植物组培实验室设置条件及器具(精)课件.ppt

1、 植物组培实验室设置条件及器具植物组培实验室设置条件及器具一、实验室组成二、基本设备三、培养器皿及实验用具四、无菌条件及创设五、无菌操作 六、组培的环境条件和营 养条件 组织培养实验室布局的总体要求组织培养实验室布局的总体要求 便于隔离便于隔离 便于操作便于操作 便于灭菌便于灭菌 便于观察便于观察一、实验室组成一、实验室组成基本实验室基本实验室辅助实验室辅助实验室实验室实验室组成组成准备室准备室缓冲室缓冲室无菌操作室无菌操作室培养室培养室细胞生物学实验室细胞生物学实验室温温 室室生化分析实验室生化分析实验室基本实验室布局平面图实验台搁架培养架培养架培养架培养架药品及仪器柜无菌台无菌台搁架拉窗冰

2、箱搁 架水槽电炉门4.5m3.0m3.5m4.0m准备室准备室缓冲室缓冲室无菌室无菌室培养室培养室组织培养准备实验室缓冲室培养室无菌室（一）无菌室（二）二、仪器与设备二、仪器与设备1、基本设备、基本设备 冰箱、电炉、酸度计、纯水器、冰箱、电炉、酸度计、纯水器、天平、培养基分装器、搅拌器等。天平、培养基分装器、搅拌器等。冰箱酸度计电炉天平纯水器培养基分装器搅拌器2、灭菌设备、灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。蒸汽压力灭菌锅蒸汽压力灭菌锅干热消毒柜干热消毒柜无菌瓶顶过滤装置无菌瓶顶过滤装置喷雾消毒器

3、喷雾消毒器（参考图）（参考图）3、无菌操作设备、无菌操作设备 超净工作台超净工作台无菌接种箱无菌接种箱4、细胞培养设备、细胞培养设备 摇 床培养架培养架HZC-250恒温振荡培养箱 150C 250D 光照培养箱光照培养箱 5、细胞学鉴定设备、细胞学鉴定设备 光学研究显微光学研究显微镜、实体显微镜、倒镜、实体显微镜、倒置显微镜置显微镜倒置显微镜倒置显微镜光学显微镜光学显微镜1、玻璃器皿、玻璃器皿三、培养器皿及实验用具三、培养器皿及实验用具培养皿培养皿三角瓶三角瓶培养瓶培养瓶2、金属材质用具、金属材质用具镊子镊子 解剖刀解剖刀接种针接种针无菌条件物理方法： 物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌

4、、过滤、离心、沉淀等化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌1 1、灭菌方法、灭菌方法2 2、灭菌、灭菌（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.810410.8104Pa 温度在121 灭菌2030min（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌（3）塑料器皿灭菌：塑料器皿灭菌： 多采用多采用高压蒸汽消毒灭菌高压蒸汽消毒灭菌（4）金属用具灭菌：）金属用具灭菌：灼烧灭菌灼烧灭菌 浸入浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用用（5）接种室灭菌）接种室灭菌空气消空气消毒灭菌毒灭菌接种室接种室超净工超净工作台作台紫外灯紫外灯照射照射70%75%的酒精擦

5、洗的酒精擦洗培养材料培养材料的接种的接种紫外灯紫外灯照射照射（6）外植体灭菌）外植体灭菌流水冲洗流水冲洗1020min或更长时间或更长时间70%75%酒精中浸泡酒精中浸泡30s0.1%0.2%氯化汞氯化汞液中浸泡液中浸泡10min左右左右蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗45次次在在10%的次氯酸钠、的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡饱和漂白粉浸泡30min左右左右备用备用六、无菌操作实验员消毒实验室、无菌台灭菌实验器材的灭菌无菌接种消 毒实验台卫生培养室培养1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。3、开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面和四

6、周的台壁。4、用70%75%的酒精擦拭工作台和双手。5、用沾有70%75%酒精的纱布擦拭盛培养基的培养器皿，放进工作台。6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。9、取下接种器械，在火焰上消毒。10、把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。11、接种结束后，清理和关闭超净工作台。注意：操作期间应经常用70%75%的酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95%的酒精中浸泡和在火焰上消毒。温度光照湿度气体培养基的渗透压pH值植物材料一般最适温度在252之间环境条件最常用的

7、光周期是光照16h，黑暗8h 一般情况下，培养器内相对湿度应达100%，培养室内环境的相对湿度在70%80% 氧气是愈伤组织生长所必需的 调节渗透压常常从糖入手 植物组织培养时培养基的pH值大多在5.06.5第二节第二节 植物组织培养所需的环境植物组织培养所需的环境 条件条件1.大量营养元素：2.微量营养元素：3、碳源4、维生素类5、肌醇6、氨基酸7、天然复合物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物8、琼脂9、活性炭10、抗生素11、生长素类 12、细胞分裂素类13、赤霉素类和脱落酸植物组织培养的营养条件植物组织培养的营养条件因地制宜，创设实验 上述是正规的组培条件，很多学校并不具备这样的条件。但因为组培实验在课标中是应用要求，最好创设条件做一下。 比如做一个组培的实验最低要求就是要有一个灭菌锅和一个超净台，这个就能满足洁净的要求。 如果没有灭菌锅可用高压锅代替，进行细菌的灭菌； 如果没有超净台，可选择比较容易做的材料，就用胡萝卜，在外面的开放的环境下，点上两个酒精灯，最主要保证在火焰温度的范围内，温度可以保证无菌，瓶子也置于酒精灯的外焰灼烧灭菌，而胡萝卜也进行外部的消毒，用消毒的刀片割里面的韧皮部即可。