酵母细胞的固定化课件.ppt.ppt
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1、课题3 酵母细胞的固定化知识回顾:知识回顾:1 1、洗衣粉中添加、洗衣粉中添加_,可以,可以更有效地清除顽渍。常用的酶制剂更有效地清除顽渍。常用的酶制剂有有_四类。四类。2 2、影响酶活性的因素有、影响酶活性的因素有_、_和和_。3 3、影响洗衣粉洗涤效果的因素有、影响洗衣粉洗涤效果的因素有 _ 。 在食品、化工、轻纺、医药等领域大规模在食品、化工、轻纺、医药等领域大规模使用酶制剂,说明酶制剂使用有很多优点,你使用酶制剂,说明酶制剂使用有很多优点,你能举出一些例子吗?能举出一些例子吗? 酶制剂的使用有缺点吗?酶制剂的使用有缺点吗?你能你能举出一些例子吗?举出一些例子吗?酶制剂使用的优点酶制剂使
2、用的优点催化效率高、低能耗、低污染等。催化效率高、低能耗、低污染等。 1 1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感,容易失活;件非常敏感,容易失活; 2 2、溶液中的酶很难回收,不能被再次利用,、溶液中的酶很难回收,不能被再次利用,提高了生产成本;提高了生产成本; 3 3、反应后会混在产物中,可能影响产品质量。、反应后会混在产物中,可能影响产品质量。酶制剂存在的缺陷酶制剂存在的缺陷 如果你是工程如果你是工程技术人员,你如何技术人员,你如何解决这个问题?解决这个问题?一、固定化酶一、固定化酶1 1、固定化酶是指用物理或化学的方法将、固定化酶是指用物
3、理或化学的方法将酶与固相载体结合酶与固相载体结合在一起的在一起的仍具有酶活仍具有酶活性性的酶复合物。的酶复合物。固定化酶技术生产高果糖浆的图示:固定化酶技术生产高果糖浆的图示:注意反应柱的注意反应柱的各部分名称。各部分名称。你能说出反应你能说出反应柱的优点吗?柱的优点吗?反应柱能连续使用半年,大大反应柱能连续使用半年,大大降低了生产成本,提高果糖的降低了生产成本,提高果糖的产量和质量。产量和质量。优点:优点:(1 1)使酶既能与反应物接触,又能与产物)使酶既能与反应物接触,又能与产物分离;分离;(2 2)固定在载体上的酶可以被反复利用。)固定在载体上的酶可以被反复利用。2 2、固定化酶技术的优
4、点:、固定化酶技术的优点: 在生产实际中使用固定化酶技术有在生产实际中使用固定化酶技术有无不足无不足? ?如有不足如有不足, ,怎么办怎么办? ?有。一种酶只能催化一种化学反应,而在生产有。一种酶只能催化一种化学反应,而在生产实际中很多产物的形成都通过一系列的酶促反实际中很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能进行,所以操作比较麻烦。应才能进行,所以操作比较麻烦。可采用固定化细胞技术。可采用固定化细胞技术。3、固定化酶的缺陷、固定化酶的缺陷二、固定化细胞技术二、固定化细胞技术1 1、概念:、概念:利用物理或化学方法将细胞固定在一利用物理或化学方法将细胞固定在一定空间的技术。定空间的技术。细胞中
5、含有一系列酶,在细胞正常生细胞中含有一系列酶,在细胞正常生命活动的过程中,通过代谢产生所需命活动的过程中,通过代谢产生所需要的代谢产物。要的代谢产物。2.2.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶(或细胞)包埋在将酶(或细胞)包埋在细微网格里细微网格里将酶(或细胞)相将酶(或细胞)相互连接起来互连接起来将酶(或细胞)吸附在将酶(或细胞)吸附在载体表面上载体表面上包埋法包埋法化学结合法化学结合法吸附法吸附法方方法法原原 理理适用适用对象对象包包埋埋法法将聚合物的单体与酶溶液混合,将聚合物的单体与酶溶液混合,再借助于聚合助进剂再借助于聚合助进剂( (包括交包括交联剂联剂) )的作用进行聚
6、合,酶被的作用进行聚合,酶被包埋在聚合物中以达到固定化包埋在聚合物中以达到固定化酶或细酶或细胞胞方法方法原原 理理适用适用对象对象化学结化学结合法合法酶蛋白的侧链基团和载休表面上酶蛋白的侧链基团和载休表面上的功能基团之间形成共价键而固的功能基团之间形成共价键而固定的方法定的方法酶酶物理吸物理吸附法附法通过氢键、疏水作用和通过氢键、疏水作用和电子亲电子亲和力等物理作用,将酶固定于水和力等物理作用,将酶固定于水不溶载体上。从而制成固定化酶不溶载体上。从而制成固定化酶酶酶3 3、固定化细胞常用的载体、固定化细胞常用的载体 常用的不溶于水的多孔性常用的不溶于水的多孔性载体有哪些?载体有哪些?明胶、琼脂
7、糖、海藻酸钠、明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等 如果反应底物是大分子物如果反应底物是大分子物质,能否用固定化细胞技术质,能否用固定化细胞技术? ? 为什么?为什么? 那应该采用何种技术那应该采用何种技术? ?课堂小结:课堂小结:练习:练习:1.1.使用固定化细胞的优点是使用固定化细胞的优点是( )( )。A.A.能催化大分子物质的水解能催化大分子物质的水解 B.B.可催化一系列化学反应可催化一系列化学反应C.C.与反应物易接近与反应物易接近 D.D.有利于酶在细胞外发挥作用有利于酶在细胞外发挥作用B2.2.酶的固定方法不包括酶的固定方法不包括( )( )
