红细胞检验PPT优质课件.ppt
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1、临床基础检验学临床基础检验学 血液一般检验血液一般检验Whole BloodV: 45LPH: 7.357.45SG: 1.0501.060第三章第三章 血液一般检验血液一般检验血液的生理功能血液的生理功能运输功能运输功能免疫功能免疫功能酸碱平衡酸碱平衡电解质平衡电解质平衡新陈代谢新陈代谢内环境平衡内环境平衡第三章第三章 血液一般检验血液一般检验红细胞红细胞Red Blood Cell/Erythrocyte白细胞白细胞White Blood Cell/Leucocyte血小板血小板Platelet第三章第三章 血液一般检验血液一般检验Section 1:红细胞检查红细胞检查第三章第三章 血液
2、一般检验血液一般检验HematopoiesisHematopoietic stem cell第一节第一节 红细胞检查红细胞检查u红细胞是血液中数量最多的血细胞;红细胞是血液中数量最多的血细胞;u红细胞平均寿命是红细胞平均寿命是120天天,衰老和退化红细胞衰老和退化红细胞经脾脏破坏;经脾脏破坏;u膜的通透性、可塑变形性、悬浮稳定性。膜的通透性、可塑变形性、悬浮稳定性。第一节第一节 红细胞检查红细胞检查红细胞生理学红细胞生理学红细胞形态特征:红细胞形态特征:双凹圆盘形,平均直径双凹圆盘形,平均直径7.2m,厚,厚约约2m,无核。,无核。红细胞主要成分:红细胞主要成分:血红蛋白占血红蛋白占34%-能
3、能结合多种气体结合多种气体,主要主要是是O2和和CO2 , 并协同并协同维持酸碱平衡。维持酸碱平衡。 红细胞生理学红细胞生理学第一节第一节 红细胞检查红细胞检查血液分析仪法:血液分析仪法:利用电阻抗和利用电阻抗和( (或或) )光散射原理。光散射原理。手手工显微镜法:工显微镜法:用等渗稀释液将血液稀释一定倍用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后,滴入血细胞计数盘,然后于显微镜下,计数数后,滴入血细胞计数盘,然后于显微镜下,计数一定体积范围内的红细胞数,经换算求得每升血液一定体积范围内的红细胞数,经换算求得每升血液的红细胞数目,即红细胞计数结果(浓度)。的红细胞数目,即红细胞计数结果(浓度)。红细胞计
4、数红细胞计数一、红细胞计数一、红细胞计数红细胞计数红细胞计数一、红细胞计数一、红细胞计数v器材器材:生物显微镜生物显微镜微量吸液管微量吸液管Neubauer板板专用盖玻片专用盖玻片v试剂试剂:Hayem稀释液稀释液氯化钠氯化钠-调节渗透浓度;调节渗透浓度;硫酸钠硫酸钠-调节渗透浓度,防止红细胞聚集;调节渗透浓度,防止红细胞聚集;氯化汞氯化汞-防腐剂,有毒。防腐剂,有毒。红细胞计数:手工显微镜法红细胞计数:手工显微镜法一、红细胞计数一、红细胞计数红细胞计数:手工显微镜法红细胞计数:手工显微镜法一、红细胞计数一、红细胞计数改良改良NeubauerNeubauer计数板计数板红细胞计数:手工显微镜法
5、红细胞计数:手工显微镜法一、红细胞计数一、红细胞计数v 两个计数室两个计数室, 计数室高计数室高 。v 计数室各边长计数室各边长 ,被分为被分为9个大方格。个大方格。v 中央大方格用双线划分为中央大方格用双线划分为 ,位于正中,位于正中和四角的和四角的5格中方格是红细胞和血小板计数区,每格中方格是红细胞和血小板计数区,每个中方格又被分为个中方格又被分为 。v 四角的大方格是白细胞计数区,每个大方格被划四角的大方格是白细胞计数区,每个大方格被划分为分为 。 0.1mm3.0mm25个中方格个中方格16个小方格个小方格16个中方格个中方格红细胞计数:手工显微镜法红细胞计数:手工显微镜法第一节第一节
6、 红细胞检查红细胞检查第一节第一节 红细胞检查红细胞检查1. 准备:准备:取试管取试管1支,加入红细胞稀释液支,加入红细胞稀释液2.0ml。2. 采血:采血:以毛细血管采血法以毛细血管采血法,采取外周血采取外周血10l。3. 稀释:稀释:将采血加入红细胞稀释液将采血加入红细胞稀释液,稀释稀释200倍。倍。4. 充池:充池:充池以前务必充分混匀稀释计数血液。充池以前务必充分混匀稀释计数血液。5. 计数:计数:静置静置2min后以低倍镜计数中间大方格的四后以低倍镜计数中间大方格的四角和中央角和中央5个中方格内的红细胞。个中方格内的红细胞。红细胞计数:手工显微镜法红细胞计数:手工显微镜法一、红细胞计
7、数一、红细胞计数压线细胞:数上不数下压线细胞:数上不数下 数左不数右数左不数右4 4 3 2 3 3 2 32 2 1 2 2 2 1 2 1 2 1 21 2 1 24 3 1 34 3 1 3 红细胞计数:手工显微镜法红细胞计数:手工显微镜法一、红细胞计数一、红细胞计数红细胞红细胞 /L= 5个中方格内红细胞个中方格内红细胞报告方式报告方式 RBC(/L)= *.* 1012/L106/L5102005个中方格内红细胞数个中方格内红细胞数1001012/L= =红细胞计数:手工显微镜法红细胞计数:手工显微镜法一、红细胞计数一、红细胞计数红细胞计数红细胞计数质量保证质量保证u技术误差:由于操
