植物病原细菌研究方法-ppt课件.ppt（114页）

1、植物保护学研究方法系列专题植物保护学研究方法系列专题内容提纲：内容提纲：细菌的基本形态特征常规细菌生理生化检测方法细菌种类鉴定方法植物病原细菌检测和细菌病害诊断方法有益细菌的利用研究 细菌的基本形态特征细菌的基本形态特征 细菌细菌（bacteriabacteria）是单细胞原核微生物，）是单细胞原核微生物，个体微小，形态简单，以二等分裂方式繁殖。个体微小，形态简单，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，细菌分布最广、数量最多。在自然界中，细菌分布最广、数量最多。细菌的形态和大小细菌的形态和大小细菌的细胞结构细菌的细胞结构细菌的繁殖与群体形态细菌的繁殖与群体形态（一）细菌的大小（一）细菌的大小细菌大小

2、的测定：细菌大小的测定：(1)测量：测量： 测微尺测微尺(2)长度单位：长度单位：微米微米(m)(3)表示：表示： 球菌：球菌：直径直径 杆菌：杆菌： 宽宽长长 螺菌：螺菌： 宽、长、螺距宽、长、螺距 通常通常球菌直径球菌直径：0.2 0.2 1.51.5 mm， 杆菌杆菌: :长长1 1 5 m, 5 m, 宽宽0.50.5 1 m 1 m。例如：例如：大肠杆菌：平均长度：大肠杆菌：平均长度：2 m 2 m ； 宽度宽度0 0.5.5mm 15001500个大肠杆菌头尾相接等于个大肠杆菌头尾相接等于3 3mm;mm; 10 109 9个大肠杆菌重个大肠杆菌重1 1 mg.mg. 由于菌种由于

3、菌种不同不同，细菌的大小存在很大的差异；对于同，细菌的大小存在很大的差异；对于同一个菌种，细胞的大小也常随着菌龄变化。另外，对于同一个菌种，细胞的大小也常随着菌龄变化。另外，对于同一个菌种染色前后其细胞大小都有所不同。所以，有关细一个菌种染色前后其细胞大小都有所不同。所以，有关细菌大小的记载，常是平均值或代表性数值。菌大小的记载，常是平均值或代表性数值。 细菌细胞的大小细菌细胞的大小（二）、（二）、 细菌的形态细菌的形态 不同细菌的形态可以说是千差万别，丰富多彩，但不同细菌的形态可以说是千差万别，丰富多彩，但就单个有机体而言，其就单个有机体而言，其基本形态基本形态可分为可分为球状球状、杆状杆状

4、与与螺螺旋状旋状三种三种. . 除了球菌、杆菌、蛆旋菌三种基本形态外，还有许除了球菌、杆菌、蛆旋菌三种基本形态外，还有许多具其他形态的细菌。例如柄杆菌细胞上有柄、菌丝、多具其他形态的细菌。例如柄杆菌细胞上有柄、菌丝、附器等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性附器等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性的细柄；球衣菌能形成衣峭，杆状的细胞呈链状排列在的细柄；球衣菌能形成衣峭，杆状的细胞呈链状排列在衣鞘内而成为丝状衣鞘内而成为丝状, ,而支原体由于只有细胞膜，没有纫胞而支原体由于只有细胞膜，没有纫胞壁，故细胞柔软，形态多变，具有高度多形性。另外，壁，故细胞柔软，形态多变，具有高度多形性。

5、另外，人们还发现了细胞呈星形和方形的细菌。人们还发现了细胞呈星形和方形的细菌。1. 球 菌单球菌单球菌双球菌双球菌链球菌链球菌四联球菌四联球菌八叠球菌八叠球菌 葡萄球菌葡萄球菌2.2.杆菌杆菌 杆菌是细菌中种类最多的类型杆菌是细菌中种类最多的类型, ,因菌种不同因菌种不同, ,菌体细胞的长短、粗细等都有所差异。菌体细胞的长短、粗细等都有所差异。 杆菌的形态：杆菌的形态：短杆状、长杆状、棒杆状、短杆状、长杆状、棒杆状、梭状、梭杆状、月亮状、分枝状、竹节状等；梭状、梭杆状、月亮状、分枝状、竹节状等；按杆菌细胞的排列方式则有链状、栅状、按杆菌细胞的排列方式则有链状、栅状、“八八”字状以及有鞘衣的丝状

