：1、色谱图记录至峰、色谱图记录至峰A被洗脱为止被洗脱为止2、杂质、杂质B、C、D与

41、西那普利的相对保留时间分与西那普利的相对保留时间分别为别为0.6、1.6、0.93、峰面积、峰面积杂质杂质B0.50.5（对照液（对照液a a的主峰面积）的主峰面积） 峰面积峰面积杂质杂质C0.1（对照液（对照液a的主峰面积）的主峰面积） 峰面积峰面积杂质杂质D0.2（对照液（对照液a的主峰面积）的主峰面积） 峰面积峰面积其它其它0.1（对照液（对照液a的主峰面积）的主峰面积）（三）残留溶剂的测定（三）残留溶剂的测定马来酸依那普利中残留溶剂乙腈的检查马来酸依那普利中残留溶剂乙腈的检查 capillary GC法法0.0410.041样品溶液的制备：本品加二甲基甲酰胺溶解样品溶液的制备：本品加二

42、甲基甲酰胺溶解100mg/ml对照溶液的制备：取乙腈加二甲基甲酰胺溶解对照溶液的制备：取乙腈加二甲基甲酰胺溶解40g/ml分析方法：分析方法：PEG-20M为固定液的毛细管柱，为固定液的毛细管柱，FID检测器，检测器，程序升温洗脱：程序升温洗脱：min)5(200min/1060min260CCCCInjection tem.: 200,detector tem.:250,injection volume: 1l四、含量测定四、含量测定一、酸碱滴定法：利用本类药物结构中的一、酸碱滴定法：利用本类药物结构中的-COOH和和氮原子氨基，可进行酸碱滴定法进行含量分析氮原子氨基，可进行酸碱滴定法进行含

43、量分析1、非水滴定法、非水滴定法 马来酸依那普利非水碱量法滴定，以冰醋酸和无马来酸依那普利非水碱量法滴定，以冰醋酸和无水二氧六环为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸为滴定水二氧六环为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸为滴定液液2、水溶液中的滴定、水溶液中的滴定马来酸依那普利：供试品马来酸依那普利：供试品新沸过的冷水溶解新沸过的冷水溶解NaOH滴定滴定电位法指示终点电位法指示终点3、在醇水混合溶液中滴定、在醇水混合溶液中滴定 供试品供试品甲醇和水溶解后进行碱液滴定（雷米普利甲醇和水溶解后进行碱液滴定（雷米普利和西拉普利）和西拉普利）二、二、HPLC法法举例说明：马来酸依那普利片的含量测定举例说明：马来酸依那

44、普利片的含量测定色谱条件：色谱条件：C8柱，乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，柱，乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，检测波长检测波长215 nm，柱温，柱温50色谱系统适用性：色谱系统适用性：n300，T2.0,主峰与其它杂质主峰与其它杂质峰的峰的R4.0进样与计算：进样与计算：20 l，外标法定量，外标法定量盐酸喹那普利的含量测定盐酸喹那普利的含量测定色谱条件：色谱条件：CN柱柱guard column (3 cm 4.6 mm, 5 m)，乙腈水甲磺酸为流动相，流速，乙腈水甲磺酸为流动相，流速1.5 ml/min，检测波长，检测波长214 nm色谱系统适用性：主峰与色谱系统适用性：主峰与A的的R1.7

45、51.75，主峰与，主峰与B B的的R3.5R3.5，n550n550，RSD2.0% (n=5)RSD2.0% (n=5) A A型题型题 1 1盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是A.A.水杨醛水杨醛 B. B. 间氨基酚间氨基酚 C.C.水杨酸水杨酸 D.D.对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸 E. E. 氨基酚氨基酚2 2对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是A.A.水杨醛水杨醛 B. B. 间氨基酚间氨基酚 C. C. 对氨基酚对氨基酚 D.D.苯甲酸苯甲酸 E.E.苯酚苯酚3 3肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是肾上腺素和盐

46、酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是A.A.水杨醛水杨醛 B. B. 间氨基酚间氨基酚 C. C. 对氨基酚对氨基酚 D.D.酮体酮体 E. E. 苯甲酸苯甲酸B型题A A。硫酸铜反应硫酸铜反应 B.B.氧化反应氧化反应 C. C. 还原反应还原反应 D.D.水解后重氮化水解后重氮化- -偶合反应偶合反应 E. E. 重氮化重氮化- -偶合反应偶合反应 1. 1. 盐酸利多卡因盐酸利多卡因 2. 2. 肾上腺素肾上腺素 3. 3. 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 4 4对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚ABED A。溴量法 B. 紫外分光光度法 C. 亚硝酸钠滴定法 D. RP-HPLC法 E. 非水滴定法 5.

47、 盐酸去氧肾上腺素 6. 肾上腺素注射液 7. 盐酸普鲁卡因 8对乙酰氨基酚ADCBX型题 1. 1. 直接能与直接能与FeClFeCl3 3产生颜色反应的药物有产生颜色反应的药物有A A。盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 B. B. 盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素 C. C. 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 D. D. 盐酸利多卡因盐酸利多卡因 E. E. 盐酸丁卡因盐酸丁卡因 2. 2. 直接和水解后能发生重氮化直接和水解后能发生重氮化- -偶合反应的药物有偶合反应的药物有A A。盐酸丁卡因盐酸丁卡因 B. B. 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 C. C. 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 D. D. 对氨基酚对氨基酚 E. E. 盐酸肾上腺素盐酸肾上腺素