8、。A.A.将酶吸附在固体表面上将酶吸附在固体表面上 B B将酶相互连接起来将酶相互连接起来C C将酶包埋在细微网格里将酶包埋在细微网格里 D D将酶制成固体酶制剂,如加酶洗将酶制成固体酶制剂,如加酶洗衣粉中的酶衣粉中的酶D3 3、如果反应物是大分子物质,采用、如果反应物是大分子物质,采用那种方法催化受限制那种方法催化受限制( )( )。A A直接使用酶直接使用酶 B B使用化学方法结合的酶使用化学方法结合的酶C C使用固定化细胞使用固定化细胞 D D使用物理吸附法固定的酶使用物理吸附法固定的酶C4 4、下列关于酶和细胞的固定叙述不、下列关于酶和细胞的固定叙述不正确的是正确的是( )( )。A
9、A酶分子很小,易采用包埋法酶分子很小,易采用包埋法 B B酶分子很小,易采用化学结合或酶分子很小,易采用化学结合或物理吸附法固定的酶物理吸附法固定的酶C C细胞个大,难被吸附或结合细胞个大,难被吸附或结合 D D细胞易采用包埋法固定细胞易采用包埋法固定A5. 5. 关于固定化酶的叙述不正确的是关于固定化酶的叙述不正确的是 A A 既能与反应物接触,又能与反应物既能与反应物接触,又能与反应物分离分离 B B固定在载体上的酶可被反复利用固定在载体上的酶可被反复利用C C可催化一系列反应可催化一系列反应 D D酶的活性和稳定性受到限制酶的活性和稳定性受到限制C6 6、固定化细胞对酶的活性影响最小,根
10、本原、固定化细胞对酶的活性影响最小,根本原因是因是( )( )。A A避免了细胞破碎、酶的提取纯化过程避免了细胞破碎、酶的提取纯化过程 B B固定化细胞在多种酶促反应中连续发挥作固定化细胞在多种酶促反应中连续发挥作用用C C促化反应结束后,能被吸收和重复利用促化反应结束后,能被吸收和重复利用D D细胞结构保证了各种酶在细胞内化学反应细胞结构保证了各种酶在细胞内化学反应中有效的发挥作用中有效的发挥作用D三、实验操作三、实验操作(一)制备固定化酵母细胞(一)制备固定化酵母细胞阅读阅读P59P596060思考下列问题:思考下列问题:(1 1)制备过程包括哪几个步骤?)制备过程包括哪几个步骤?(2 2
11、)你认为哪个步骤的操作是最重要的一环?)你认为哪个步骤的操作是最重要的一环?(3 3)各步骤应当分别注意什么问题?)各步骤应当分别注意什么问题?1 1、酵母细胞的活化、酵母细胞的活化思考:思考: 关于酵母菌你有哪些知识?关于酵母菌你有哪些知识? 什么是活化?什么是活化? 怎样活化?怎样活化? 应注意什么?应注意什么?活化:活化:让处于休眠状态的微生物重让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态新恢复正常的生活状态本质:本质:加快新陈代谢加快新陈代谢方法:方法:加入适量的水加入适量的水1 1、酵母细胞的活化、酵母细胞的活化取取1g1g干酵母,放入干酵母,放入50ml50ml的小烧杯中,加的小烧
12、杯中,加入蒸馏水入蒸馏水10ml10ml,用玻,用玻璃棒搅拌,使酵母细璃棒搅拌,使酵母细胞混合均匀,成糊状,胞混合均匀,成糊状,放置放置1h1h左右使其活化左右使其活化1 1、所用容器要大一些;、所用容器要大一些;2 2、要保证酵母菌的活性;、要保证酵母菌的活性;3 3、物种要单一;、物种要单一;4 4、注意水的用量。、注意水的用量。思考:你认为酵母的活化操作有哪些注意事项?思考:你认为酵母的活化操作有哪些注意事项?2 2、配制物质的量浓度为、配制物质的量浓度为0.05mol/L0.05mol/L的的CaClCaCl2 2溶液溶液 称取无水称取无水CaclCacl2 2 0.83g 0.83g
13、。放入。放入200mL200mL的烧杯中,加入的烧杯中,加入150mL150mL的蒸馏水,使其充的蒸馏水,使其充分溶解,待用。分溶解,待用。3 3、配制海藻酸钠溶液、配制海藻酸钠溶液操作:操作: 称取称取0.7g0.7g海藻酸钠,放入海藻酸钠,放入50mL50mL小小烧杯中烧杯中. .加人加人10mL10mL水,用酒精灯加热,水,用酒精灯加热,边加热边搅拌,将海藻酸钠调成糊状,边加热边搅拌,将海藻酸钠调成糊状,直至完全溶化,用蒸馏水定容至直至完全溶化,用蒸馏水定容至10mL10mL。注意,加热时要用小火,或者间断加注意,加热时要用小火,或者间断加热,反复几次,直到海藻酸钠溶化为热,反复几次,直
