酶抑制法和免疫测定技术.ppt课件.ppt

1、学习指南学习指南观察思考观察思考课外阅读课外阅读复习自测复习自测退出本章退出本章演示文稿演示文稿本章目录本章目录辽农职院辽农职院 工程系工程系 质检中心质检中心20222022年年3 3月月2222日日1谢谢欣赏2019-7-222谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章一、酶抑制分析测定法一、酶抑制分析测定法1 1、酶法概述、酶法概述2 2、酶法检验原理、酶法检验原理3 3、酶原、酶原4 4、底物与显色剂、底物与显色剂5 5、测定方法、测定方法二、免疫检测技术二、免疫检测技术1 1、免疫反应、免疫反应2 2、免疫分析、免疫分析3 3、酶联免疫吸附测定、酶联免疫吸附测定法法4

2、 4、农药抗体制备、农药抗体制备5 5、ELISAELISA法的特点法的特点3谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章一、酶抑制分析测定法一、酶抑制分析测定法1 1、酶法概述、酶法概述4谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章真性胆碱酯酶与胆碱能神经的生理功能极为密切。其生理功能是，当神经冲动到达胆碱能神经末梢时，突触小泡内的Ach外排至突触间隙，作用于突触后膜的胆碱能受体，引起下一级神经元或效应器的激发。在正常生理条件下，Ach完成传递冲动作用后，随即被突触后膜上的AchE在数毫秒内水解，生成乙酸和胆碱。2 2、酶法检验原理、酶法检验原理5谢谢欣赏2019

3、-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章神经性毒剂分子中含有亲电子的正磷原子(P+)，它与Ach分子中的正碳原子(C+)同样具有亲电子性质。但神经性毒剂的亲电子能力此Ach强，这是因为毒剂分子中，PO和P-F键上的O、F原子相对电负性比P原子大得多(相对电负性P2.1，O3.5，F4.0，C&S2.5)。因此，相对电负性大的O、F原子吸收电子成为负极，使P成为低电子密度的正极，即P原子带有较多的正电荷和更强的亲电子能力。所以神经性毒剂对AchE有更大的亲和力和抑制力。(1)(1)神经性毒剂对神经性毒剂对AchEAchE的抑制机理的抑制机理6谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退

4、出本章胆碱酯酶根据其水解基质的专一性和速度不同分真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前者又称乙酰胆碱酯酶(AchE)，后者包括丁酰胆碱酯酶(BuchE)和丙酰胆碱酯酶(PrchE)。假阳性：水果、蔬菜的提取物中含有对有抑制作用的杂质，如氯代烟碱类物质。(2)(2)对胆碱酯酶的抑制作用对胆碱酯酶的抑制作用 假阳性假阳性7谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章敌敌畏 乙酰胆碱乙酰胆碱PCCl2OCHCH3OCH3OOAchE 产生假阳性的作用机理产生假阳性的作用机理8谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章9谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章1

5、0谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章11谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章12谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章13谢谢欣赏2019-7-22水解水解加酶加酶显色剂显色剂未水解未水解显色剂显色剂不显色不显色显色显色5 5、测定方法、测定方法（1 1）测定原理）测定原理无农药无农药有农药有农药14谢谢欣赏2019-7-22加入20ml提取试剂提 取 取2g样品（非叶菜类取4g），切碎取 样振荡12min抑制反应将上清液倒入试管中，静止3min，加入50ul酶，3ml样品提取液，50ul显色剂培 养倒入比色杯测定仪器测定15谢

6、谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章16谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章17谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章二、免疫检测技术二、免疫检测技术Pathogen18谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章19谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章20谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章21谢谢欣赏2019-7-2222谢谢欣赏2019-7-2223谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章24谢谢欣赏2019-7-22本节首页本节首页退出本章退出本章25谢谢欣赏2019-7-22复习思考题复习思考题本节首页本节首页退出本章退出本章26谢谢欣赏2019-7-22