过敏原检测方法方案课件.ppt

1、过敏性疾病与临床检测 河南省人民医院呼吸科 王思勤 2012年9月7日2022-3-22Name of presentation2临床常见过敏性疾病有过敏性鼻炎、哮喘、荨麻疹、湿疹、食物过敏及过敏性休克等。近年来，过敏性疾病的发病率呈上升趋势，国内医学界对这种疾病日益重视，其实验室诊断也得到充分发展。过敏性疾病研究的历史 20世纪人们用动物抗血清治疗烈性传染病时发现 “血清病” 1906年奥地利医生Clemens von Pirquet发表“Allersie”(变态反应)一文，开拓了变态反应临床和实验研究新领域 1963年Gell及Coombs根据变态反应病的机理和特点，将其分为四型 1966

2、年石坂夫妇发现了速发型变态反应中的IgE抗体 1967年Johansson从骨髓瘤病人中分离到纯化的IgE并进行了其分子结构的研究通常过敏性疾病是由IgE介导的I 型变态反应所涉及的疾病也有例外，比如一些药物（如多粘菌素、吗啡、某些造影剂或阿斯匹林）引起的过敏性休克。IgE 型变态反应的特点是反应迅速、强烈、消退亦快，通常不遗留组织损伤，也称为速发型超敏反应 有明显的个体差异及时令性。 好发于呼吸、消化、皮肤等系统。特征性病理变化以水肿，分泌物增多，平滑肌痉挛，嗜酸细胞增多为主过敏性疾病的触发因素过敏性疾病的触发因素 -过敏原（变应原）过敏原（变应原）过敏性疾病常见的过敏原包括： 药物（如引起

3、过敏性休克的青霉素类、多粘菌素、吗啡、某些造影剂或阿斯匹林） 粉尘螨、真菌（如曲霉属和青霉属的霉菌、以及交链孢霉和枝孢霉等） 花粉（包括蒿属、豚草、树、牧草和杂草的花粉）、其他吸入过敏原（如引起哮喘的蚕丝、皮毛、羽毛、屋尘） 食物（如引起食物过敏的牛奶、鸡蛋、花生、豆类、坚果、鱼、虾、肉类、贝类和谷物） 化工材料（如造成接触性皮炎的油漆、甲醛、乳胶、香料和染料等）过敏性疾病的临床诊断过敏性疾病的临床诊断 临床症状、病史 体检及临床试验 实验室检查 父母双方均有变态反应病者，或父母一方有变态反应者，子代患变态反应的机率较高 父母双方均无变态反应病者，子代的发病机率少，一旦发病，临床表现较轻，持续

4、时间较短 过敏的发生与后天的环境关系同样非常密切，变态反应的临床表现并不一定符合遗传规律。过敏体质是导致变态反应的内因过敏进程食物过敏和特应性皮炎在出生早期发病率较高，而呼吸道过敏性疾病在儿童期发病率较高。伴随着儿童年龄增长，过敏性疾病的表现会发生阶段性变化，各系统次序出现不同的过敏症状，此现象被称为“过敏进程过敏进程”过敏性疾病的临床症状以一个典型的顺序 出现在儿童期，并持续数年的自然进程过敏进程Eugene G Weinberg, MB ChB. The allergic march. CME 2010; 28(2).Progression of the allergic marchEug

5、ene G Weinberg, MB ChB. The allergic march. CME 2010; 28(2).明确过敏原，阻止过敏进程 Eugene G Weinberg, MB ChB. The allergic march. CME 2010; 28(2).儿童早期，明确过敏原，进而规避过敏原，可阻止过敏进程，改善患儿生活质量特应性变应原及可能诱因的回避是治疗的基本原则如何明确过敏性疾病的过敏原？过敏性疾病的诊断详细的病史体检及临床试验家族过敏史既往过敏史既往发生过敏时的临床表现季节和室内/外变化疑似过敏原种类、接触频率、接触量、接触时间生活环境、工作环境、精神压力的影响其它因素

6、询问病史体内试验体内试验 贴斑试验（patch test ） 点刺试验（prick test ）或挑刺试验（puncture test ） 皮内试验（intradermal test 或 intracutaneous test ） 眼结膜试验（conjunctiva test） 鼻粘膜激发试验（nasal mucosa provocation test）或抗原鼻内滴入试验（灌输测试） 舌下试验（sublingual test ） G.Pfeiffer 数十年一直用此法进行诊断 食物激发试验（food provocation test ） ，亦称为白细胞减少指数试验其他检查其他检查 影像学诊断：

