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类型3.4 蛋白质工程的原理和应用ppt课件-(新教材)2019新人教版高中生物选择性必修三.pptx

  • 上传人(卖家):大布丁
  • 文档编号:2030385
  • 上传时间:2022-01-11
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    1、蛋白质的四级结构蛋白质的四级结构 你见过用细菌画画吗?右图是用发你见过用细菌画画吗?右图是用发出不同颜色荧光的细菌出不同颜色荧光的细菌“画画 的美妙图案。的美妙图案。这些细菌能够发出荧光,是因为在它们的这些细菌能够发出荧光,是因为在它们的体内导入了荧光蛋白的基因。体内导入了荧光蛋白的基因。 最早被发现的荧光蛋白是绿色荧光最早被发现的荧光蛋白是绿色荧光蛋白,科学家通过改造它,获得了黄色蛋白,科学家通过改造它,获得了黄色荧光蛋白等。这些荧光蛋白在细胞内生荧光蛋白等。这些荧光蛋白在细胞内生命活动的检测、肿瘤的示踪研究等领域命活动的检测、肿瘤的示踪研究等领域有着重要应用。有着重要应用。从社会中来 那么

    2、,科学家是怎样对蛋白质分子那么,科学家是怎样对蛋白质分子进行设计和改造的呢?进行设计和改造的呢?逆转录逆转录转录转录DNADNARNARNA翻译翻译肽链肽链复制复制复制复制折叠等折叠等具有空间结具有空间结构的蛋白质构的蛋白质表达生物特有表达生物特有的功能或性状的功能或性状天然蛋白质的合成过程与性状表达天然蛋白质的合成过程与性状表达温故知新温故知新:蛋白质只有具有一定空间结构,才能表达特有性状或具有特定功能蛋白质只有具有一定空间结构,才能表达特有性状或具有特定功能4三三级级结结构构一一级级结结构构四四级级结结构构二二级级结结构构蛋白质的二级结构蛋白质的二级结构 -多肽链的盘曲或折叠多肽链的盘曲或

    3、折叠胰岛素的三级结构胰岛素的三级结构-多肽链多肽链既盘曲又折叠既盘曲又折叠血红蛋白质的四级结构血红蛋白质的四级结构 -四条多肽链的盘曲和折叠四条多肽链的盘曲和折叠蛋白质工程 以蛋白质分子的以蛋白质分子的结构结构规律及其与生物规律及其与生物功能功能的关系作为的关系作为基础,通过基础,通过改造或合成基因改造或合成基因,来改造现有蛋白质,或制造,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求。一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求。对蛋白质分子对蛋白质分子结构结构的设计和改造是通过的设计和改造是通过蛋白质工程蛋白质工程实现的。实现的。-第二代基因工程第二代基因工程基础基础:了

    4、解蛋白质的结构和功能了解蛋白质的结构和功能途径:途径:目的:目的:改造或制造新的蛋白质,满足人类的生产或生改造或制造新的蛋白质,满足人类的生产或生活的需要活的需要改造基因(基因修饰或基因合成)改造基因(基因修饰或基因合成)基因工程与蛋白质工程的比较基因工程实质不足蛋白质工程天然蛋白质的不足目的将一种生物的将一种生物的 转移到另一种生物体内,后者可以产生它转移到另一种生物体内,后者可以产生它本不能产生的本不能产生的 ,进而表现出,进而表现出 。基因基因蛋白质蛋白质新性状新性状在原则上只能生产自然界已存在在原则上只能生产自然界已存在的的 。蛋白质蛋白质即天然蛋白质即天然蛋白质 天然蛋白质是生物在长

    5、期天然蛋白质是生物在长期 过程中形成的,它们的过程中形成的,它们的结构和功结构和功能能符合特定物种符合特定物种 的需要,却不一定完全符合人类生产和生的需要,却不一定完全符合人类生产和生活的需要。活的需要。进化进化生存生存生产符合人类生产和生活的需要的生产符合人类生产和生活的需要的 。蛋白质蛋白质一、蛋白质工程崛起的缘由一、蛋白质工程崛起的缘由基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质质天然蛋白质天然蛋白质干扰素干扰素治疗病毒感治疗病毒感染、癌症。染、癌症。保存半年保存半年改变分子结构改变分子结构半胱氨酸半胱氨酸 丝氨酸丝氨酸体外保存困体外保存困难难实例实

