植物组织培养-ppt课件.ppt（38页）

1、植物组织培养植物组织培养取一部分植物组织,在无菌的条件下接种在培养基上,给予一定的温度和光照,使之产生愈伤组织,或进而生根发芽,培养为成熟植株的技术。一般不需要光(2)细胞分化：在植物的个体发育过程中，细胞在_、_和生理功能上出现_的过程。全能性 形态 结构 稳定性差异 1植物组织培养的基本过程(1)理论基础：植物细胞的_。(3)基本过程愈伤组织：由离体的植物组织或细胞经 形成的一种 的活的薄壁细胞团组成的新生组织。脱分化：又叫去分化，是由_的植物组织或细胞产生_的过程。再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成_等器官的过程。脱分化 相对没有分化 高度分化 愈伤组织 根或芽 植物组织培养的条件无菌

2、环境一定的温度一定的光照含有全部营养成分的培养基防止外植体带菌、保证培养基及接种器具彻底灭菌、严格遵守无菌操作规程适时MS培养基适量空气适合的PH植物激素比例合适适宜的外植体MS培养基配方表：由 、 和 三大成分组成 大量元素微量元素有机成分其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要MS培养基中各成分的作用成分作用微量和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压甘氨酸、维生素、烟酸、肌醇等满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影响后所产生的特殊营养需求植物激素和人工合成的植物激素天然植物激

3、素植物激素类似物生长素萘乙酸（NAA）细胞分裂素苄基腺嘌呤（BA）植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间长，作用效果明显。生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的相互作用比例结果细胞分裂素浓度生长素浓度细胞分裂素浓度=生长素浓度细胞分裂素浓度生长素浓度细胞分裂素浓度=生长素浓度细胞分裂素浓度生长素浓度诱导根的形成诱导芽的形成愈伤组织不分化NAA菊花组织培养操作步骤:制备离体植物组织接种 培养 培养 移栽和定植取无菌培养的菊花幼苗用无菌镊子和无菌解剖刀切成几段,或取自然生长的茎充分

4、,用 清洗后,切成几段,每段至少有张叶片 在 旁,将切取的茎段接种到培养基中,盖上 。 在日光灯下保持1825 的温度培养,每天 不少于14.5 h,培养(23周后)至长出 在 条件下,将丛状苗转入培养基中,在适宜条件下继续培养 待生根后,将苗移至 中,逐渐降低 进行。最后转移至土中培养( ) 消毒无菌水1酒精灯火焰生芽封口膜生芽光照丛状苗生根无菌生根草炭土或蛭石湿度锻炼定植菊花组织培养理论依据基本过程培养基影响因素选材（细胞类型）幼苗处理自然生长茎段消毒植物细胞全能性MS培养基、生根、生芽培养基材料种类、营养、激素、pH、温度、光照体细胞降低湿度锻炼70%乙醇、5%次氯酸钠浸泡，无菌水冲洗此

5、时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的光能自养。在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程1、高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？2、培养过程中为什么需要进行光照思考:培养基的灭菌；（ ）外植体的消毒；（ ）接种的无菌操作；（ ）无菌箱中的培养；（ ）移栽到草炭土或蛭石中进行湿度锻炼。（ ）1、在整个植物组培的操作过程中，是如何来实现无菌环境的？高压蒸汽灭菌酒精、次氯酸钠超净台酒精灯火焰旁无菌箱定期消毒生存环境消毒思考:1、外植体带菌2、培养

6、基及接种器具灭菌不彻底3、接种操作时带入4、环境不清洁污染途径 植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各种营养物质，这些营养物质同样为细菌等微小的生物提供了适合的营养。在这种培养基上，细菌等微小的生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此，植物组织培养要想取得成功，必须有效地防止细菌等的污染，保证培养材料、培养基、培养用具完全无菌。为了达到这一要求，就要在植物组织培养过程中进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。 生长素细胞分裂素比值结果 比值高时比值低时含量少且比值适中2、激素的用量比例对细胞分裂和

7、分化的影响促根分化，抑芽形成促芽分化，抑根形成促进愈伤组织生长植物组织培养时，使用人工合成的激素，还是植物中存在的天然激素？为什么？人工合成的激素，原因：植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间长，作用效果明显。【典例】辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图。图中和分别表示辣椒组织培养中细胞的 和 过程。图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值 (选填 “高”或“低”)时,有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时

8、,应采取的灭菌方法是 。图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是 ，除此以外，还需用到 。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时,常用的酶是纤维素酶和 。脱分化再分化琼脂低高压蒸汽灭菌70%果胶酶5%次氯酸钠溶液2、下面是宁夏农林科学院进行苹果试管苗培养的一般过程:请填写ac所表示的内容。a. ； b. ；c. 。实验室一般使用保存的培养基母液来制备MS固体培养基,配制母液时,、和有机物要浓缩510倍。该过程中a、c的启动关键在于培养基中所加 和 的浓度配比。离体的植物细胞能发育成完整植株的原因是 。醋杆菌是生产苹果醋必用的菌种,可以从食醋中分离得到纯化的醋杆菌。扩大培养醋杆菌时,一般采用平板倒置培养,

