生物技术与农业转基因植物课件.ppt
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- 生物技术 农业 转基因 植物 课件
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1、第七章第七章 生物技术与农业生物技术与农业2contents7.1 7.1 转基因作物转基因作物7.2 7.2 生物农药生物农药37.1转基因作物7.1.1 7.1.1 抗植物病虫害基因及其应用抗植物病虫害基因及其应用7.1.2 7.1.2 抗非生物胁迫、改良作物品质的基因及抗非生物胁迫、改良作物品质的基因及其应用其应用7.1.3 7.1.3 改变植物其它性状的基因及植物医药基改变植物其它性状的基因及植物医药基因工程因工程7.1.4 7.1.4 植物基因工程存在的问题植物基因工程存在的问题7.1.1抗植物病虫害基因及其应用病害是农作物减产的病害是农作物减产的主要原因之一主要原因之一全世界农作物
2、产量损全世界农作物产量损失的失的1/31/3可归因于病害可归因于病害植物虫害也使全世界植物虫害也使全世界每年损失数亿美元每年损失数亿美元化学农药的使用,带来“三R”难题环境环境污染,污染,残毒残毒上升,人畜均遭毒害;上升,人畜均遭毒害;害虫抗性害虫抗性增强,用药浓度不断提高,防增强,用药浓度不断提高,防治费用不断增加,不得不无休止地研制治费用不断增加,不得不无休止地研制新农药;新农药;杀伤天敌,破坏生态平衡,引起杀伤天敌,破坏生态平衡,引起害虫再害虫再猖獗猖獗和大爆发,导致自然界中恶性循环。和大爆发,导致自然界中恶性循环。(Residue,Resistance,ResurgenceResidu
3、e,Resistance,Resurgence):):残毒、抗性、再猖獗残毒、抗性、再猖獗三大问题。三大问题。生物农药还不能取代化学农药对特定害虫的高毒性,对环境的安全性对特定害虫的高毒性,对环境的安全性抗虫谱窄,田间不稳定性抗虫谱窄,田间不稳定性目前世界农药市场上,生物农药的比重不足目前世界农药市场上,生物农药的比重不足0.5%0.5%江苏省生物农药的生产量和使用量只约占农药生产江苏省生物农药的生产量和使用量只约占农药生产总量和使用总量的总量和使用总量的0.5%0.5%和和4.8%4.8%。 http:/ 明恢明恢6363配成的各种组合累计推广面积配成的各种组合累计推广面积超过超过2020亿
4、亩,是迄今应用最广、持续应亿亩,是迄今应用最广、持续应用时间最长、效益最显著的恢复系。用时间最长、效益最显著的恢复系。19811981年,用年,用 明恢明恢6363配成配成 汕优汕优 ,解决了第一代杂交稻不抗稻瘟病的致命解决了第一代杂交稻不抗稻瘟病的致命缺陷。缺陷。植物抗病虫害基因工程育种周期短、效率高、成本低育种周期短、效率高、成本低提高产量和品质提高产量和品质降低生产成本降低生产成本减少化学农药污染,避免破坏生态平衡减少化学农药污染,避免破坏生态平衡克服亲本基因资源缺乏克服亲本基因资源缺乏抗性性状具有连续性和整体性抗性性状具有连续性和整体性抗病虫害基因来源1.1.植物植物 如豇豆胰蛋白酶抑
5、制剂(如豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTICpTI)基因。)基因。2. 2. 动物动物 如杀菌肽(如杀菌肽(cecropinscecropins)基因。)基因。3. 3. 微生物微生物 如如BtBt杀虫结晶蛋白基因。杀虫结晶蛋白基因。抗性基因分类据基因的作用功能和对象分为:据基因的作用功能和对象分为:1. 1. 抗虫基因。抗虫基因。2. 2. 抗病毒基因。抗病毒基因。3. 3. 抗真菌和细菌基因。抗真菌和细菌基因。 7.1.1.1 抗植物虫害基因常用的主要有三种:常用的主要有三种:a)a)BtBt基因基因b)b)胰蛋白酶抑制剂基因胰蛋白酶抑制剂基因c)c)植物凝集素基因植物凝集素基因a)Bt基因根据
