2023年老高考生物一轮复习第34讲　微生物的培养与应用.pptx

1、第第3434讲微生物的培养与应用讲微生物的培养与应用第十一单元第十一单元2023内容索引强基础强基础 增分策略增分策略增素能增素能 精准突破精准突破悟考情悟考情 演练真题演练真题知考向明考情提素养重考能全国卷内容要求1.阐明无菌技术在微生物培养中的应用2.概述微生物分离和培养的常用方法3.概述测定微生物数量的常用方法4.实验:通过配制培养基、灭菌、接种和培养等实验操作获得纯化的酵母菌菌落5.实验:分离土壤中分解尿素的细菌,并进行计数科学思维分析培养基的成分及其作用,比较平板划线法和稀释涂布平板法的异同科学探究设计实验探究微生物培养的条件近五年全国卷考情2020全国(37)、2019全国(37)

2、、2019全国(37)、2019全国(37)、2018全国(37)、2018全国(37)、2018全国(37)、2017全国(37)社会责任关注对有害微生物的控制及宣传健康生活强基础强基础 增分策略增分策略一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养1.培养基(1)概念:人们按照微生物对的不同需求,配制出供其的营养基质。(2)营养组成:一般都含有和无机盐。此外,还需要满足微生物生长对、氧气以及的要求。营养物质生长繁殖水、碳源、氮源pH特殊营养物质提醒 微生物对主要营养物质的需求特点自养型微生物所需的营养物质主要是无机盐,碳源可来自大气中的CO2;氮源可由含氮无机盐提供,如硝酸盐等。异养型微生物

3、所需的营养物质主要是有机物,即碳源必须由含碳有机物提供,如糖类、脂肪酸等;氮源也主要由有机物提供,如尿素、牛肉膏等,部分异养型微生物也可以利用无机氮源。(3)配制原则7.27.62.无菌技术(1)含义:在培养微生物的操作中,所有防止的方法。(2)常用方法杂菌污染杂菌污染巴氏消毒法灼烧灭菌高压蒸汽灭菌3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)计算:依据配方比例,计算配制100mL的培养基时,的用量。(2)称量:准确地称取。各种成分各种成分称量纸蛋白胨琼脂(5)倒平板:待培养基冷却至左右时,在倒平板。pH高压蒸汽121153050酒精灯火焰附近4.大肠杆菌的纯化培养(1)原理:在培养基上将细菌稀释或分散

4、成,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。(2)常用接种方法法稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释后,将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面,进行培养单个细菌平板划线a.系列稀释操作b.涂布平板操作(3)菌种的保存方法-20冷冻箱4冰箱旁栏边角1.(选修1P17“讨论2、3”)为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?平板冷凝后,为什么要将平板倒置?提示 通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面湿度也比较高,将平板倒置,既可以防止培养基表面的水分过快地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。2.(选修1P17“讨论4

5、”)在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?提示 不能。因为空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生,可能会造成污染。3.(选修1P18“讨论3”)平板划线法在做第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?目的是什么?提示 划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。这样做的目的是将聚集的菌种逐步稀释分散,以便获得单个菌落。易错辨析(1)配制培养基时,应根据微生物的种类调整培养基的pH。()(2)倒

6、平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上。()(3)为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。()(4)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,有时还需要加入一些特殊的物质。() 倒平板时应将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙。为防止杀死菌种,宜待接种环冷却后挑取菌落。 (5)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害。()(6)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。()(7)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时,只要稀释度足够高,就能在培养基表面形成单个菌落。() 接种环应采用灼烧灭菌法进行灭菌。 二、微生物

7、的筛选和计数二、微生物的筛选和计数1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)实验原理脲酶尿素酚红(2)实验流程菌落特征(3)统计细菌数目的方法显微镜直接计数法间接计数法活菌计数法即稀释涂布平板法原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的。通过统计平板上的,就能推测出样品中大约含有多少活菌。一个活菌菌落数提醒一般选用相差不大的平板计算平均值,选用保证菌落数在30300的稀释度下的平板进行计数。设置重复组,增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确,设置三个以上。当两个或多个细胞连在一起时,培养后平板上观察到的只是一个菌落,所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目