7、包括胸部透视和摄片、支气管造影、鼻窦X线摄影、胃肠造影、B超、CT、核磁共振等。 治疗性诊断：某些病例经各种检查仍无法确认时，可使用对变态反应有良效的药物（如肾上腺素、2 受体兴奋剂、抗组织胺类药物及肾上腺皮质激素类药物等），进行试探性治疗。 特异性IgE测定有时也称为“过敏原测定” 特异性IgE的检测主要是酶免疫分析 根据标记酶指示底物的不同分为：荧光酶免疫分析（如ImmunoCAP）、发光酶免疫分析（如Immulite和Access）酶联免疫吸附剂测定（ELISA）。体内试验和体外试验的比较 皮肤实验结果解释如果病史提示敏感性 还有皮肤实验结果阳性 然后与抗原相关的可能性极强如果病史不提示

8、敏感性 皮肤实验结果阳性 在高强度的自然暴露中观察患者病史提示敏感性 皮肤实验结果阴性 1 回顾患者用药情况，抗组胺、抑郁药 2回顾其他引起假阴性实验原因如： 劣质的实验材料和技术不恰当 3在高强度自然暴露中观察患者 4 进行激发试验（很少做） 帕特深 变态反应性疾病 人民卫生出版社 2004sIgE 体外检测和皮试的比较 不受患者皮肤条件的影响 不受患者药物治疗的影响 不受操作者技术的影响 符合WHO标准ImmunoCAP 全自动 、体外过敏原特异性IgE检测、全定量血液测定检测原理：荧光酶联免疫分析荧光酶联免疫分析法法 FEIAFEIA荧光酶底物比显色底物的灵敏度高10-10-1000 1

9、000 倍。倍。ImmunoCAP固相载体抗原吸附能力是纸片法的3 3倍倍；是试管法的150150倍倍。ImmunoCAPTM全面的检测项目 总IgE 特异性IgE 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 ECP（评估气道炎症状态） IgG & IgG4（评价特异性免疫治疗的反应） 类胰蛋白酶（严重过敏反应的标记物） 自身免疫性疾病诊断l 过筛试验l 单价S-IgE检测l 多价S-IgE检测l 组分过敏原诊断总IgE（Total IgE )IgE是介导 I 型变态反应的抗体，血清IgE水平升高提示机体可能患有变态反应性疾病。但是，总IgE不一定是过敏， 过敏者总IgE也不一定高，过敏与否主要取决于sIgE的存

10、在。影响总IgE的因素 遗传、年龄、性别、种族 吸烟、寄生虫感染测定患者血清中总IgE抗体的含量特异性IgE（Specific IgE, SIgE）如果对某种过敏原过敏，血清中便存在针对该过敏原的S-IgE 。 l 单价S-IgE检测l 多价S-IgE检测l 过筛试验 常见的单价常见的单价S-IgE d1 户尘螨 d2 粉尘螨 i6 蟑 螂 f1 鸡蛋白 f2 牛 奶 常见的多价常见的多价S-IgE mx1（m1,m2,m3,m6） mx2（m1,m2,m3,m5,m6,m8） hx2 （h2,d1,d2,i6） 过筛试验过筛试验吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop） 食物过敏原过筛试验（

11、Fx5） 儿童吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop Infant）l草类花粉： w6（艾蒿） w22（葎草）l树木花粉： t11（梧桐）l螨类： d1（屋尘螨） d2（粉尘螨）l微生物： m6（交链孢霉）l动物皮毛： e1（猫毛皮屑）l食物： f1（蛋白） f2（牛奶）l屋尘： h1l昆虫/毒液：i6（蟑螂）l药物： c1（青霉素G）l职业性过敏原等：k82（乳胶）超过600种的过敏原和80种以上的组分过敏原特异性IgE（sIgE）结果判断 检测范围：0.35 100 kUA/l 高灵敏度：89%高特异性：91% 定量结果分级标准及临床意义：0级 100 特别严重之过敏全定量检测特异性Ig

12、EImmunoCAPL. Soderstrom, G. Lilja, M. P. Borres, and C. Nilsson。Allergy 2011; 66: 10581064.过筛试验 吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop） 食物过敏原过筛试验（Fx5） 儿童吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop Infant）Phadiatop吸入性过敏原过筛试验 含有95%常见吸入性过敏原 筛查是否吸入性变应原过敏 临床准确率 90% 21项研究，超过2700个病例n 灵敏度91%n 特异度93%n 准确率92%Reference: Eriksson NE. Allergy 1990;45:2