8、作不规范和技术不熟练所造成的误差技术误差:由于操作不规范和技术不熟练所造成的误差u仪器误差仪器误差u计数域误差计数域误差一、红细胞计数一、红细胞计数正常参考值正常参考值男男 性性: (4.005.50) 1012/L 女女 性性: (3.505.00) 1012/L新生儿新生儿: (6.007.00) 1012/Lu高于高于6.86.810101212/L/L应采取相应的治疗措施!应采取相应的治疗措施!u低于低于3.53.510101212/L/L可以诊断贫血!可以诊断贫血!u低于低于1.51.510101212/L/L应考虑输血!应考虑输血!红细胞计数红细胞计数一、红细胞计数一、红细胞计数红
9、细胞计数的临床意义红细胞计数的临床意义1.年龄与性别差异2.神经与精神因素3.剧烈的体力运动4.气压氧含量影响5.妊娠中后期变化( (一一).).生理性变化生理性变化红细胞计数红细胞计数一、红细胞计数一、红细胞计数1.急慢性失血丢失2.红细胞寿命缩短3.造血原料的不足4.骨髓造血的减退( (二二).).病理性变化病理性变化降 低升 高1.原发性红细胞增多2.继发性红细胞增多3.相对性红细胞增多红细胞计数的临床意义红细胞计数的临床意义红细胞计数红细胞计数一、红细胞计数一、红细胞计数血红蛋白是微红色的胶体物质血红蛋白是微红色的胶体物质,分子量分子量64458,呼呼吸载体,每克血红蛋白可携带氧吸载体
10、,每克血红蛋白可携带氧1.34ml。血红蛋。血红蛋白的形成发生在人体有核红细胞及网织红细胞内。白的形成发生在人体有核红细胞及网织红细胞内。二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定血红蛋白测定血红蛋白测定血红蛋白由四个亚基构成,血红蛋白的每个亚基由一条肽链和一个血红素分子构成,肽链在生理条件下会盘绕折叠成球形,把血红素分子抱在里面,这条肽链盘绕成的球形结构又被称为珠蛋白。血红素是由原卟啉和铁原子组成的一种结合物。 99%Hb铁原子呈Fe2+状态还原Hb,1%Hb铁原子呈Fe3+状态高铁Hb。血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定RBC and Hemoglobin Globin pro
11、tein consisting of 4 polypeptide chains One heme pigment attached to each polypeptide chain each heme contains an iron ion (Fe+2) that can combine reversibly with one oxygen molecule二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定血红蛋白分子结构二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定血红蛋白合成的调节血红蛋白合成的调节红细胞生成素红细胞生成素(EPO)(EPO):促进血红素和促进血红素和HbHb合成合成. .雄激素雄激素( (睾酮睾酮)
12、 ):促进促进HbHb的合成的合成. .高铁血红素:高铁血红素:减少血红素的合成减少血红素的合成. .血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定在正常人中各种血红蛋白的含量为:在正常人中各种血红蛋白的含量为:成人主要血红蛋白:成人主要血红蛋白:HbA(22)占占95%以上以上成人次要血红蛋白:成人次要血红蛋白:HbA2 (22 ) 占占2% - 3%胎儿主要血红蛋白:胎儿主要血红蛋白:HbF ( 22 ) 占占1%以下以下血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定氧合血红蛋白:氧合血红蛋白:oxyhemoglobin, HbO2还原血红蛋白:还原血红蛋白:reduc
13、ed hemoglobin, Hbred碳氧血红蛋白:碳氧血红蛋白:carboxyhemoglobin, HbCO高铁血红蛋白:高铁血红蛋白:hemiglobin, Hi其他类衍生物其他类衍生物:SHb血红蛋白存在形式血红蛋白存在形式血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定 红细胞衰老破坏以后,血红蛋白分子降解为红细胞衰老破坏以后,血红蛋白分子降解为珠珠蛋白和血红素。蛋白和血红素。 血红素中的铁由血红素中的铁由单核单核- -吞噬细胞系统吞噬细胞系统细胞加工处细胞加工处理,回到血液循环,与运铁蛋白结合进入铁代谢理,回到血液循环,与运铁蛋白结合进入铁代谢库。库。珠蛋白经酶分解成氨基
14、酸,可再参与合成蛋白质珠蛋白经酶分解成氨基酸,可再参与合成蛋白质和多肽和多肽。血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定n 氰化高铁血红蛋白法氰化高铁血红蛋白法n 十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠(SDS)测定法测定法n 碱羟血红蛋白法碱羟血红蛋白法(575)n 叠氮高铁血红蛋白法叠氮高铁血红蛋白法n 沙利血红蛋白法(淘汰沙利血红蛋白法(淘汰)血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定 除除SHb外,外,Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白,红蛋白, 再与再与 CN- 结合,结合, 生成稳定的棕红色氰生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白化高铁血红蛋白H
