医学免疫学课件：双扩凝集反应-吴砂.ppt

1、沉淀反应与凝集反应吴吴 砂砂能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之特异性结合的物质能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之特异性结合的物质B B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异性细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异性结合抗原的一组糖蛋白。结合抗原的一组糖蛋白。抗原（抗原（antigen, Ag）:抗体抗体(antibody, Ab) ： 抗原抗原- -抗体反应的特点与影响因素抗体反应的特点与影响因素反应条件：反应条件：自身因素自身因素: : 环境因素环境因素: : 适宜温度适宜温度 电解质电解质 酸碱度酸碱度特点：特点： 特异性特异性 可逆性可逆性 最适比例最适比

2、例凝集反应凝集反应(agglutination(agglutination):):颗粒性抗原颗粒性抗原与抗体的反应。与抗体的反应。沉淀反应沉淀反应(precipitation):(precipitation):可溶性抗原可溶性抗原与抗体的反应。与抗体的反应。补体参与的反应补体参与的反应免疫标记技术（免疫标记技术（immunolabellingimmunolabelling technique technique）: :用示踪物质用示踪物质标记抗原或抗体，进行抗原标记抗原或抗体，进行抗原- -抗体反应的检测。抗体反应的检测。 抗原抗原- -抗体反应的基本检测方法抗体反应的基本检测方法沉淀反应沉淀

3、反应 双向免疫扩散试验双向免疫扩散试验原理 用半固体琼脂凝胶作为介质，可溶性抗原、抗体在其中能自由扩散。将可溶性抗原和抗体分别加入琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原和抗体相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。主要材料n器材：载玻片、EP管、微量加样器、枪头、打孔器、 n试剂：PBS、琼脂粉、 Ag（正常小鼠IgG）、 Ab（兔抗小鼠IgG血清）鼠鼠IgG(Ag)兔抗小鼠兔抗小鼠IgG(Ab) 免疫免疫u配制1%琼脂-制板-打孔u稀释抗体：取取4支支EP管，将抗体倍比管，将抗体倍比稀释稀释u加样：15:抗体，中间孔抗原抗体，中间孔抗原(10L) u琼脂板放入湿盒内，置琼脂板放

4、入湿盒内，置4，12-24小小时后观察结果。时后观察结果。Ag12345control6Fig. 2 加样法从低浓度加到高浓度从低浓度加到高浓度 50ul1/1Ab50ul1/1Ab50ul1/2Ab50ul1/2Ab50ulPBS50ulPBS50ulPBS50ulPBS50ulPBS50ulPBS50ul1/4Ab50ul1/4Ab50ul1/8Ab50ul1/8Ab1/21/21/41/41/81/81/161/16首先加入首先加入首先加入首先加入首先加入首先加入首先加入首先加入50ulPBS50ulPBSFig. 1 倍比稀释法1/41/41/11/1PBS结果判断凝集反应凝集反应 A

5、BOABO血型鉴定血型鉴定n原理 颗粒性抗原颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等完整的病原微生物或红细胞等)与相应与相应抗体特异性结合，在有电解质存在的条件下，形成肉抗体特异性结合，在有电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集块。眼可见的凝集块。n基本类型 直接凝集反应、间接凝集反应、凝集抑制反应等。间接凝集反应、凝集抑制反应等。直接凝集实验直接凝集实验（ABOABO血型鉴定血型鉴定） 间接凝集实验间接凝集实验 将可溶性抗原连接于将可溶性抗原连接于颗粒性载体，与抗体反颗粒性载体，与抗体反应成凝集现象应成凝集现象间接凝集抑制实验间接凝集抑制实验 待检可溶性抗原与抗待检可溶性抗原与抗体结合后，抑制

6、了连接体结合后，抑制了连接载体的抗原与抗体形成载体的抗原与抗体形成凝集现象。凝集现象。实验原理 人人类类ABO血型抗原主要有血型抗原主要有A和和B两种两种，根据，根据红细红细胞表面胞表面这两种这两种抗原的有无可把血型分抗原的有无可把血型分为为四四种种。据。据此，此，将将抗抗A和抗和抗B抗体分抗体分别与别与待待测红细测红细胞混合，抗胞混合，抗A或（和）抗或（和）抗B抗体抗体与红细与红细胞表面上的相胞表面上的相应应抗原抗原结结合而引起合而引起红细红细胞凝集，据其凝集情胞凝集，据其凝集情况况便可判定出便可判定出受受试试者的血型。者的血型。红细胞表面红细胞表面Ag血清中血清中AbA型型A抗抗BB型型B