6、杀虫谱的不同,将杀虫基因分成六大类,根据杀虫谱的不同,将杀虫基因分成六大类,统称为统称为crycry基因,用罗马数字基因,用罗马数字I I、IIII、IIIIII、IVIV等来命名,分别代表几种杀虫范围。在每一等来命名,分别代表几种杀虫范围。在每一类型下根据氨基酸序列的同源性,又分为类型下根据氨基酸序列的同源性,又分为A A,B B,C C等不同的基因型。在同一基因型下根据等不同的基因型。在同一基因型下根据限制性内切酶的酶谱和分子量的大小,又分限制性内切酶的酶谱和分子量的大小,又分为为a a,b b,c c等不同的基因亚型。等不同的基因亚型。 19871987年,世界上年,世界上4 4个研究小
7、组获得转个研究小组获得转BtBt基因植物基因植物目的基因:目的基因:CryIACryIA(b b)全长,片段;)全长,片段; CryIACryIA(a a)片段;)片段; CryIACryIA(c c)全长;)全长;转化方法:转化方法:农杆菌介导法农杆菌介导法转化植物:烟草(转化植物:烟草(3 3) 番茄(番茄(1 1)()(MonsantoMonsanto)抗虫性:烟草天蛾,番茄果螟抗虫性:烟草天蛾,番茄果螟转Bt基因植物(表一)转Bt基因植物(表二)转Bt基因植物(表三)植物抗虫基因工程的研究进展 ,东北农业大学学报,2000。b)蛋白酶抑制剂基因蛋白酶抑制剂(PI)自然界最为丰富的蛋白质
8、之一自然界最为丰富的蛋白质之一存在于绝大多数生物体尤其是许多植物的贮存在于绝大多数生物体尤其是许多植物的贮藏器官藏器官一种天然的抗虫物质一种天然的抗虫物质在植物界,现已发现近在植物界,现已发现近1010个蛋白酶抑制剂家个蛋白酶抑制剂家族族原理1.1.与昆虫消化道内的蛋白消化酶相结合,形成酶抑与昆虫消化道内的蛋白消化酶相结合,形成酶抑制剂复合物(制剂复合物(EIEI),从而),从而阻断或减弱昆虫蛋白酶阻断或减弱昆虫蛋白酶对于外源蛋白质的水解作用,导致蛋白质不能被对于外源蛋白质的水解作用,导致蛋白质不能被正常消化正常消化2.2.同时同时EIEI复合物能刺激昆虫过量分泌消化酶,导致复合物能刺激昆虫过
9、量分泌消化酶,导致昆虫产生厌食反应。最终,昆虫缺乏生活一些必昆虫产生厌食反应。最终,昆虫缺乏生活一些必需的氨基酸,而发育不正常或死亡。需的氨基酸,而发育不正常或死亡。3.3.蛋白酶抑制剂分子可能通过消化道进入昆虫的血蛋白酶抑制剂分子可能通过消化道进入昆虫的血淋巴系统,从而严重干扰昆虫的蜕皮过程和兔疫淋巴系统,从而严重干扰昆虫的蜕皮过程和兔疫功能,以致昆虫不能正常发育。功能,以致昆虫不能正常发育。PI的作用特点作用于蛋白消化酶的活性中心。作用于蛋白消化酶的活性中心。活性中心是酶最保守的部位,产生突变的可能性活性中心是酶最保守的部位,产生突变的可能性极小,故可以排除害虫通过突变产生抗性的可能极小,
10、故可以排除害虫通过突变产生抗性的可能性。性。PIPI对于人、畜无害。对于人、畜无害。人、畜的蛋白消化酶主要存人、畜的蛋白消化酶主要存在于肠道中,而在于肠道中,而PIPI在胃中的酸性条件下,被胃蛋在胃中的酸性条件下,被胃蛋白酶分解。白酶分解。PI的分类植物中存在三类:植物中存在三类: (1 1)丝氨酸蛋白酶抑制剂)丝氨酸蛋白酶抑制剂 (2 2)巯基蛋白酶抑制剂)巯基蛋白酶抑制剂 (3 3)金属蛋白酶抑制剂)金属蛋白酶抑制剂 与抗虫基因工程关系最密切、研究最深入的是丝氨酸蛋白酶抑制剂,与抗虫基因工程关系最密切、研究最深入的是丝氨酸蛋白酶抑制剂,其中最主要的是胰蛋白酶抑制剂。其中最主要的是胰蛋白酶抑