6、等。字状以及有鞘衣的丝状等。2.2.杆杆 菌菌短杆菌长杆菌梭状芽孢杆菌链状杆菌单杆菌2.2.杆杆 菌菌杆菌细胞两端的形态特征杆菌细胞两端的形态特征2.2.杆杆 菌菌螺旋菌弧菌螺旋体3 3、螺旋菌、螺旋菌 细菌的特殊形态：细菌的特殊形态： 柄细菌、肾形菌、臂微菌、网格硫细柄细菌、肾形菌、臂微菌、网格硫细 菌、贝日阿托氏菌菌、贝日阿托氏菌(丝状丝状)、具有子实体的粘、具有子实体的粘细菌、三角形、方形等特殊形态的细菌。细菌、三角形、方形等特殊形态的细菌。细菌的特殊形态细菌的特殊形态二、细菌的细胞结构二、细菌的细胞结构u基本结构包括：基本结构包括：细胞壁、细胞膜、细胞质、核区、细胞壁、细胞膜、细胞质、

7、核区、间体、核糖体、气泡和储藏物。间体、核糖体、气泡和储藏物。 u特殊结构包括：特殊结构包括：荚膜、鞭毛、纤毛、芽孢。荚膜、鞭毛、纤毛、芽孢。 细菌细胞结构细菌细胞结构1.1.固体斜面培养固体斜面培养 2. 2. 液体培养基液体培养基3. 3. 半固体培养半固体培养常规细菌生理生化检测方法常规细菌生理生化检测方法细菌细胞壁的结构细菌细胞壁的结构v革兰氏革兰氏阳性阳性菌细胞壁：菌细胞壁：由肽聚糖和磷壁酸组成由肽聚糖和磷壁酸组成 肽聚糖肽聚糖:占3070% ,不同菌种中肽聚糖(肽链)组分不同。v革兰氏革兰氏阴性阴性菌细胞壁：菌细胞壁：分内壁层和外壁层。分内壁层和外壁层。 内壁层：内壁层：紧贴胞膜,

8、仅由12层肽聚糖分子构成,占细胞壁干重5-10%,无磷壁酸。外壁层：外壁层：位于肽聚糖层的外部。 脂多糖; 脂蛋白、 包括: 蛋白质层: 基质蛋白、 外壁蛋白; 磷脂.v革兰氏染色的原理革兰氏染色的原理v革兰氏染色原理：革兰氏染色原理：第一步：第一步：结晶紫使菌体着上紫色；结晶紫使菌体着上紫色；第二步：第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内；壁阻留在细胞内；第三步：第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应；应；G G+ + 菌：菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，

9、当乙醇脱色时，细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫- -碘复合物被阻留在细碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色；胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色；GG菌：菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高缩，因其含脂量高, ,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫- -碘复碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。呈红色。 革兰氏染色法是细菌细胞的复

10、合染色法，由丹革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦医生麦医生Hans Christian GramHans Christian Gram于于18841884年年创立创立。基本步骤：基本步骤： 涂片固定涂片固定 结晶紫初染结晶紫初染1min1min 碘液媒染碘液媒染1min1min95%95%乙醇脱色乙醇脱色0.5min0.5min 番红复染番红复染minmin 结果结果: : 革兰氏革兰氏阳性菌阳性菌紫色紫色； 革兰氏革兰氏阴性菌阴性菌红色红色。革兰氏染色法：革兰氏染色法：实验材料实验材料 待测细菌待测细菌 枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（G+） 甘蓝黑腐病菌（甘蓝黑腐病菌（G-） 染液：染

11、液：结晶紫草酸铵染剂、鲁戈尔碘液、复染剂（番红结晶紫草酸铵染剂、鲁戈尔碘液、复染剂（番红O） 用具：用具：移植饵、清洁无脂载玻片移植饵、清洁无脂载玻片清洁无脂载玻片阳性对照菌阳性对照菌（紫色或蓝黑色）（紫色或蓝黑色）待待 测测 菌菌阴性对照菌阴性对照菌（红色）示范图示范图对照菌呈现正确颜色，实验才为成功对照菌呈现正确颜色，实验才为成功涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色1min水洗、吸干镜检镜检制备涂片标本制备涂片标本染色染色阳性菌阳性菌阴性菌阴性菌革兰氏染色法革兰氏染色法革兰氏染色阳性革兰氏染色阳性枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 注：注： （1）、）、实验细菌为活跃生长期的培养物；实验细菌为活跃生长期