8、少,因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。(4)实验结果分析与评价无菌落生长有菌落生长远少于303002.分解纤维素的微生物的分离(1)纤维素酶组成及作用纤维二糖(2)纤维素分解菌的培养基成分及鉴定原理纤维素刚果红红色复合物(3)实验流程纤维素选择培养基鉴别纤维素分解菌(4)分离纤维素分解菌所用两种培养基的比较分离纤维素分解菌的实验中先用培养基,再用培养基。选择培养基为培养基,以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长,而其他绝大多数微生物不能正常生长。鉴别培养基含琼脂,为培养基,细菌可在该培养基上形成肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用于(填“选择”或“鉴别”)培养基。选择鉴别液体固体鉴

9、别易错辨析(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。()(2)从物理性质的角度看,选择培养基多属于固体培养基。()(3)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中,尿素是唯一的氮源。()(4)分解尿素的细菌在分解尿素时,可以将尿素转化为氨,使得培养基的pH降低。()(5)显微镜直接计数法所计数的既有活菌也有死菌。()选择培养基用于筛选微生物。 培养基的pH应升高。 (6)稀释涂布平板法计数的应为活菌数,但实际的活菌数可能少于统计的菌落数。()(7)刚果红可以与纤维素形成透明复合物,所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。()实际的活菌数往往多于统计的菌落数,因为当两个或多个细胞连在一起时,平板

10、上观察到的只是一个菌落。刚果红可与纤维素产生红色复合物,不是透明复合物。长句应答分离分解尿素的细菌的实验中,如何设置对照可以判断培养基是否被污染和选择培养基是否起到了选择作用?提示 判断培养基是否被污染:设置未接种的培养基作为空白对照,若培养基上无菌落生长,说明培养基未被污染。判断选择培养基是否起到了选择作用:设置接种相同接种物的全营养培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)作为条件对照,若对照培养基上长出的菌落明显多于选择培养基上的,则说明选择培养基起到了选择作用。增素能增素能 精准突破精准突破主题一主题二能力解读主题一主题一微生物的实验室培养微生物的实验室培养主题一主题二命题解读主题一主题二角度一、培

11、养基与无菌技术角度一、培养基与无菌技术考向探究考向1培养基类型及判定1.下表所示是某公司研发的一种培养大肠杆菌的培养基配方,请结合所学知识,回答下列相关问题。成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4显色剂(伊红美蓝)琼脂含量10.0g5.0g5.0g2.0g0.2g12.0g将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000mL主题一主题二(1)根据用途划分,该培养基属于培养基,若要分离能分解尿素的细菌,需对培养基作出的最关键的调整是,若还需鉴定分解尿素的细菌,需做出的调整是。(2)从培养基的成分上看,大肠杆菌的同化类型为。该培养基能否分离筛选出大肠杆菌?为什么?。答案 (1)鉴别将蛋白胨换成尿素将伊红美蓝换成酚

12、红(2)异养型不能,原因是培养基中的碳源种类很多,可供多种微生物生存主题一主题二考向2微生物实验室培养条件控制2.(2021宁夏中卫第二次联考)请回答下列在生物技术实践过程中,某些实验步骤的操作的相关问题。(1)在大肠杆菌培养过程中,除考虑主要营养条件外,还要考虑以及温度、pH、O2等要求。(2)分析下面培养基的配方:NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO47H2O、KCl、H2O。若此培养基用于筛选分解尿素的细菌,则应除去上述配方中的,并加入和葡萄糖,以补充源。(3)若用稀释涂布平板法统计大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品

13、稀释的。主题一主题二(4)若要判断某选择培养基是否起到了筛选出能分解纤维素的细菌的作用,应设置的对照是。A.未接种的选择培养基B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D.接种了的选择培养基(5)一般来说,在菌落计数时,每隔一定时间统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时记录的数据作为结果,以防止。(6)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是。主题一主题二答案 (1)特殊营养物质(2)NaNO3尿素碳源和氮(3)比例合适(4)C(5)因培养时间不足而遗漏菌落的数目(6)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察是否有菌落产生主题

14、一主题二考向3无菌技术3.(2018全国)在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题。(1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点是 。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能。在照射前,适量喷洒,可强化消毒效果。主题一主题二(4)水厂供应的自来水通常是经过(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因是。答案 (1

15、)可以(2)在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽主题一主题二方法突破1.培养基的营养组成营养要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物构成细胞物质和一些代谢产物既是碳源又是能源(有机碳源)有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、牛肉膏等氮源无机氮源 NH3、铵盐、硝酸盐、N2等合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物有机氮源蛋白胨、尿素、氨基酸等生长因子维生素、氨基酸、碱基等酶和核酸的组成成分参与代谢过程中的酶促反应主题一主题二2.几种常用的灭菌和消毒方法的比较 灭菌和消毒方法 操作(试剂)应用范围灼烧灭菌酒精灯火焰灼