14、到海藻酸钠溶化为止止 加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环,涉及到实验的成败,一定要按照的一环,涉及到实验的成败,一定要按照教材的提示进行操作。教材的提示进行操作。海藻酸钠的浓度涉海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓。如果海藻酸钠浓度过高,将很难形成凝胶珠;如果浓度过度过高,将很难形成凝胶珠;如果浓度过低,形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数低,形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少,影响实验效果。目少,影响实验效果。应当注意什么问题?应当注意什么问题?4 4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合 将溶化好的海藻
15、酸钠溶液将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温冷却至室温,加入已活化的醉母细胞,进行充分搅拌,加入已活化的醉母细胞,进行充分搅拌,使其混合均匀,再转移至注射器中。使其混合均匀,再转移至注射器中。为什么海藻酸钠溶液要冷却?为什么海藻酸钠溶液要冷却?5 5、固定化酵母细胞、固定化酵母细胞 以以恒定的速度缓慢恒定的速度缓慢地将注射器中的地将注射器中的溶液滴加到配制好的溶液滴加到配制好的Cacl2Cacl2溶液中,观溶液中,观察液滴在察液滴在Cacl2Cacl2溶液中形成凝胶珠的情溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在形。将这些凝胶珠在Cacl2Cacl2溶液中浸泡溶液中浸泡30 min30 min左右。左
16、右。 刚形成的凝胶珠应在刚形成的凝胶珠应在CaCl2CaCl2溶液中浸溶液中浸泡一段时间,以便形成稳定的结构。泡一段时间,以便形成稳定的结构。 一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压上用手挤压,如果凝胶珠不容易破裂,没有,如果凝胶珠不容易破裂,没有液体流出,就表明凝胶珠的制作成功。液体流出,就表明凝胶珠的制作成功。 二是在实验桌上用力摔打凝胶珠二是在实验桌上用力摔打凝胶珠,如果,如果凝胶珠很容易弹起,也能表明制备的凝胶珠凝胶珠很容易弹起,也能表明制备的凝胶珠是成功的。是成功的。 检验凝胶珠的质量是否合格,可以检验凝胶珠的质量是否合格,可以使用下列方法:使
17、用下列方法:这一阶段成功与否呢?怎样评价?这一阶段成功与否呢?怎样评价?观察凝胶珠的颜色和形状观察凝胶珠的颜色和形状: 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色,如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色,说明海藻酸钠的浓度偏低,固定的酵母细说明海藻酸钠的浓度偏低,固定的酵母细胞数目较少;如果形成的凝胶珠不是圆形胞数目较少;如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形,则说明海藻酸钠的浓度偏高,或椭圆形,则说明海藻酸钠的浓度偏高,制作失败,需要再作尝试。制作失败,需要再作尝试。(二)用固定化细胞发酵(二)用固定化细胞发酵1 1、将固定好的酵母细胞、将固定好的酵母细胞( (凝胶珠凝胶珠) )用用蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗2-32-
18、3次。次。 2 2、 将将150mL150mL质量分数为质量分数为10%10%的葡萄糖的葡萄糖溶液转移到溶液转移到200mL200mL的锥形瓶中,再加的锥形瓶中,再加入固定好的酵母细胞,置于入固定好的酵母细胞,置于2525下发下发酵酵24h24h。这一阶段成功与否呢?怎样评价?这一阶段成功与否呢?怎样评价?观察发酵的葡萄糖溶液;观察发酵的葡萄糖溶液;利用固定的酵母细胞发酵产生酒精,利用固定的酵母细胞发酵产生酒精,可以看到产生了很多气泡,同时会闻可以看到产生了很多气泡,同时会闻到酒味。到酒味。还有其他方法吗?还有其他方法吗?练习练习:1、制备固定化酵母细胞的过程中错误的是、制备固定化酵母细胞的过
19、程中错误的是A、取干酵母,加入蒸馏水,使其活化取干酵母,加入蒸馏水,使其活化B、配制海藻酸钠时,加热用大火,直到海、配制海藻酸钠时,加热用大火,直到海藻酸钠溶化为止藻酸钠溶化为止C、将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温,、将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温,加入已活化的酵母细胞加入已活化的酵母细胞D、将凝胶珠在、将凝胶珠在Cacl2溶液中浸泡溶液中浸泡30 min左右左右B历史岳麓版第13课交通与通讯的变化资料精品课件欢迎使用自读教材自读教材填要点填要点 一、铁路,更多的铁路一、铁路,更多的铁路 1地位地位 铁路是铁路是 建设的重点,便于国计民生,成为国民经济建设的重点,便于国计民生,成为国民经济发
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