12、的培养物； （2）、）、菌液不能太浓，涂片不宜过厚，造成假阳性；菌液不能太浓，涂片不宜过厚，造成假阳性； （3）、）、火焰固定涂片，以载玻片不烫手为宜；火焰固定涂片，以载玻片不烫手为宜； （4）、）、脱色时间把握好，过长，假阴性；过短，假阳性。脱色时间把握好，过长，假阴性；过短，假阳性。鞭毛：鞭毛：某些细菌表面由细胞内生出的细长、波曲、某些细菌表面由细胞内生出的细长、波曲、毛发状的结构。毛发状的结构。鞭毛具有运动功能，一般认为鞭毛靠鞭毛丝旋转而鞭毛具有运动功能，一般认为鞭毛靠鞭毛丝旋转而动，动，它们是细菌的它们是细菌的“运动器官运动器官”。鞭毛的长度：鞭毛的长度：一般为一般为151520 20

13、 m m，最长可达，最长可达70 70 m m 。鞭毛的直径：鞭毛的直径：为为0.010.010.02 0.02 m. m. 不同细菌的鞭毛数目和着生位置不同，鞭毛数目一不同细菌的鞭毛数目和着生位置不同，鞭毛数目一般一至数十条。般一至数十条。细菌鞭毛染色鞭毛的着生方式：鞭毛的着生方式：周生周生鞭毛的化学组成：鞭毛的化学组成： 主要由鞭毛蛋白构成，还含有少量的多糖、主要由鞭毛蛋白构成，还含有少量的多糖、脂类和核酸等。脂类和核酸等。鞭毛起源于细胞质膜内侧的基粒。鞭毛起源于细胞质膜内侧的基粒。 细胞质区内有一个颗粒状小体，此小体为细胞质区内有一个颗粒状小体，此小体为基粒，鞭毛自基粒长出穿过细胞壁延伸

14、到细胞基粒，鞭毛自基粒长出穿过细胞壁延伸到细胞外部。外部。 鞭毛的结构：鞭毛的结构： 鞭毛丝鞭毛丝鞭毛鞭毛 鞭毛钩鞭毛钩 基体基体鞭毛的观察：鞭毛的观察：电镜电镜特殊鞭毛染色，在光学显微镜下观察特殊鞭毛染色，在光学显微镜下观察半固体穿刺培养半固体穿刺培养从固体培养基上的菌落形态判断从固体培养基上的菌落形态判断一般情况下：一般情况下： 菌落形状大，薄且不规则，边缘极不平整，可能有鞭毛。菌落形状大，薄且不规则，边缘极不平整，可能有鞭毛。菌落十分圆滑，边缘平整且相对较厚，可能没有鞭毛。菌落十分圆滑，边缘平整且相对较厚，可能没有鞭毛。 实验菌种及药品实验菌种及药品 1菌种：菌种：枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆

15、菌 2染液染液 染液染液A： 单宁酸单宁酸 5.0g 氯化铁（氯化铁（Fecl36H2O） 1.5g 福尔马林（福尔马林（15） 2.0ml （15%福尔马林：福尔马林：40%甲醛甲醛4ml+蒸馏水蒸馏水6ml） NaOH(1%) 1.0ml 蒸馏水蒸馏水 100ml 染液染液B： 硝酸银硝酸银 2g 蒸馏水蒸馏水 100ml三、染色方法：三、染色方法： 银盐染色法银盐染色法 硝酸银溶于蒸馏水中。取硝酸银溶于蒸馏水中。取10ml作回滴用，向其余作回滴用，向其余90ml硝酸银溶液中逐滴加浓氢氧化铵，先形成很浓的沉淀，再硝酸银溶液中逐滴加浓氢氧化铵，先形成很浓的沉淀，再继续滴加浓氢氧化铵至沉淀消失