15、iCN,吸收峰为,吸收峰为540nm。毫摩。毫摩尔消光系数为尔消光系数为44Lmmol-1 cm-1。因此根据标本。因此根据标本的吸光度,即可求得血红蛋白总量的吸光度,即可求得血红蛋白总量(不含不含SHb)。氰化高铁血红蛋白法氰化高铁血红蛋白法血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定Hb(FeHb(Fe2+2+)+Fe)+Fe3+3+(CN)(CN)3-3-Hi(FeHi(Fe3+3+)+Fe)+Fe2+2+(CN)(CN)4-4-Hi(FeHi(Fe3+3+)+CN)+CN- -Hi(FeHi(Fe3+3+)CN)CN氰化高铁血红蛋白法氰化高铁血红蛋白法血红蛋白测定血红蛋白测
16、定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定 HiCN法操作简单、显色快、结果稳定可靠,是法操作简单、显色快、结果稳定可靠,是国际血液国际血液学标准化委员会学标准化委员会(International Council for Standardization in Haematology,ICSH )、)、国际临床化学联合会和国际病国际临床化学联合会和国际病理学会推荐的理学会推荐的血红蛋白测定国际标准参考方法。血红蛋白测定国际标准参考方法。注意:注意:KCN剧毒剧毒,使用管理不当可造成公害。,使用管理不当可造成公害。高白细胞和高球蛋白血症可致试剂混浊,高白细胞和高球蛋白血症可
17、致试剂混浊,HbCO转化慢转化慢。血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定除除SHb外,血液中外,血液中Hb可与低浓度可与低浓度SDS作用,生成作用,生成SDS-Hb棕棕红色化合物。其吸收曲线波峰在红色化合物。其吸收曲线波峰在538nm。操作简单,呈色稳定,准确性和精确性符合要求。操作简单,呈色稳定,准确性和精确性符合要求。无公害无公害,在全国临床检验方法学学术会议上,被推荐为次选方法。在全国临床检验方法学学术会议上,被推荐为次选方法。SDS本身质量差异较大且本身质量差异较大且SDS破坏白细胞破坏白细胞,不适于同时有计,不适于同时有计数白细胞和数白细胞和Hb定量的血细胞分析仪使
18、用。定量的血细胞分析仪使用。十二烷基硫酸钠法十二烷基硫酸钠法血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定 正常参考值正常参考值: 成年男性成年男性: 120-160 g/L 成年女性成年女性: 110-150 g/L 新新 生生 儿儿: 170-200 g/L 70岁以上老年男性岁以上老年男性: 94-122 g/L 70岁以上老年女性岁以上老年女性: 87-112 g/L血红蛋白测定血红蛋白测定二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定 红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义升升 高高降降 低低生理性生理性初生儿初生儿精神因素精神因素剧烈体力运剧烈体力运( (
19、劳劳) )动动气压降低气压降低妊娠中后期妊娠中后期病理性病理性原发性原发性继发性继发性相对性相对性贫血贫血丢失过多丢失过多寿命缩短寿命缩短原料不足原料不足造血功能减退造血功能减退血细胞比容:血细胞比容: 是指在一定条件下经离心沉淀是指在一定条件下经离心沉淀压紧的红细胞压紧的红细胞在在全血标本中全血标本中所占体积的比值所占体积的比值。有的又称为红细胞压。有的又称为红细胞压积或者红细胞体积分数。积或者红细胞体积分数。三、血细胞比容测定三、血细胞比容测定hematocrit, Hct、Ht; packed cell volume, PCV测测 定定 方方 法法q 手工离心法:手工离心法: Wintr
20、obe法:法:管长管长110mm,内径,内径3mm,离心力,离心力2264g 微量法:微量法:管长管长75mm,内径,内径0.81.0mm,离心力,离心力10000g(WHO首选的常规方法)首选的常规方法)q 仪器分析法:仪器分析法:红细胞计数红细胞计数 x 红细胞平均体积。红细胞平均体积。q 其它方法:其它方法:折射计法、粘度法、放射性核素法等折射计法、粘度法、放射性核素法等 其中放射性核素法曾被其中放射性核素法曾被ICSH定为参考方法定为参考方法三、血细胞比容测定三、血细胞比容测定血细胞比容结果判断血细胞比容结果判断三、血细胞比容测定三、血细胞比容测定方法学评价q手工离心法:手工离心法:不
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