11、制剂。绝大多数昆虫所利用的正是这一类消化酶,而植物细胞基本没有这种绝大多数昆虫所利用的正是这一类消化酶,而植物细胞基本没有这种酶,或含量甚微。酶,或含量甚微。豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTICpTI基因)、基因)、马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因(马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因(PTIPTI基因)、基因)、玉米半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(玉米半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(CPICPI基因)基因)以及大豆胰蛋白酶抑制剂基因(以及大豆胰蛋白酶抑制剂基因(SKTISKTI基因)基因)等。等。豇豆胰蛋白酶抑制剂CpTI抗虫效果较为理想,其抗虫范围广抗虫效果较为理想,其抗虫范围广对鳞翅目、鞘翅目、直
12、翅目等几乎所有昆对鳞翅目、鞘翅目、直翅目等几乎所有昆虫都有杀伤作用虫都有杀伤作用目前已应用于抗虫烟草、水稻、大豆,但目前已应用于抗虫烟草、水稻、大豆,但由于其表达能力不够强,应用暂时受到限由于其表达能力不够强,应用暂时受到限制。制。转蛋白酶抑制剂基因植物c)植物凝集素(lectin)基因非免疫来源的糖蛋白或结合糖的蛋白质非免疫来源的糖蛋白或结合糖的蛋白质(sugar-(sugar-binding protein)binding protein)能聚集细胞和(或)沉淀糖蛋白能聚集细胞和(或)沉淀糖蛋白主要存在于细胞的蛋白粒中主要存在于细胞的蛋白粒中最主要的特性是能和糖类结合最主要的特性是能和糖类
13、结合 多数是一些寡聚蛋白多数是一些寡聚蛋白, ,二聚体或四聚体,少数含有二聚体或四聚体,少数含有两个糖结合部位的单体,如蓖麻毒蛋白。两个糖结合部位的单体,如蓖麻毒蛋白。 豆科植物的种子中含量最丰富豆科植物的种子中含量最丰富原理当被昆虫取食后,外源凝集素当被昆虫取食后,外源凝集素在昆虫的消化在昆虫的消化道中与肠道围食膜上的糖蛋白专一性结合道中与肠道围食膜上的糖蛋白专一性结合(即不同的外源凝集素与相应的糖类结合),(即不同的外源凝集素与相应的糖类结合),从而影响营养的吸收从而影响营养的吸收。可能在昆虫的消化道内诱发病灶,促进消化可能在昆虫的消化道内诱发病灶,促进消化道中细菌的繁殖。道中细菌的繁殖。
14、主要种类 1.1.麦胚凝集素(麦胚凝集素(wheat germagg1utininwheat germagg1utinin,GAGA)2.2.雪花莲(雪花莲(GalanthusGalanthus nivalisnivalis, GNA GNA )凝集素)凝集素 3.3.豌豆外源凝集素(豌豆外源凝集素(pea-pea-lectin,p-Leclectin,p-Lec) 雪花莲虽然外源凝集素有很强的抗虫作用,但虽然外源凝集素有很强的抗虫作用,但如果转入食用性农作物特别是生食的蔬如果转入食用性农作物特别是生食的蔬菜类中,菜类中,对人和家畜有无毒副佐用还需对人和家畜有无毒副佐用还需要进一步证实要进一步
15、证实。因此,目前其大规模大。因此,目前其大规模大面积应用还是受到了一定的限制。面积应用还是受到了一定的限制。抗虫转基因新思路为了对付棉铃虫,棉花体内天生就有一种名叫棉酚的为了对付棉铃虫,棉花体内天生就有一种名叫棉酚的毒素。相应地,棉铃虫也有一种名叫毒素。相应地,棉铃虫也有一种名叫P450P450的基因参与的基因参与解毒,可化解棉酚的毒性,帮助棉铃虫逃过此解毒,可化解棉酚的毒性,帮助棉铃虫逃过此“劫劫”。中科院上海生命科学研究院植物生理生态研究所研究中科院上海生命科学研究院植物生理生态研究所研究组采用组采用RNARNA干扰技术干扰技术,将具有干扰作用的昆虫双链,将具有干扰作用的昆虫双链RNARN