16、为止。然后慢慢滴入备用继续滴加浓氢氧化铵至沉淀消失为止。然后慢慢滴入备用的硝酸银溶液则出现少量雾状沉淀，但轻轻摇动后，沉淀的硝酸银溶液则出现少量雾状沉淀，但轻轻摇动后，沉淀又消失，再滴入硝酸银溶液，直到摇动后雾状沉淀不再消又消失，再滴入硝酸银溶液，直到摇动后雾状沉淀不再消失为止。此液不耐保存，失为止。此液不耐保存，4小时内染色效果最佳。小时内染色效果最佳。四、鞭毛染色步骤：四、鞭毛染色步骤： （1）将菌株在将菌株在NA斜面上于斜面上于30恒温箱中培养恒温箱中培养17-20小时，取出小时，取出，沿壁管轻轻加入，沿壁管轻轻加入3-5ml的灭菌水掩盖斜面菌苔。的灭菌水掩盖斜面菌苔。斜放静置斜放静置1

17、0分钟分钟，使细菌自然游出，使细菌自然游出，勿摇动勿摇动，备用。，备用。 （2）用移植环取菌悬液于用移植环取菌悬液于无划痕的无脂玻片无划痕的无脂玻片上，倾斜玻片，使上，倾斜玻片，使之成带状，将玻片在空气中之成带状，将玻片在空气中自然风干自然风干。 （3）滴加滴加染液染液A于干燥的涂片上，覆盖涂片，染色于干燥的涂片上，覆盖涂片，染色10-13分钟，分钟，倾去染液，用蒸馏水充分洗去染液；风干后，再滴加倾去染液，用蒸馏水充分洗去染液；风干后，再滴加染液染液B覆盖涂片覆盖涂片染色染色30秒至秒至1分钟分钟，立即用蒸馏水冲洗，放于空气中干燥，在高倍镜，立即用蒸馏水冲洗，放于空气中干燥，在高倍镜或油镜下镜

18、检。或油镜下镜检。 （4）在金色背景下，细菌在金色背景下，细菌鞭毛深褐色到黑色鞭毛深褐色到黑色，菌体浅褐色菌体浅褐色。 菌体菌体鞭毛鞭毛菌体菌体鞭毛鞭毛菌体菌体鞭毛鞭毛芽孢芽孢 概念：概念：某些菌生长到一某些菌生长到一定阶段，细胞内形成一定阶段，细胞内形成一个圆形、椭圆形或卵圆个圆形、椭圆形或卵圆形的内生孢子，是对不形的内生孢子，是对不良环境有较强抵抗力的良环境有较强抵抗力的休眠体。休眠体。 芽孢芽孢能形成芽孢的细菌种类：能形成芽孢的细菌种类： 在杆菌中能形成芽孢的种类在杆菌中能形成芽孢的种类较多，在球菌较多，在球菌和螺旋菌中只有少数菌种可形成芽孢。和螺旋菌中只有少数菌种可形成芽孢。产生芽孢的

19、几个属：产生芽孢的几个属：芽孢杆菌属芽孢杆菌属梭状芽孢杆菌属梭状芽孢杆菌属芽孢乳杆菌属芽孢乳杆菌属生孢八叠球菌属（其中的一个种）生孢八叠球菌属（其中的一个种）芽孢芽孢的形态及其的形态及其在细胞中的位置：在细胞中的位置： A A 近中央近中央 B B 末端末端 C C 中央中央 细菌芽孢的各种类型细菌芽孢的各种类型芽孢的组成和结构芽孢的组成和结构 芽孢有多层结构，主要包括孢外壁、芽孢衣、皮层和核心芽孢有多层结构，主要包括孢外壁、芽孢衣、皮层和核心.芽孢的结构芽孢的结构芽孢的外壁层厚而致密，主要成分芽孢的外壁层厚而致密，主要成分为脂蛋白，通透性差为脂蛋白，通透性差,不易着色。不易着色。核心含有大量

20、的核心含有大量的DNADNA、RNARNA、蛋白质蛋白质酶等物质，还含有酶等物质，还含有2,62,6吡啶二羧吡啶二羧酸酸（DPADPA）,DPA,DPA是芽孢特有的成分。是芽孢特有的成分。一般以一般以 DPADPACaCa的形式存在的形式存在。皮层主要含芽孢肽聚糖、皮层主要含芽孢肽聚糖、 DPADPACaCa，皮层体积大，比较致密。皮层体积大，比较致密。芽孢平均含水量低芽孢平均含水量低, ,约约40%.40%.芽孢的特性芽孢的特性: :具有很强的具有很强的抗热、抗干燥、抗辐射、抗化学药物能力。抗热、抗干燥、抗辐射、抗化学药物能力。 含水量低、壁厚而致密，通透性差含水量低、壁厚而致密，通透性差,