16、烧微生物的接种工具,如接种环、接种针或其他金属用具等,接种过程中的试管口或瓶口等干热灭菌干热灭菌箱160170的热空气中维持23h耐高温的和需要保持干燥的物品,如玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等湿热灭菌100kPa、121维持1530min培养基及多种器材、物品煮沸消毒法100煮沸56min家庭餐具等生活用品的消毒主题一主题二灭菌和消毒方法操作(试剂)应用范围巴氏消毒法6265消毒30min或8090处理30s1min牛奶、啤酒和酱油等不耐高温的液体紫外线消毒法紫外线照射30min接种室、接种箱、超净工作台化学药物消毒法酒精或氯气用于皮肤、伤口、动植物组织表面或水源消毒主题一主题二特别

17、提醒(1)用酒精消毒时,体积分数为70%的酒精消毒效果最好,原因是浓度过高,菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜,酒精不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。(2)接种室、接种箱或超净工作台在使用前,可以用紫外线照射30min以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前,适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果。(3)芽孢是某些细菌生长到一定阶段,在细胞内形成的休眠体。孢子是某些微生物的繁殖体。(4)消毒和灭菌都是通过一定的理化手段,使病原体的蛋白质或核酸变性,失去活性。只是作用的条件不同,抑菌杀菌的程度不同。主题一主题二角度二、微生物的纯化与培养角度二、微生物的纯化与培养考向探究考向1微生物

18、的纯化与菌种保藏1.(2021安徽江南十校一模联考)肺炎克雷伯菌是肠杆菌科细菌,常存在于人体上呼吸道和肠道,当机体免疫力降低时,经呼吸道进入肺内而引起相关病症。医学实验室用中国蓝培养基培养克雷伯菌,连续培养24h和48h结果分别如图a和图b所示。图a图b中国蓝培养基的配方(每升):蛋白胨10.0g,牛肉膏粉3.0g,乳糖10.0g,氯化钠5.0g,琼脂13.0g,中国蓝0.05g,玫红酸0.1g(最终pH为7.00.2)主题一主题二(1)本实验使用了法接种克雷伯菌,培养基中琼脂的作用是,实验室可用法长期保存该菌种。(2)如果对样本中的克雷伯菌进行计数,需使用法接种,菌落数目需要每隔一段时间统计

19、一次,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。这样做的目的是。(3)此培养基中的中国蓝为指示剂,分解乳糖的细菌在培养基上形成蓝色菌落,不分解乳糖的细菌在培养基上形成淡红色的透明菌落。据此判断,中国蓝培养基属于培养基。(4)在培养克雷伯菌时,将接种的培养基和一个未接种的培养基都放入恒温箱中培养,这样操作的目的是。主题一主题二答案 (1)平板划线作为凝固剂甘油管藏(2)稀释涂布平板防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目(3)鉴别(4)检测培养基平板是否灭菌彻底主题一主题二考向2微生物的分离纯化技术及评价2.(2021浙江6月选考,改编)请回答与甘蔗醋制作有关的问题。(1)为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株,以

20、自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基:将适量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容,调节pH,再高压蒸汽灭菌,经后加入体积分数为3%的无水乙醇。然后将10g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基,振荡培养24h。用将少量上述培养液涂布到含CaCO3的分离培养基上,在30培养48h。再挑取分离培养基上具有的单菌落若干,分别接种到与分离培养基成分相同的培养基上培养24h后,置于4冰箱中保存。主题一主题二(2)优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基,培养一段时间后,取合适接种量的菌液在30、150r/min条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升,或者培养液

21、中含量达到最低时,发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外,还应有(答出2点即可)等特点。(3)制醋过程中,可将甘蔗渣制作成固定化介质,经后用于发酵。其固定化方法为。答案 (1)冷却涂布器较大透明圈斜面(2)乙醇耐酒精度高、耐酸高(3)灭菌吸附法主题一主题二考向3微生物的培养3.(2019全国)回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时,培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是。硝化细菌在没有碳源的培养基上(填“能够”或“不能”)生长,原因是。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板

22、(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物,原因是。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。主题一主题二答案 (1)蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)倒置(3)在一定的培养条件下,不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌主题一主题二方法突破1.微生物的分离纯化培养技术(1)目的:在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体菌落。(2)纯化培养方法项目平板划线法稀释涂布平板法关键操作接种环在固体平板培养基表