7、抗抗AAB型型A、B、O型型、抗抗A、抗抗BABO血型的划分3331nABO和Rh血型是与人类输血关系最为密切的两个血型系统。n当一个人的红细胞上存在一种D血型物质（抗原）时，则称为Rh阳性，用Rh（+）表示；当缺乏D抗原时即为Rh阴性，用Rh（-）表示。n Rh（-）的分布因种族不同而差异很大:n白种人中的比例较高，约15%n中国人群中； 新疆维吾尔等少数民族: 5%； 蒙古族人接近1%； 汉族人所占的比例极少，0.3%n器材：器材：酒精棉球、灭菌干棉球、微量加样器、酒精棉球、灭菌干棉球、微量加样器、 灭菌枪头、玻片、一次性采血针灭菌枪头、玻片、一次性采血针n试剂试剂 抗A试剂（蓝色）、抗B

8、试剂（黄色）主要材料1取取洁净载洁净载玻片玻片1块块，并标记并标记（如（如图图）2将将抗抗A、B抗体抗体分分别别加加1滴于玻片滴于玻片两侧两侧，不要混和。，不要混和。3志愿者志愿者筛选筛选： （1）生理情）生理情况况：血液循：血液循环环好（手指好（手指较红较红），面色），面色红润红润，正常，正常进进食，无近期大量食，无近期大量运动运动史，史， （2）心理情）心理情况况：无：无晕晕血史，无血史，无晕针晕针史，不易史，不易过过度激度激动动，无，无惊惊厥史。厥史。 （3）志愿者有）志愿者有权权利在任何利在任何时间时间中止中止实验实验 4。毛。毛细细血管采血法血管采血法: 酒精棉消毒被酒精棉消毒被检检

9、者左手者左手无名指手指尖端无名指手指尖端，以采血，以采血针针刺破皮刺破皮肤肤，稍加，稍加挤压挤压，使血液流出。，使血液流出。 （如志愿者有不适，（如志愿者有不适，马马上中止上中止实验实验通知老通知老师师）5.加加样样: 无菌加无菌加样枪头样枪头取适量（取适量（50ul）血液分）血液分别别加入抗加入抗A抗体抗体(兰兰色色)和抗和抗B抗体抗体(黄黄色色)中中并并混混匀匀。 志愿者志愿者绵签压绵签压迫止血迫止血6结结果果观观察察: 边边混混匀边观匀边观察察红细红细胞有无凝集胞有无凝集发发生。如有凝集，可生。如有凝集，可见红细见红细胞凝集成胞凝集成块块，其他液体，其他液体清清亮；亮；无凝集，无凝集，红

10、细红细胞呈均胞呈均匀匀分散，其他液体不透明。分散，其他液体不透明。(注意注意区区分血液凝固分血液凝固与与凝集：凝固是生理性凝血酶凝集：凝固是生理性凝血酶导导致的血凝致的血凝块块)实验步骤实验步骤 AB抗A抗B50ul全血全血 50ul全血全血结果判断 实验结果仅供参考，实验结果仅供参考， 如需确诊血型请去相关医疗机构如需确诊血型请去相关医疗机构!造成鉴定结果错误原因1.患者未患者未产产生生abo抗体或抗体被抑制抗体或抗体被抑制这种这种情情况况可可见见于：于：4-6个个月新生月新生儿儿、白血病、淋巴瘤以及使用免疫抑制、白血病、淋巴瘤以及使用免疫抑制药药患者；患者；先天性丙先天性丙种种球蛋白缺乏症

11、；骨髓移植患者等。球蛋白缺乏症；骨髓移植患者等。2被被检查红细检查红细胞胞异异常：常：弱弱a或弱或弱b亚亚型；型；白血病白血病时时可使可使a或或b抗原抗原减减弱，而弱，而误误定定为为o型；型；霍奇金病也有霍奇金病也有类类似的白血病的情似的白血病的情况况；获获得性得性b或或获获得性得性a表表现现等。等。3被被检查检查者血者血浆异浆异常：常：某些疾病如多某些疾病如多发发性骨髓瘤、霍金肉瘤性骨髓瘤、霍金肉瘤时时，可使用血，可使用血浆纤维浆纤维蛋白原水平升高易形成蛋白原水平升高易形成钱钱串串状状物，外物，外观类观类似凝集；似凝集；应应用血用血浆扩浆扩容容剂剂如低分子右旋糖如低分子右旋糖酐酐，聚乙，聚乙烯吡烯吡咯咯酮酮，也能，也能引起引起钱钱串串状状假凝集；假凝集；有些疾病如胃癌、有些疾病如胃癌、胰胰腺癌等，血腺癌等，血浆浆可有可有过过多的可溶性血型多的可溶性血型物物质质，中和了，中和了试剂试剂中抗中抗a或抗或抗b。