    6、例1 1:符合特定物符合特定物种生存需要种生存需要不一定符不一定符合人类生合人类生产、生活产、生活需要需要实例实例2:赖氨酸赖氨酸含量低含量低合成时需:合成时需:天冬氨酸激酶天冬氨酸激酶;二氢吡啶二羧酸二氢吡啶二羧酸合成酶。合成酶。浓度浓度影响影响酶活酶活性性苏氨酸苏氨酸(352(352位)位)异亮氨酸异亮氨酸产量提高产量提高天冬酰胺天冬酰胺(104(104位位) )异亮氨酸异亮氨酸改造蛋白质结构改造蛋白质结构改造改造干扰素(半胱氨酸)干扰素(半胱氨酸)体外很难保存体外很难保存干扰素干扰素(丝氨酸)(丝氨酸)体外可以保存半年体外可以保存半年玉米中赖氨酸含量比较低玉米中赖氨酸含量比较低天冬氨酸激

    7、酶天冬氨酸激酶(352352位的苏氨酸)位的苏氨酸)二氢吡啶二羧酸合成酶二氢吡啶二羧酸合成酶(104104位的天冬酰胺)位的天冬酰胺)天冬氨酸激酶天冬氨酸激酶(异亮氨酸)(异亮氨酸)二氢吡啶二羧酸合成酶二氢吡啶二羧酸合成酶(异亮氨酸)(异亮氨酸)玉米中赖氨酸含量提高数倍玉米中赖氨酸含量提高数倍改造改造改造改造满足人类生产满足人类生产和生活的需要和生活的需要1 1、目标:、目标:根据人们对根据人们对蛋白质功能蛋白质功能的特定需求,对的特定需求,对蛋白质的结蛋白质的结构构进行进行设计改造设计改造。2 2、原、原理:理:改造基因(基因改造基因(基因修饰修饰或基因或基因合成合成)3 3、流程:、流程:

    8、从预期的蛋白质功能出发从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)预期蛋白质功能预期蛋白质功能设计预期的蛋白质结构设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序推测应有的氨基酸序列列找到对应的脱氧核苷酸序列找到对应的脱氧核苷酸序列合成新基因合成新基因获得所需要的蛋获得所需要的蛋白质白质蛋白质工程的基本思路蛋白质工程的基本思路蛋白质工程操作程序的基本思路与基因工程有什么不同?蛋白质工程操作程序的基本思路与基因工程有什么不同?基因工程是遵循中心法则,基因工程是遵循中心法则,DNAm

    9、RNADNAmRNA蛋白质蛋白质折叠产生功折叠产生功能,能,基本上是基本上是生产出自然界已有的蛋白质。生产出自然界已有的蛋白质。蛋白质工程是按照以下思路进行的:蛋白质工程是按照以下思路进行的:确定蛋白质的功能确定蛋白质的功能蛋白质应有的高级结构蛋白质应有的高级结构蛋白质应具蛋白质应具备的折叠状态备的折叠状态应有的氨基酸序列应有的氨基酸序列应有的碱基排列,应有的碱基排列,创创造出自然界不存在的蛋白质造出自然界不存在的蛋白质思考:思考:天然蛋白质的合成途径:天然蛋白质的合成途径:基因表达(转录和翻译)形成氨基酸序列的多肽基因表达(转录和翻译)形成氨基酸序列的多肽链链 形成具有高级结构的蛋白质形成具

    10、有高级结构的蛋白质 行使生物功能行使生物功能预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相应的脱氧核苷酸序列应有的氨基酸序列找到相应的脱氧核苷酸序列( (基因基因) )蛋白质工程的途径:蛋白质工程的途径:(基因工程)(基因工程)遵循中心法则遵循中心法则蛋白质工程流程图:蛋白质蛋白质三维结构三维结构氨基酸序列氨基酸序列多肽链多肽链基因基因DNA预期预期功能功能DNA合成合成分子分子设计设计mRNA生物生物功能功能转录转录翻译翻译折叠折叠1. 从预期的蛋白质功能出发从预期的蛋白质功能出发2. 设计预期的蛋白质结构设计预期的蛋白质结构3