23、面连续划线一系列的梯度稀释涂布平板法操作注意事项每次划线前后均需灼烧接种环并冷却稀释度要足够高,为确保实验成功可以增加稀释度的范围菌体获取在具有显著的菌落特征的区域中挑取菌体从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体主题一主题二项目平板划线法稀释涂布平板法优点可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落,又能对微生物计数缺点不能对微生物计数操作复杂,需要涂布多个平板平板效果图主题一主题二2.平板划线操作中每次灼烧的目的 项目 第一次操作每次划线之前划线结束目的杀死接种环上原有的微生物杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端,使每次划线菌种数目减少

24、杀死接种环上残存的菌种,避免微生物污染环境和感染操作者主题一主题二能力解读主题二主题二微生物的分离、鉴定与计数微生物的分离、鉴定与计数主题一主题二命题解读主题一主题二考向探究考向1目标微生物的筛选与鉴定1.将餐厨垃圾无害化处理,是环境保护的一项重要措施。某研究团队拟从餐厨垃圾中分离出具有高效降解能力的微生物,并制成菌制剂,用于餐厨垃圾无害化处理。所进行实验的简要步骤如下。步骤一:取一定量的餐厨垃圾样品,筛除大块杂质后,装入无菌袋中密封,备用。步骤二:配制用于培养菌种的培养基,配方如下表所示。成分蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂含量/(gL-1)1015105主题一主题二步骤三:制备样品稀释液,并将不同浓

25、度的样品稀释液涂布于平板培养基表面进行培养,48h后观察结果。步骤四:对20种菌种进行分离纯化。(1)牛肉膏、蛋白胨中含有磷酸盐、糖、维生素和等营养成分,写出制备牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的简要流程用(用“”连接):。使用后的培养基一定要进行(填“灭菌”或“消毒”)处理。主题一主题二(2)微生物在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中可形成菌落,菌落对微生物研究工作有很大作用,可用于(答出两项即可)等工作。利用稀释涂布平板法进行接种时,要对菌液进行充分稀释的目的是。(3)为了比较这些菌种对餐厨垃圾中淀粉的降解效果,配制含淀粉的培养基,分别用于测定各菌种对淀粉的降解效果,并进行测定。上图表示其中4种菌种(X1X4

26、)在淀粉培养基上的培养结果,写出图示的测定菌种对淀粉降解效果的实验原理:。主题一主题二答案 (1)有机氮计算称量溶化灭菌倒平板灭菌(2)分离菌种、鉴定菌种、细菌计数、选种育种(答出两项即可)使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,能在培养基中形成单个的菌落(3)菌种对淀粉降解的能力越强,分解培养基中的淀粉就越多,培养基上形成的透明圈就越大,即D/D0值越大主题一主题二考向2产脲酶细菌的分离与计数2.下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程示意图,请据图回答下列问题。(1)图中选择培养基应以为唯一氮源;鉴别培养基还需添加作指示剂,产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后,其菌落周围的指示剂将变成色。主题一主题

27、二(2)在5个细菌培养基平板上,均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1mL,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是,每克土壤样品中的细菌数量约为个。(3)该研究小组成功分离出某品种产脲酶细菌后,用等量菌液分别接种于3个盛有等量液体培养基的锥形瓶中,并分别置于转速为150r/min、200r/min、250r/min的摇床上培养,检测结果如图1所示,摇床转速为250r/min的产脲酶细菌种群密度最大的原因是。图1主题一主题二图2(4)图2是采用血细胞计数板直接计数和稀释涂布平板法计数两种方法计数培养液中产脲酶细菌数量时得到的结

28、果,其中采用稀释涂布平板法计数得到的是曲线,下列判断依据正确的有。稀释涂布平板法只计数活的细菌细胞,死细胞无法形成菌落采用血细胞计数板直接计数时,可能会将死细胞与活细胞一起计数采用稀释涂布平板法计数时,两个或多个细胞连在一起长成一个菌落采用稀释涂布平板法计数时,因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目主题一主题二答案 (1)尿素酚红红(2)稀释涂布平板法1.75108(3)摇床转速越高,提供的氧气越充足,产脲酶细菌代谢旺盛,增殖快(4)乙主题一主题二考向3纤维素分解菌的筛选与鉴定3.(2021湖南)大熊猫是我国特有的珍稀野生动物,每只成年大熊猫每日进食竹子量可达1238kg。大熊猫可利用竹子中8%的

