粪大肠菌群的测定演示文稿(精)课件.ppt

1、职业教育环境监测与治理技术专业教学资源库职业教育环境监测与治理技术专业教学资源库测定方法和原理 1试剂和仪器2测定过程3 3结果计算4 4任务任务7 7 粪大肠菌群的测定粪大肠菌群的测定1.1 方法名称与适用范围方法名称与适用范围l水质水质 粪大肠菌群的测定粪大肠菌群的测定多管发酵法多管发酵法 lHJ/T 347-2007方方 法法名名 称称l适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定适适 用用范范 围围1.2 方法原理方法原理 粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，在44.5温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠

2、菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。 多管发酵法是以（most probable number），简称MPN来表示试验结果的。实际上它是根据，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。测定方法和原理 1试剂和仪器2测定过程3 3结果计算4 4任务任务7 7 粪大肠菌群的测定粪大肠菌群的测定 2.1 培养基和试剂培养基和试剂(1)单倍乳糖蛋白胨培养基单倍乳糖蛋白胨培养基l成分：成分： 蛋白胨蛋白胨 10g 牛肉膏牛肉膏 3g 乳乳 糖糖 5g 氯化钠氯化钠 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 蒸馏水蒸馏水 10

3、00mLl制法：制法： 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中，蒸馏水中，调节调节pH 为为7.27.4，再加入，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115灭菌灭菌20min，贮存于暗处备用。，贮存于暗处备用。 (2)三倍乳糖蛋白胨培养基三倍乳糖蛋白胨培养基l按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，

4、制法同上。养液，制法同上。本试验测定所使用的培养基为配制的乳糖蛋白胨培养基，也可使用成品本试验测定所使用的培养基为配制的乳糖蛋白胨培养基，也可使用成品的大肠菌群发酵培养基，如：乳糖胆盐发酵培养基，等。的大肠菌群发酵培养基，如：乳糖胆盐发酵培养基，等。 (3)EC 培养液培养液l成分：成分： 胰胨胰胨 20g 乳糖乳糖 5g 胆盐三号胆盐三号 1.5g 磷酸氢二钾（磷酸氢二钾（K2HPO4） 4g 磷酸二氢钾（磷酸二氢钾（KH2PO4） 1.5g 氯化钠氯化钠 5g 蒸馏水蒸馏水 1000mLl制法：制法： 将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高将上述成分加热溶解，然后分装于含

5、有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，压蒸汽灭菌器中，115灭菌灭菌20min。灭菌后。灭菌后pH 应为应为6.9。高压灭菌锅高压灭菌锅生化培养箱生化培养箱2.2 仪器和设备仪器和设备 测定方法和原理 1试剂和仪器2测定过程3 3结果计算4 4任务任务7 7 粪大肠菌群的测定粪大肠菌群的测定3.1 培养基培养基制备及灭菌制备及灭菌（1）水样接种量的确定）水样接种量的确定 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用接种。同一接种水样量要有。 相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL 或0.1

6、mL、0.01mL、0.001mL 等。使用的水样量可参考下表1。 表表1 1 接种水量参考表接种水量参考表 由于本次测定的是污水处理厂的出水水样，所以选取的由于本次测定的是污水处理厂的出水水样，所以选取的浓度梯度为浓度梯度为1010-3-3、1010-4-4、1010-5-5。（2 2） 乳糖蛋白胨培养基分装乳糖蛋白胨培养基分装杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管10 mL 3倍倍10 mL 1倍倍10 mL 1倍倍10 mL 1倍倍 如接种体积为如接种体积为10mL10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液培养液5mL5m

7、L；如接种量为；如接种量为1mL1mL或少于或少于1mL1mL，则可接种于普通浓度的，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液乳糖蛋白胨培养液10mL10mL中。中。（3 3） 准备其他要灭菌的物品准备其他要灭菌的物品（4 4） 灭菌灭菌:115 :115 O OC C，20 min20 min水源水源水水90 ml无菌水无菌水9 ml无菌水无菌水移液管移液管3.2 水样水样制备及稀释制备及稀释1 mL10 mL90 mL无菌水无菌水9 mL无菌水无菌水原液原液10-110-21 mL1 mL9 mL无菌水无菌水10-39 mL无菌水无菌水10-49 mL无菌水无菌水10-51 mL10-5杜氏小

8、管杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管10ml 3倍倍10 ml 1倍倍10 ml 1倍倍1 ml1 ml培养条件：培养条件：37、24h3.3 粪大肠菌群的初发酵粪大肠菌群的初发酵10-41 ml10-3生化培养箱生化培养箱1.1.培养基变为黄色，杜氏管中有气泡（阳性）培养基变为黄色，杜氏管中有气泡（阳性）2.2.培养基仍为紫色，杜氏管中没有气泡（阴性）培养基仍为紫色，杜氏管中没有气泡（阴性）3.4 观察粪大肠菌群的初发酵结果观察粪大肠菌群的初发酵结果 轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用接种环将培养物转接到EC培养液中。 在44.50.5下培养24h2h。培养后立即观察，发酵管产气则

9、证实为菌群阳性。3.5 粪大肠菌群的复发酵试验粪大肠菌群的复发酵试验测定方法和原理 1试剂和仪器2测定过程3 3结果计算4 4任务任务7 7 粪大肠菌群的测定粪大肠菌群的测定 根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表3 中查得每升水样中的粪大肠菌群。 接种5份10mL 水样、5 份1mL 水样、5 份0.1mL 水样时，查表3 求得MPN 指数，MPN 值再乘10，即为1L水样中的粪大肠菌群。如果接种的水样不是10mL、1mL 和0.1mL，而是较低的或较高的三个浓度的水样量，也可查表3 求得MPN 指数，再经下式计算成每100mL 的MPN 值。4.1 粪大肠菌群测定的结果分析与报告粪大肠菌群测定的结果分析与报告）接种量最大的一管（）（指数值LLMPNMPNmm10 表表3 3 最可能（最可能（MPNMPN）表表作作 业业1. 为什么说提高温度培养出的大肠菌群更能代表水质受粪为什么说提高温度培养出的大肠菌群更能代表水质受粪便污染的情况？便污染的情况？2. 根据试验情况，报告每升水中含粪大肠菌群的数目。根据试验情况，报告每升水中含粪大肠菌群的数目。谢 谢 ！谢 谢 ！