201705-新药物分析新实验-赖氨酸颗粒剂中的赖氨酸含量测定 最新.ppt

1、药物分析新实验 微流控芯片分析法 测定赖氨酸颗粒剂中的赖氨酸含量 在电场作用下在电场作用下,溶液表面正电荷带动溶液溶液表面正电荷带动溶液整体移动整体移动, 形成形成电渗流电渗流 - EOF 一一.实验原理实验原理毛细管电泳原理毛细管电泳原理 pH2.5的碱性或弱酸性溶液中，毛细管内表面的碱性或弱酸性溶液中，毛细管内表面 Si-OH 基电离而带负电荷，固基电离而带负电荷，固-液介面形成液介面形成双电层双电层, 溶液表面带溶液表面带正电正电 混合组分随混合组分随电渗流电渗流移动，各组分因移动，各组分因淌度淌度及及分配行为分配行为等差异，等差异，迁移速度迁移速度不同不同中性分子中性分子 - - -+

2、 毛细管电泳原理毛细管电泳原理一一.实验原理实验原理分析芯片：分析芯片：进样通道进样通道分离通道分离通道缓冲液池缓冲液池一一.实验原理实验原理微流控分析芯片微流控分析芯片进样通道进样通道分离通道分离通道检测器检测器+进样电压进样电压+ 分离电压分离电压进样与分离进样与分离一一. 微流控芯片微流控芯片分析芯片分析芯片非接触电导非接触电导(CCD)检测原理：检测原理：高频信号记录接收放大electrodesmicrochannelschipreservoirsContactless Conductivity Detector for Microfluidic Chip一一.实验原理实验原理根据背景

3、溶液与被测物电导差别进行定量检测，极性和离子组分都能检测。根据背景溶液与被测物电导差别进行定量检测，极性和离子组分都能检测。优点：电极不与溶液直接接触，消除电极污染，降低背景噪音。优点：电极不与溶液直接接触，消除电极污染，降低背景噪音。 清洗芯片后全部注入缓冲液，通道无气泡。 打开高压电源，迅速按到分离，将分离电压调至2kV。然后调到待机。 样品池注入样品溶液，四个池中液面高度相同，盖上电极。 切换至进样，数30s后切换至分离电压。 重复进样分离操作六次。 保存谱图，记录数据，注意有效数字的取舍。 用缓冲液平衡5 min后可测下一浓度。二二.实验操作实验操作注意事项注意事项1、处理芯片时应每次

4、用指定的溶液浸润、处理芯片时应每次用指定的溶液浸润2 min后，用真后，用真空泵抽动补液。活化与检测时务必空泵抽动补液。活化与检测时务必保证通道无气泡保证通道无气泡（清洗活化过程中，从一个孔道真空抽气，同时保证（清洗活化过程中，从一个孔道真空抽气，同时保证另外三个孔道注满液体。加样时保证另外三个孔道注另外三个孔道注满液体。加样时保证另外三个孔道注满缓冲溶液满缓冲溶液)2、盖板打开应反放盖板打开应反放，不要碰歪电极。，不要碰歪电极。3、高压电源输出电流在安全范围，但仍须、高压电源输出电流在安全范围，但仍须谨防身体接谨防身体接触高压电极触高压电极。4、注意针头注意针头不要刺伤身体和芯片不要刺伤身体

5、和芯片5、实验完毕要用、实验完毕要用0.2 M HNO3洗通道洗通道15 min,水清洗通道水清洗通道5 min，然后在用水充满，盖住芯片，以防灰尘侵入。，然后在用水充满，盖住芯片，以防灰尘侵入。液体不要漏出芯片外！液体不要漏出芯片外！三、实验内容三、实验内容标准溶液或样品溶液迁移时间峰面积或峰高第1次进样第2次进样第3次进样平均值1.00102 mg/L 赖氨酸2.00102 mg/L 赖氨酸4.00102 mg/L 赖氨酸6.00102 mg/L 赖氨酸8.00102 mg/L 赖氨酸10.00102 mg/L赖氨酸赖氨酸样品溶液每位同学至少负责一个点，最后制作标准曲线，求得赖氨酸含量。软件使用:1.出峰时间2.峰高或峰面积：负峰积分 倒转峰禁止判峰手动添加峰右键峰尺寸实验结果：1.峰面积-浓度标准曲线（看原始数据，回去以后再打印贴上）2.峰形图（手画，标明峰的归属和迁移时间的计算方法）实验结束后：硝酸洗15min,水洗10min，最后用水浸润芯片，盖上盖板。所有注射器的针头用盖子盖好，液体挤走再扔每4-5人一组，一共8组每组领十支注射器和滤头所有溶液都要过滤赖氨酸浓度梯度分别为100,200,400,600,800,1000 mg/L芯片使用前先分别用硝酸（0.2 M），水，NaOH （0.1 M）、水和缓冲液清洗五分钟