21、 ,不易着色。不易着色。新陈代谢几乎停止，处于休眠状态。新陈代谢几乎停止，处于休眠状态。一个芽孢萌发产生一个个体。一个芽孢萌发产生一个个体。芽孢的抗热机制：芽孢的抗热机制： 目前尚不清楚，但可能与以下因素有关，如含水量低、目前尚不清楚，但可能与以下因素有关，如含水量低、壁厚而致密，芽孢中的酶分子量小，比较耐热。壁厚而致密，芽孢中的酶分子量小，比较耐热。芽孢染色芽孢染色（孔雀绿藏红染色） 染剂染剂 孔雀绿水溶液孔雀绿水溶液 5 染剂染剂 藏红水溶液藏红水溶液 0.5 或或 碱性品红水溶液碱性品红水溶液 0.05染色方法：染色方法： 1、涂片固定；、涂片固定； 2、加染剂、加染剂在酒精灯火焰上加热

22、染色在酒精灯火焰上加热染色1min，勿使染液沸腾和干燥；，勿使染液沸腾和干燥； 3、水洗；、水洗； 4、染剂、染剂染色染色15s； 5、水洗，风干后镜检。菌体染成红色，芽孢染成绿色。、水洗，风干后镜检。菌体染成红色，芽孢染成绿色。芽孢芽孢菌体菌体植物病原细菌的鉴定方法植物病原细菌的鉴定方法菌落特征比较菌落特征比较 常规细菌鉴定方法参考：参考：东秀珠等，常见细菌系统鉴定手册，科学出版社，东秀珠等，常见细菌系统鉴定手册，科学出版社，2001植物病原细菌检测和细菌病植物病原细菌检测和细菌病害诊断方法害诊断方法十字花科软腐病十字花科软腐病瓜萎蔫病瓜萎蔫病肿瘤肿瘤菌溢现象菌溢现象 1、凝集反应、凝集反应

23、v 颗粒性抗原如细菌与其特异性抗体在电解质影响下，很快结合颗粒性抗原如细菌与其特异性抗体在电解质影响下，很快结合成可见的凝集块。成可见的凝集块。 载玻片凝集载玻片凝集反应是最快速的测定方法：在清洁载玻片上加两反应是最快速的测定方法：在清洁载玻片上加两滴生理盐水配的菌悬液，用移植环取少量抗血清与其中一滴菌滴生理盐水配的菌悬液，用移植环取少量抗血清与其中一滴菌悬液混合，另一滴不加血清作为对照。经悬液混合，另一滴不加血清作为对照。经35分钟，可以看到原分钟，可以看到原来均匀悬浮的细菌凝集成团，对照则不发生这种变化。来均匀悬浮的细菌凝集成团，对照则不发生这种变化。 另一种常用方法是另一种常用方法是试管

24、凝集试管凝集反应，虽然没有玻片凝集反应快反应，虽然没有玻片凝集反应快捷，但能测定捷，但能测定血清效价血清效价和作定量研究。和作定量研究。 分子生物学检测技术分子生物学检测技术 2、酶联免疫吸附法、酶联免疫吸附法 （Enzyme linked immune sorbent assay, ELISA）v 该方法是将微量的酶与测定的抗原或抗体结合，大大的提高抗原和该方法是将微量的酶与测定的抗原或抗体结合，大大的提高抗原和抗体反应的灵敏度。抗体反应的灵敏度。 抗体夹心抗体夹心ELISA法通常比其他法通常比其他ELISA方法敏感方法敏感25倍。倍。 先用抗体包被聚苯乙烯微量滴定板孔，然后加测定抗原样本，