9、原因是 。脱分化愈伤组织再分化大量元素微量元素生长素细胞分裂素植物细胞具有全能性 防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染3、为了探究6-BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在MS培养基中加入6-BA和IAA，配制成四种培养基(见下表)，灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率(m)，以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)，结果如下表。培养基编号浓度/mgL1m/%n/个6BAIAA10.5076.73.120.177.46.130.266.75.340.560.05.0回答下列问题：按照植物的需求

10、量，培养基中无机盐的元素可分为_和_两类。上述培养基中，6B-A属于_类生长调节剂。在该实验中，自变量是_，因变量是_，从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是_号培养基。为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入_(填“6-BA”或“IAA”)。大量元素微量元素细胞分裂素IAA的浓度菊花再生丛芽外植体的比率和外植体上的丛芽平均数16-BA制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用_蘸取少量的稀释液，在MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分离操作，正确的是_。接种环B2017/4 回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关

11、的问题：泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与_发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光程为1cm 的_，在550nm 光波下测定光密度值，与由一定浓度梯度亚硝酸钠制作的_比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐。在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和_环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解。假丝酵母对氨基苯磺酸比色杯标准曲线酸性果胶酶细胞破裂，细胞内营养物质外流使乳酸菌快速获得营养物质喜

12、好氧的不耐酸涂布分离稀释酸碱指示剂乙醇2020/1腐烂的水果中含产果胶酶的微生物较多涂布分离（或划线分离）水果组织软化疏松及细胞受损95%乙醇提高果胶酶的稳定性固定化的方法固定化所用的介质2019/4达到设定的温度或压力值抽滤将淀粉分解成糖作为碳源C水解圈直径与菌落直径上清液2018/112018/4回答与果胶、淀粉等提取和利用有关的问题：某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。某小组开展了该植物综合利用的研究。果胶提取工艺研究结果表明，原料先经过一段时间沸水漂洗的果胶得率（提取得到的果胶占原料质量的百分率）显著高于常温水漂洗的果胶得率，最主要原因是沸水漂洗_ （A有助于清洗杂质和去除可溶性

13、糖 B使植物组织变得松散 C使有关酶失活 D有利细胞破裂和原料粉碎制浆）。在淀粉分离生产工艺研究中，为促进淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝剂（乳酸菌菌液），其菌株起重要作用。为了消除絮凝剂中的杂菌，通常将生产上使用的菌液，采用_，进行单菌落分离，然后将其_，并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。在用以上提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题可添加_使果胶彻底分解成半乳糖醛酸，再添加_，以解决汁液浑浊和沉淀问题。在建立和优化固定化酶反应器连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，然后主要优化各固定化酶反

14、应器中的_（答出2点即可）、反应液pH和酶反应时间等因素。其中，酶反应时间可通过_来调节。C划线分离法（或涂布分离法）扩大培养果胶酶和果胶甲酯酶淀粉酶使淀粉水解固定化酶的量、反应液温度控制反应器液体流速201711浙江生物选考：回答与酿酒和制醋有关的问题:为了获得优良的酿酒红曲霉菌株，将原菌株的孢子诱变处理后制成较稀浓度的单孢子悬液，这样做的目的是在培养时有利于获得_。大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后，用某念旧酵母进行酒精发酵，发酵完毕后得到新鲜红曲酒，酒中乙醇浓度不超过15%。其主要原因是当发酵液中的乙醇浓度接近15%时，_(A.乙醇氧化逐渐增强直至平衡 B.葡萄糖分解逐渐增强直至平衡 C.乙醇氧

15、化逐渐减弱直至停止 D.葡萄糖分解逐渐减弱直至停止)。已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色，采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄糖含量的步骤如下：第一步，标准曲线的制作。用蒸馏水配置_，与蒽酮试剂反应后，用比色计测定，并制作以_的标准曲线。第二步，样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色，其目的是_。第三步，样品测定与计算。影响红曲酒风味的主要因素,除了温度、pH、氧气等环境因素外,还有_(答出2点即可)。在红曲醋生产工艺中,将适量的红曲酒、水、醋化醋杆菌等混合。再添加一定量谷壳糠等制成松散的发酵料，其目的是_，以利于醋酸发酵。单菌落C一系列浓度的葡萄糖标准溶液葡萄糖浓度与光密度值关系排除原有颜色的干扰不同的菌株、不同的原料增加通气性