29、纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题。(1)纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即。为筛选纤维素分解菌,将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以为唯一碳源的固体培养基上进行培养,该培养基从功能上分类属于培养基。(2)配制的培养基必须进行灭菌处理,目的是。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是。主题一主题二(3)简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路: 。(4)为高效降解农业秸秆废弃物,研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌,在37条件下进行玉米秸秆降解实验,结果如下表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株,理由是。

30、菌株秸秆总重/g秸秆残重/g秸秆失重/% 纤维素降解率/%A2.001.5124.5016.14B2.001.5323.5014.92C2.001.4229.0023.32主题一主题二答案 (1)C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶纤维素选择(2)杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)不接种培养(或空白培养)(3)将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后,取0.1mL涂布到若干个平板(每个稀释度至少涂布三个平板),对菌落数在30300的平板进行计数,则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌的活菌数(4)C接种菌株C后秸秆失重最多,纤维素降解率最大主题一主题二方法突破1.选择培养基与鉴别培养基的区别

31、种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质的抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素,分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品反应,产生明显的特征变化而设计鉴别不同种类的微生物伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌主题一主题二2.两种菌株筛选原理的比较 土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物选择培养基的成分:尿素作为唯一的氮源鉴定方法:在培养基中加入酚红指示剂,若pH升高,指示剂变红,说明细菌能分解尿素选择培养基的成分:纤维素作为唯一的碳源鉴定方法:刚果红染色法,即刚果红

32、与纤维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈主题一主题二3.微生物的计数 比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微镜计数法)原理当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量公式每克样品中的菌株数:(CV)MC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数;V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);M:稀释倍数每毫升原液所含细菌数:每小格平均细菌数40010000稀释倍数缺点当两个或多个细胞连在

33、一起时,平板上观察到的只是一个菌落,计数结果比实际值偏小不能区分死细胞和活细胞,计数结果比实际值偏大注:测定饮用水中大肠杆菌的数目可以采用滤膜法。悟考情悟考情 演练真题演练真题1.(2019全国)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解,会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。号培养基:在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5g/L)。号培养基:氯化钠(5g/L),硝酸铵(3g/L),其他无机盐(适量),X(15g/L)。号培养基:氯化钠(5g/L),硝酸铵(3g/L),其他无机盐(适量),X(45g/L)。回答下列问题。(1)在号培养基中,为微生物提供氮源的

34、是。、号培养基中为微生物提供碳源的有机物是。(2)若将土壤悬浮液接种在号液体培养基中,培养一段时间后,不能降解X的细菌比例会,其原因是。(3)号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基,若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数,接种时,应采用的方法是。(4)假设从号培养基中得到了能高效降解X的细菌,且该菌能将X代谢为丙酮酸,则在有氧条件下,丙酮酸可为该菌的生长提供和。答案 (1)牛肉膏、蛋白胨X(2)下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖,而能降解X的细菌能够增殖(3)稀释涂布平板法(4)能量合成其他物质的原料2.(2019全国)物质W是一种含氮有机物,会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基

35、表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。(1)要从土壤中分离目标菌,所用选择培养基中的氮源应该是。(2)在从土壤中分离目标菌的过程中,发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌,应该选择菌落进一步纯化,选择的依据是。(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源,请简要写出实验思路、预期结果和结论,即 。(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌,使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异,该小组拟进行如下实验,请完善相关内

36、容。在含有一定浓度W的固体培养基上,A处滴加含有酶E的缓冲液,B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液,C处滴加,三处滴加量相同。一段时间后,测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈,说明;若A、B处形成的透明圈直径大小相近,说明。答案 (1)W(2)乙乙菌落周围出现透明圈,说明乙菌能降解W(3)将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上,若细菌能生长,则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源(4)缓冲液缓冲液不能降解W酶E与天然酶降解W的能力相近3.(2018全国)将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。回答下列问题。(1)

37、M培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制的生长,加入了链霉素的培养基属于培养基。(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有(答出两点即可)。氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有(答出两点即可)。(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是,该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果:甲同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是110、140和149,取平均值133。乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是 。答案 (1)细菌选择(2)碳源、无机盐蛋白质、核酸(3)碘液淀粉遇碘液显蓝色,产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解,形成透明圈(4)乙同学的结果中,1个平板的计数结果与另2个相差悬殊,结果的重复性差本本 课课 结结 束束