25、先用抗体包被聚苯乙烯微量滴定板孔，然后加测定抗原样本，抗原被抗体吸附，然后将酶联抗体加在被吸附的抗原上。最后再抗原被抗体吸附，然后将酶联抗体加在被吸附的抗原上。最后再加酶的底物，酶催化底物而显色，用分光光度计检测。加酶的底物，酶催化底物而显色，用分光光度计检测。 v 利用核酸链间碱基配对利用核酸链间碱基配对核酸杂交来识别特定核酸顺序的方法。核酸杂交来识别特定核酸顺序的方法。 将一个预先分离纯化或合成的已知核酸序列片段，加以标记，就将一个预先分离纯化或合成的已知核酸序列片段，加以标记，就成为成为核酸探针核酸探针(probe)(probe)。 用核酸探针可以探测待查标本核酸中与探针具有互补的碱基顺

26、用核酸探针可以探测待查标本核酸中与探针具有互补的碱基顺序。序。 如果两者有互补顺序则杂交成功如果两者有互补顺序则杂交成功, , 结果阳性结果阳性; ; 若待查若待查标本核酸与探针顺序无关则杂交失败标本核酸与探针顺序无关则杂交失败, , 结果呈阴性。结果呈阴性。由于大多数植物病毒的核酸是由于大多数植物病毒的核酸是RNA, RNA, 其探针为互补其探针为互补DNA DNA (complementary DNA, cDNA)(complementary DNA, cDNA)，称为，称为cDNAcDNA探针探针。 4.1 核酸杂交核酸杂交 核酸杂交核酸杂交 4.2 PCR诊断技术诊断技术聚合酶链式反应

27、聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction, PCR）是一种）是一种体外扩增特异性体外扩增特异性DNA的技术，在短时间内可以大量扩增核酸。的技术，在短时间内可以大量扩增核酸。整个扩增包括整个扩增包括3 3个重复的步骤：（个重复的步骤：（1 1）DNADNA热变性，双链变单链；热变性，双链变单链；（2 2）引物退火，当温度降低时，两个引物分别结合到靶）引物退火，当温度降低时，两个引物分别结合到靶DNADNA的两的两条链的条链的33末端，（末端，（3 3）引物延伸，在）引物延伸，在DNADNA聚合酶的催化下，引物由聚合酶的催化下，引物由5533扩增扩增延长。分别和相对的延长

28、。分别和相对的DNADNA链互补。链互补。在植物病原细菌检测和鉴定中应用的在植物病原细菌检测和鉴定中应用的PCR技术技术供试菌株供试菌株革兰氏反应阳性革兰氏反应阳性杆菌或球菌杆菌或球菌形成丝状细胞形成丝状细胞Streptomyces（链霉菌属）（链霉菌属）形成芽孢形成芽孢36生长，在生长，在7NaCl中生长中生长Curtobacterium短小杆菌属短小杆菌属尿酶尿酶Rhodococcus红球菌属红球菌属Clavibacter棒形杆菌属棒形杆菌属革兰氏反应阴性革兰氏反应阴性不形成芽孢不形成芽孢Bacillus芽孢杆菌属；芽孢杆菌属；Clostridium梭状芽孢杆菌属梭状芽孢杆菌属+-+-植物

29、病原细菌植物病原细菌主要属简要检查方法主要属简要检查方法好氧性或不活泼性好氧性或不活泼性滑行运动，在琼脂平板滑行运动，在琼脂平板上铺开生长，短或长上铺开生长，短或长杆形弯曲、氧化酶阳性杆形弯曲、氧化酶阳性以鞭毛游动以鞭毛游动在在KingsB培养基培养基上产生荧光色素上产生荧光色素发酵性发酵性Cytophaga噬胞菌属；噬胞菌属；Flexibacter屈桡杆菌属屈桡杆菌属+-革兰氏反应阴性革兰氏反应阴性不运动，菌落光滑短不运动，菌落光滑短杆状、氧化酶阴性杆状、氧化酶阴性Flavobacterium黄杆菌属黄杆菌属溶果胶活性溶果胶活性+-Erwinia（软腐组群）（软腐组群）Erwinia（不溶果