    11、. 推测应有的氨基酸序列推测应有的氨基酸序列4. 找到相应的脱氧核苷酸序列找到相应的脱氧核苷酸序列(1 1)从生物体中分离纯化目的蛋白;)从生物体中分离纯化目的蛋白;(2 2)测定其氨基酸序列;)测定其氨基酸序列;(3 3)借助核磁共振和)借助核磁共振和X X射线晶体衍射等手段,尽可能地射线晶体衍射等手段,尽可能地 了解蛋白质的二维结构和三维晶体结构了解蛋白质的二维结构和三维晶体结构; ;(4 4)设计各种处理条件,)设计各种处理条件,了解蛋白质的结构变化,包括折叠与去折叠了解蛋白质的结构变化,包括折叠与去折叠 等对其活性与功能的影响等对其活性与功能的影响;(5 5)设计设计编码该蛋白的编码该

    12、蛋白的基因改造方案,如点突变基因改造方案,如点突变;(6 6)分离、纯化新蛋白,功能检测分离、纯化新蛋白,功能检测后投入实际使用。后投入实际使用。基因定点诱变技术的理解基因定点诱变技术的理解项目项目内容内容条条件件原料原料酶酶引物引物能量能量 操作方法操作方法 法结果结果适应范围适应范围后代中半数为诱变的分子后代中半数为诱变的分子脱氧核苷酸脱氧核苷酸聚合酶和连接酶聚合酶和连接酶含突变顺序的分子片段含突变顺序的分子片段空间结构完全清楚的蛋白质空间结构完全清楚的蛋白质基基因因定定点点诱诱变变技技术术的的示示意意图图思考:基因定点诱变技术与基因突变的比较思考:基因定点诱变技术与基因突变的比较比较比较

    13、基因定点诱变基因定点诱变基因突变基因突变相相同同点点发生的过程结果不不同同点点场所手段方向DNA复复制过程中制过程中产生新基因,从而产生新性状产生新基因,从而产生新性状生物体外生物体外生物体内生物体内定向改造定向改造不定向性不定向性PCR技术技术物理化学方法物理化学方法讨论讨论:怎么样能够写出三种决定怎么样能够写出三种决定“丙氨酸丙氨酸色氨酸色氨酸赖氨酸赖氨酸甲硫氨酸甲硫氨酸苯丙氨酸苯丙氨酸”的脱氧核苷酸序列。的脱氧核苷酸序列。写出目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改造目的基写出目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改造目的基因?因? GCU UGGAAGAUGUUUACG苏氨酸苏氨酸丙氨酸丙

    14、氨酸 : GCU、GCC、GCA、GCG色氨酸:色氨酸: UGG赖氨酸:赖氨酸: AAA 、AAG甲硫氨酸:甲硫氨酸:AUG苯丙氨酸:苯丙氨酸:UUU 、UUCC(1 1)每种氨基酸都有对应的三联密码子,只要查一下遗传密码子表,)每种氨基酸都有对应的三联密码子,只要查一下遗传密码子表,就可以将上述氨基酸序列的编码序列查出来。但是由于上述氨基酸序就可以将上述氨基酸序列的编码序列查出来。但是由于上述氨基酸序列中有几个氨基酸是由多个三联密码子编码,因此其碱基排列组合起列中有几个氨基酸是由多个三联密码子编码,因此其碱基排列组合起来就比较复杂,至少可以排列出来就比较复杂,至少可以排列出1616种种,可以

    15、根据学过的排列组合知识,可以根据学过的排列组合知识自己排列一下。首先应该根据三联密码子推出自己排列一下。首先应该根据三联密码子推出mRNAmRNA序列为序列为GCUGCU(或(或C C或或A A或或G G)UGGAAAUGGAAA(或(或G G)AUGUUUAUGUUU(或(或C C),再根据碱基互补配对规律推出脱),再根据碱基互补配对规律推出脱氧核苷酸序列:氧核苷酸序列:CGACGA(或(或G G或或T T或或C C)ACCTTTACCTTT(或(或C C)TACAAATACAAA(或(或G G)。)。(2 2)确定目的基因的碱基序列后,就可以根据人类的需要改造它,通)确定目的基因的碱基序列