16、A转入植物体内。转入植物体内。棉铃虫食用了此种转基因植物后,干扰棉铃虫食用了此种转基因植物后,干扰RNARNA就渗透入棉就渗透入棉铃虫消化食物的中肠壁内,从而铃虫消化食物的中肠壁内,从而“直捣直捣”棉铃虫体内棉铃虫体内的解毒基因的解毒基因P450P450。这些棉铃虫就像慢性中毒一样,对。这些棉铃虫就像慢性中毒一样,对棉酚的抵抗力大大减弱,蚕食棉花的胃口随之骤减,棉酚的抵抗力大大减弱,蚕食棉花的胃口随之骤减,生长缓慢,甚至死亡。生长缓慢,甚至死亡。 自然自然杂志评价该论文是杂志评价该论文是“第一次成功报道利用植物自生第一次成功报道利用植物自生表达昆虫基因的双链表达昆虫基因的双链RNARNA来抑制
17、植食性昆虫防御基因的论来抑制植食性昆虫防御基因的论文文”,“通过该技术改良的植物比利用杀虫剂不分青红皂白通过该技术改良的植物比利用杀虫剂不分青红皂白地将所有昆虫杀死更符合社会发展的需要。地将所有昆虫杀死更符合社会发展的需要。” ” http:/ 2006,103(39):14302-143067.1.1.2 抗病毒基因病毒病引起的作物病害是十分严重的,仅以马铃薯病毒病引起的作物病害是十分严重的,仅以马铃薯为例,为例,病毒病毒(PVX)(PVX)引起的产量损失可引起的产量损失可10%,Y10%,Y病毒病毒(PVYPVY)引起的损失可达)引起的损失可达8080,然而迄今杂交常规,然而迄今杂交常规育
18、种对病毒病的防治尚无良策。育种对病毒病的防治尚无良策。常用的抗病毒基因外源病毒外壳蛋白(外源病毒外壳蛋白(coat proteincoat protein,C C)基因)基因病毒复制酶基因病毒复制酶基因 病毒卫星病毒卫星RNARNA基因基因核糖体失活蛋白(核糖体失活蛋白(RIPRIP)基因)基因 干扰素基因干扰素基因 等等等等MonsantoMonsanto公司,公司,19881988年,获得了表达年,获得了表达TMVTMV的的CPCP基因的番茄品基因的番茄品种种VF36VF36的转基因植株。在接种后表现出延迟发病,发病率的转基因植株。在接种后表现出延迟发病,发病率小于小于5%5%,产量几乎不
19、受影响,而对照植株则,产量几乎不受影响,而对照植株则100%100%发病,果发病,果实减产实减产26-35%26-35%。MonsantoMonsanto公司,公司,19901990年,把年,把PVXPVX和和PVYPVY的的CPCP基基因同时导入北美最重要的马铃薯品种因同时导入北美最重要的马铃薯品种ussetusset BurbankBurbank,其中筛选出的一个转基因株系在接,其中筛选出的一个转基因株系在接种条件下,完全抗种条件下,完全抗PVXPVX和和PVYPVY。田间试验表明。田间试验表明, ,传毒蚜虫接种传毒蚜虫接种1616周后周后, ,转基因植株只有转基因植株只有8%8%的发的发
20、病率病率, ,而对照植株的发病率却高达而对照植株的发病率却高达79.3%79.3%。a)病毒的外壳蛋白(CP)基因 b)核糖体失活蛋白(RIP)基因 是是单链单链的碱性蛋白质。分子量约为的碱性蛋白质。分子量约为30kD30kD,带有,带有或不带有糖基,但其生物活性都一样,都具或不带有糖基,但其生物活性都一样,都具有有抑制抑制无细胞无细胞蛋白质生物合成蛋白质生物合成的作用的作用, ,对完整对完整细胞或动物呈无毒或低毒。细胞或动物呈无毒或低毒。 是由是由A A、B B两条肽链两条肽链通过二硫键组成的二聚体。通过二硫键组成的二聚体。分子量约为分子量约为60kD60kD。其。其A A链与链与I I型型