30、胶组群）（不溶果胶组群）Pseudomonas（无荧光组群）（无荧光组群）在在1葡萄糖营养琼脂上葡萄糖营养琼脂上为白色菌落，周鞭，致瘤为白色菌落，周鞭，致瘤Agrobacterium土壤杆菌属土壤杆菌属Xanthomonas黄单胞菌属黄单胞菌属在在1葡萄糖营养琼脂上葡萄糖营养琼脂上为黄色菌落，单极鞭为黄色菌落，单极鞭Pseudomonas（荧光组群）（荧光组群）有益细菌的利用研究有益细菌的利用研究u生物防治生物防治 利用其他对植物无害的生物来影响或抑制病原物利用其他对植物无害的生物来影响或抑制病原物的生存和活动，从而降低病害的发生率或严重度。的生存和活动，从而降低病害的发生率或严重度。（1）抗

31、菌作用）抗菌作用(antibiosis)（2）溶菌作用）溶菌作用(lysis)（3）竞争作用）竞争作用(competition)（4）重寄生作用）重寄生作用(hyperparasitism)（5）捕食作用（）捕食作用（predation）（6）交互保护作用）交互保护作用(cross protection)Sir Alexander Fleming discovered the antibiotic penicillin. He had the insight to recognize the significance of the inhibition of bacterial growth

32、in the vicinity of a fungal contaminant when most other scientists probably would have simply discarded the contaminated plates.Alexander Fleming (1881-1955)亚历山大弗莱明英国细菌学家 葡萄球菌 青霉菌 19281928年的一天，弗莱明在他的一间简陋的实验室里研究导致人体发热的葡萄年的一天，弗莱明在他的一间简陋的实验室里研究导致人体发热的葡萄球菌。由于盖子没有盖好，他发觉培养细菌用的琼脂上附了一层青霉菌。这是从球菌。由于盖子没有盖好，他发觉

33、培养细菌用的琼脂上附了一层青霉菌。这是从楼上的一位研究青霉菌的学者的窗口飘落进来的。使弗莱明感到惊讶的是，在青楼上的一位研究青霉菌的学者的窗口飘落进来的。使弗莱明感到惊讶的是，在青霉菌的近旁，葡萄球菌忽然不见了。这个偶然的发现深深吸引了他，他设法培养霉菌的近旁，葡萄球菌忽然不见了。这个偶然的发现深深吸引了他，他设法培养这种霉菌进行多次试验，证明青霉素可以在几小时内将葡萄球菌全部杀死。弗莱这种霉菌进行多次试验，证明青霉素可以在几小时内将葡萄球菌全部杀死。弗莱明据此发明了葡萄球菌的克星明据此发明了葡萄球菌的克星青霉素。青霉素。 由于青霉素的发现和大量生产，拯救了千百万肺炎、脑膜炎、脓肿、败血症由于

34、青霉素的发现和大量生产，拯救了千百万肺炎、脑膜炎、脓肿、败血症患者的生命，及时抢救了许多的伤病员。青霉素的出现，当时曾轰动世界。患者的生命，及时抢救了许多的伤病员。青霉素的出现，当时曾轰动世界。 为了表彰这一造福人类的贡献，弗莱明、钱恩、弗罗里于为了表彰这一造福人类的贡献，弗莱明、钱恩、弗罗里于19451945年共同获得诺年共同获得诺贝尔医学和生理学奖。贝尔医学和生理学奖。 青霉素的发现者青霉素的发现者英国细菌学家弗莱明英国细菌学家弗莱明图中央是青霉菌，周围是致病细菌。距青霉素最远的细菌个大、色浓，图中央是青霉菌，周围是致病细菌。距青霉素最远的细菌个大、色浓，活力十足；距青霉菌较近的细菌个较小

35、、色较浅，活力较差；而最接近青霉活力十足；距青霉菌较近的细菌个较小、色较浅，活力较差；而最接近青霉菌的细菌个最小、色发白，显然已经死亡菌的细菌个最小、色发白，显然已经死亡 葡萄球菌这些形如珍珠的东西就是危害人体健葡萄球菌这些形如珍珠的东西就是危害人体健康的葡萄菌，青霉素能消灭它们。康的葡萄菌，青霉素能消灭它们。 与弗莱明共同获得1945年诺贝尔生理学和医学奖。1940提纯出青霉素澳大利亚病理学家霍华德.弗罗里 平板拮抗测试平板拮抗测试待测细菌待测细菌病原真菌病原真菌注：病原真菌和待测细菌同时接种注：病原真菌和待测细菌同时接种拮抗菌对病原菌的抑制作用拮抗菌对病原菌的抑制作用正常菌丝正常菌丝畸形菌丝畸形菌丝