13、85-292 Crobach M.J. et al. Allergy 1994;49:170-176 包括6种最常见的食物变应原 鸡蛋白、牛奶、小麦、花生、大豆、鱼 检测结果直接、客观 高灵敏度：89 高特异度：96Fx5食物过敏原过筛试验如何过筛过敏性疾病 推荐的检测组合 TPF： T-IgE + Phadiatop + Fx5过敏原检测流程过敏原检测流程螨、宠物、真菌系列三个花粉系列IgE检测过敏原检测流程过敏原检测流程分别测定单价特异性IgE食谱分析ImmunoCAPTM系统 体外过敏原诊断金标准 检测结果真实、可靠，重复性好；为临床提供客观的实验室指标 灵敏度高，特异性好；减少漏诊、误

14、诊 全自动化，减少实验工作量，提高检测效率 检测结果全定量，指导临床脱敏治疗和儿童早期诊断 完善的检测项目，600多种过敏原和80多种组分过敏原，充分满足临床和科研需要 Diagnosis and Identification of Causative Allergens Confirmation of allergy and identification of causative allergens are crucial to correctly manage allergic diseases Precise diagnosis allows the implementation of

15、therapies oriented to the etiologic factors of allergic diseases, such as environmental measures and immunotherapy WAO White Book on Allergy2011-2012: Executive Summary Diagnosis begins with a detailed medical history and physical examination. The identification of a temporal association between sym

16、ptoms and allergen exposure constitutes the basis for further testing Clinical suspicion is confirmed by means of investigation of IgE antibodies in vivo (skin tests) or in vitro. Skin tests should include relevant llergens and the use of standardized allergen extracts. In vitro testing is especiall

17、y useful when skin test results do not correlate with the history or cannot be performed. In vitro tests can be applied to “probability of disease” prediction in food allergy. There is a need for increased accessibility to allergy diagnosis and therapies and improved diagnostic methodologies that ca

18、n substitute in vivo provocation tests for drug and food allergy. The use of unproven tests increases the unnecessary costs of allergy diagnosis. 使用未经证实的测试增加了不必要成本过敏原的诊断酶联免疫捕获法（Dr. Fooke）非IgE检测生物共振 百康不受学术支持的过敏原检测产品不受学术支持的过敏原检测产品四种检测仪器性能比较 -检测原理与参数ImmunoCAPAdaltis敏筛Dr.Fooke备注备注检测原理检测原理荧光酶联免疫法液相酶联免疫法酶

19、联免疫印迹法酶联免疫捕获法？检测底物检测底物荧光底物显色显色底物显色显色底物显色显色底物荧光法的灵敏度是显色法的101000倍抗原载体抗原载体ImmunoCAP专利载体微孔板（试管法试管法）硝酸纤维素膜（纸片法纸片法）微孔板（试试管法管法）ImmunoCAP抗原吸附能力是纸片法3倍，试管法150倍检测项目检测项目6大项，包括T-IgE、s-IgE 、ECP 、IgG4等T-IgE、s-IgET-IgE、s-IgET-IgE、s-IgE 、IgGImmunoCAP拥有完善的过敏原相关检测项目过筛试验过筛试验Phadiatop 、FX5 、Phadiatopinfant等无无无无无无过筛试验极大的

20、方便临床实际使用抗原种类抗原种类近600种350种几十种据称800种？ImmunoCAP拥有与过敏性疾病相关的完善过敏原种类质控标准质控标准符合WHO的室内质控；全球化的室间质控仅仅室内质控仅仅室内质控仅仅室内质控室内和室间质控相结合，保证检测准确性四种检测仪器性能比较 -仪器性能ImmunoCAPAdaltis敏筛Dr.Fooke备注检测过程检测过程全自动全自动手工操作手工操作手工操作手工操作自动化操作，减少人工误差和人力检测时间检测时间2.5小时出结果3个小时以上2.5小时3个小时以上检测时间短，提高效率检测结果检测结果全定量，分级全定量半定量定量分级全定量检测，可精确反应过敏状况和预测过

21、敏进程质控曲线质控曲线保存保存可保存一个月不保存不保存不保存不保存不保存不保存方便检测，节省试剂温度控制温度控制全程环境温控微孔板加热无温控微孔板加热（仅全自动型）温度控制，能保证反应完全，结果准确每次试验每次试验抗原种类抗原种类无限制48种由测试条决定，十几种70种检测抗原无限制，适应临床需要学术认可学术认可程度程度广泛认可，国际顶级期刊文献数百篇极少很少仅1篇英文，2篇通讯；1篇中文ImmunoCAP产品性能可靠，检测准确，认可度高检测设备ImmunoCAP系统ImmunoCAP检测试剂Thank you!人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。