生物大分子的分离纯化和鉴定课件.ppt

1、2 2、植物组织：、植物组织：1010小时内置小时内置-4 -30-4 -30冰箱储藏备用冰箱储藏备用3 3、微生物：胞外产物（如发酵液），低温短时储藏。、微生物：胞外产物（如发酵液），低温短时储藏。 胞内产物，则应收集菌体或细胞，制成冻干粉于胞内产物，则应收集菌体或细胞，制成冻干粉于44保存保存（数月不变质）（数月不变质） 除了体液和微生物胞外的某些蛋白质和多肽以外除了体液和微生物胞外的某些蛋白质和多肽以外, ,大多数生物大多数生物大分子都存在于细胞之内大分子都存在于细胞之内. .蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化3 3、有机溶剂分级法、有机溶剂分级法 有机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因之一是改

2、变介质的介电常数，水是高介电常数（20时，80），有机溶剂是低介电常数物质（20时，甲醇33，乙醇24，丙酮21.4），因此有机溶剂的加入使水溶液的介电常数降低。这样，蛋白质分子表面的可解离基团的离子化程度减弱，水化程度降低，因此促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一重要方式可能与盐析相似，与蛋白质争夺水化（膜）水，致使蛋白质聚集体的形成并沉淀。 有机溶剂沉淀法一般与等电点沉淀法联合使用。即操作时溶液的pH值应控制在欲分离蛋白质的等电点附近。层析技术成成分的电泳。分的电泳。蛋白质分离纯化及鉴定蛋白质分离纯化及鉴定分级沉淀法与等电点沉淀法联合使用得到初步分离分级沉淀法与等电点沉淀法联合使用得到初步分离纯化纯化鉴定鉴定