临床基因扩增实验室建设方案.doc

1、临床基因扩增实验室建设方案1、概述临床基因扩增实验又称PCR实验，是专门用来检验新型冠状病毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳头状瘤病毒等病毒感染性疾病的一种检测手段.它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒.由于该检测方法可以测出普通检验难以检测岀的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的疾病诊断。 新型冠状病毒（2019-nCoV）是人类分离的第七类冠状病毒。该病毒属于属,有包膜,颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60140nm。其基因特征与SARSCoV 和

2、MERSCoV 有明显区别。目前研究显示与蝙蝠SARS 样冠状病毒（batSLCoVZC45）同源性达85%以上。病毒对紫外线和热敏感，56 度30分钟、乙醚、75%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。基于目前的流行病学调查和研究结果,新型冠状病毒潜伏期为1-14 天，多为3-7 天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者,无症状感染者也可能成为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能，其他传播途径待明确；人群普遍易感.2020 年01 月20 日国家卫健委公告：将新型冠状病毒感染的肺炎纳入中华人民共

3、和国传染病防治法规定的乙类传染病,并采取甲类传染病的预防、控制措施。并纳入中华人民共和国国境卫生检疫法规定的检疫传染病管理。实验活动暂按第二类病原微生物进行管理.因此，开展新冠病毒核酸检测需要在法律条规、人员环境、生物安全与防护以及质量控制等方面满足并符合国家相关技术规范要求。因此对新型冠状病毒检测需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用.本方案主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局,空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对实验室设计中的主要特点进行了阐述

4、。临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此,实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别进说明。2、PCR实验室平面布局临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区，同时为了符合新冠实验检测需要增加独立衣帽间方便更换防护装备。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能在衣帽间更换防护服后从试剂准备区标本制备区基因扩增区扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。3、实验室空调通风系统设计及压力控制PCR实验室

5、并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式.同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求.4、实验室建设及设备4.1实验室分区功能分区名称实验室功能实验室专业要求衣帽间存储防护物质和实验前更换防护服无特殊要求试剂准备区试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备.应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求样本制备区核酸（RNA、DNA）提取、贮存及制备工作应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求扩增区cDNA合成、DNA扩增应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范

6、的要求产物分析区基因扩增产物分析应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求4.2、实验室设计要求（仅供参考）实验室名称使用面积（）通风要求噪声(dB)温湿度相对外界大气压（Pa）不间断电源大型落地设备平均照度（lx)衣帽间10试剂准备区2012次/h601827 30%70%缓冲间10主实验室5有300样本制备区3012次/h601827 3070%缓冲间5主实验室-5有300扩增区2012次/h601827 3070%缓冲间5主实验室10有（荧光PCR仪)有300产物分析区3012次/h6018250%20%缓冲间5主实验室15有（杂交仪)有3004。3实验室设备要求序号 设

7、备名称 型号配备数量 备注 1 空气消毒机 4台需保证标本制备区1台； 有条件PCR每个分区 各1台 2 移动式紫外灯 4台 需保证四个分区各1台有条件每个缓冲间各1台3超净工作台1台试剂准备区4微型离心机3台需保证试剂准备区1台，扩增区1台，扩增区1台5振荡器可调速3台需保证试剂准备区1台，标本制备区1台，标本制备区生物安全柜里使用1台6生物安全柜1。5米全排双人，A2、B2均可2台标本制备区,有条件可根据提取通量及检测量增加（至少1台）7全自动核酸提取仪1台标本制备区，有条件可根据提取通量及检测量增加8 高速离心机2台标本制备区，需要保证标本制备区生物安全柜里使用1台（建议采购Eppend

8、orf品牌）9医用冰箱4台试剂准备区1台,标本制备区2台(其中1台带锁),产物分析区1台 需具备20度以下10多通道荧光仪96孔 4通道(具备CY5通道）1台扩增区1台，有条件可根据提取通量及检测量增加11移液器 1001000ul 20200ul 210ul 3套 试剂准备区,标本制备区及产物分析区有条件可根据样本数选用八通道排枪 12恒温水浴箱 2台保证标本制备区1台(病毒灭活处理，可使用恒温箱代替)，产物分析区1台13自动手消器 3个标本制备间2个,标本制备间缓冲间1个14医废垃圾桶 12个4分区及其缓冲间各1个，而新冠检测还需要保证标本制备区及其缓冲间多配1个,以区分高压及未高压的医废

9、垃圾15高压灭菌锅 2台自动，无需人工排气式；建议保证标本制备区1台16抽湿机(选用）1台根据实际实验室环境选用17耗材无RNA酶适量吸头（带滤芯）/八连管/EP18移液器10ul/50ul/200ul/1000ul2/1/4/5根据标本量可以对部分量程数量增加5、实验室人员资质及配置经省（市）临检中心基因检测技术培训合格(持岗位合格证）；经过省（市）疾控或其他相关部门的生物安全培训（培训合格）和具备相应的实验技能;经PCR实验室内部的生物安全与操作规范培训与考核合格.（要求具备PCR上岗证）:高级职称1人以上、中级职称2人以上、初级职称要求4人以上，标本接收员1人以上。6、实验室防护物质要求 新冠状病毒核酸检测必须按照三级个人防护标准进行.即要求：医用防护口罩或N95口罩、双层乳胶手套、面屏、护目镜、工作服外防护服、双层医用防护帽，加手卫生。必要时双层口罩（外医用防护口罩，内N95)。如果接触了患者血液、体液、分泌物或排泄物，应及时更换防护装备.