21、RIPRIP同源呈酸同源呈酸性或碱性,是毒性分子。性或碱性,是毒性分子。B B链是凝集素,能链是凝集素,能结合到细胞膜表面并协助结合到细胞膜表面并协助A A链进入细胞。链进入细胞。 I I型型RIPRIP:IIII型型RIPRIP:RIPRIP是一类能是一类能抑制蛋白质生物合成抑制蛋白质生物合成的蛋白,广泛存在于高等植的蛋白,广泛存在于高等植物中,含量丰富。部分真菌中也含有此类物质。物中,含量丰富。部分真菌中也含有此类物质。常见的RIP商陆毒蛋白、蓖麻毒素商陆毒蛋白、蓖麻毒素相思子毒蛋白、苦瓜毒素相思子毒蛋白、苦瓜毒素商陆商陆蓖麻蓖麻相思子相思子RIP作用机理RIPRIP选择性选择性作用于作用
22、于60S60S核糖体大亚基,抑制肽链延伸核糖体大亚基,抑制肽链延伸。大多数植物和细菌中的大多数植物和细菌中的RIPRIP是通过它的是通过它的N N一糖苷酶一糖苷酶(N-N-g1ycosidaseg1ycosidase)活性活性来抑制蛋白质合成的功能。它特异地作来抑制蛋白质合成的功能。它特异地作用于用于2828rRNArRNA(核糖体大亚基上)的第(核糖体大亚基上)的第43244324位核苷酸的腺瞟位核苷酸的腺瞟呤与核糖之间的呤与核糖之间的N N一糖苷键,进行水解,除掉腺瞟呤,使核一糖苷键,进行水解,除掉腺瞟呤,使核糖体失活,不能合成蛋白质。糖体失活,不能合成蛋白质。真菌中的真菌中的RIPRIP
23、则通过其则通过其核酸酶(核酸酶(RNaseRNase)活性)活性起作用,起作用, RIPRIP专专一水解真核细胞核糖体一水解真核细胞核糖体2828rRNArRNA第第43254325和和43264326位核苷酸之间位核苷酸之间的磷酸二酯键。的磷酸二酯键。不同的不同的RIPRIP分别对于病毒、真菌和昆虫具有不同的抗性。分别对于病毒、真菌和昆虫具有不同的抗性。能使植物获得广谱抗性。能使植物获得广谱抗性。RIP的抗病毒活性RNA N-RNA N-糖苷酶活性糖苷酶活性(植物、细菌来源)(植物、细菌来源)水解水解rRNArRNA 特定位点的腺苷酸的特定位点的腺苷酸的N-CN-C糖苷键,释放一糖苷键,释放
24、一个腺嘌呤残基,致使核糖体无法与延伸因子个腺嘌呤残基,致使核糖体无法与延伸因子EF-EF-TuTu和和EF-GEF-G结合结合 RNARNA水解酶活性水解酶活性(真菌来源)(真菌来源)-帚曲霉素(水解位于帚曲霉素(水解位于28s 28s rRNArRNA上特定位点的磷上特定位点的磷酸二酯键,引起构象变化)酸二酯键,引起构象变化)7.1.1.3抗真菌和细菌基因a)a)几丁质酶基因几丁质酶基因b)b)-1,3-1,3-葡聚糖酶基因葡聚糖酶基因a)几丁质酶基因许多病原真菌的细胞壁主要成分为几丁质,而植物许多病原真菌的细胞壁主要成分为几丁质,而植物中还未发现几丁质酶的底物中还未发现几丁质酶的底物几丁质
25、的降解,不仅破坏细胞新物质的沉积,致使几丁质的降解,不仅破坏细胞新物质的沉积,致使病原菌死亡,而且产生的细胞壁碎片具有诱导作用,病原菌死亡,而且产生的细胞壁碎片具有诱导作用,刺激寄主植物的抗病反应刺激寄主植物的抗病反应几丁质酶:水解酶,通过破坏几丁质而抑制病原菌几丁质酶:水解酶,通过破坏几丁质而抑制病原菌的生长的生长b)-1,3-葡聚糖酶基因水解水解-1,3-1,3-葡聚糖的作用葡聚糖的作用-1,3-1,3-葡聚糖酶也是真菌细胞壁的主要碳水化合葡聚糖酶也是真菌细胞壁的主要碳水化合物物-1,3-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶具有协同的抗真菌作葡聚糖酶和几丁质酶具有协同的抗真菌作用,因此常将两种基因同
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