    16、后,就可以根据人类的需要改造它,通过过人工合成人工合成的方法或从的方法或从基因库基因库中获取。中获取。附录:思考答案三、蛋白质工程的应用三、蛋白质工程的应用1、研发速效胰岛素类似物已经在临床上广泛应用研发速效胰岛素类似物已经在临床上广泛应用天然胰岛素制剂易形成二聚体和六聚体,皮下注射胰岛素后往往天然胰岛素制剂易形成二聚体和六聚体,皮下注射胰岛素后往往要经历一个逐渐解离为单体的过程,这在一定程度上延缓了疗效。要经历一个逐渐解离为单体的过程,这在一定程度上延缓了疗效。研究人员通过分析人胰岛素晶体结构发现,胰岛素研究人员通过分析人胰岛素晶体结构发现,胰岛素B链链20-29位氨位氨基酸是形成多聚体的关

    17、键区域,改变这个区域氨基酸序列,则可基酸是形成多聚体的关键区域,改变这个区域氨基酸序列,则可抑制胰岛素的聚合,由此研发的抑制胰岛素的聚合,由此研发的速效胰岛素速效胰岛素类似物产品已在临床类似物产品已在临床上广泛应用。上广泛应用。2、医药工业方面医药工业方面鼠鼠人嵌合抗体人嵌合抗体人人- -鼠嵌合鼠嵌合抗体抗体,即抗体的,即抗体的可变区可变区来来自小自小( (大大) )鼠鼠McAbMcAb,而,而恒定区恒定区则来自则来自人的抗体。这样的抗体既保持了原人的抗体。这样的抗体既保持了原来来McAbMcAb的的特异性特异性和亲和力,又大大和亲和力,又大大减少了在人体内的减少了在人体内的免疫原性免疫原性。

    18、3 3)治癌酶的改造:)治癌酶的改造:疱疹病毒(疱疹病毒(HSVHSV)胸腺嘧啶激酶()胸腺嘧啶激酶(TKTK)可以催化胸)可以催化胸腺嘧啶和其它结构类似物磷酸化而使一些碱基腺嘧啶和其它结构类似物磷酸化而使一些碱基3-OH3-OH缺乏缺乏, ,从而阻断从而阻断DNADNA的合成,杀死癌细胞。的合成,杀死癌细胞。HSVHSVTKTK催化能力可以通过基因突变来提高。催化能力可以通过基因突变来提高。从大量的随机突变中进行筛选出一种酶从大量的随机突变中进行筛选出一种酶, ,在在酶活性部位附近有酶活性部位附近有6 6个氨基个氨基酸被替换酸被替换,催化能力提高,催化能力提高2020倍以上。倍以上。3 3、

    19、其他工业方面,用于改进酶的性能或开发新的工业用、其他工业方面,用于改进酶的性能或开发新的工业用酶酶1)枯草杆菌蛋白酶枯草杆菌蛋白酶常被用于洗涤剂工业、丝绸工业等。常被用于洗涤剂工业、丝绸工业等。利用蛋白质工程获得的该酶突变体已有上百种,从中筛选出优良突利用蛋白质工程获得的该酶突变体已有上百种,从中筛选出优良突变体用于生产提高其使用价值。变体用于生产提高其使用价值。2)利用蛋白质工程思路来设计微生物农药,通过改造微生物)利用蛋白质工程思路来设计微生物农药,通过改造微生物蛋白质结构增强防治害虫效果。蛋白质结构增强防治害虫效果。4.4.水蛭素改造水蛭素改造 水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂,

    20、它有水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂,它有多种变异体,由多种变异体,由6565或或6666个氨基酸残基组成。水蛭素在临个氨基酸残基组成。水蛭素在临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭素床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭素活性,在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水蛭活性,在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水蛭素主要变异体素主要变异体HV2HV2的设计方案,将的设计方案,将4747位的位的AsnAsn(天冬酰胺)(天冬酰胺)变成变成LysLys(赖氨酸),使其与分子内第(赖氨酸),使其与分子内第4 4或第或第5 5位位ThrThr(苏(苏氨酸)间形成氢键来帮助

    21、水蛭素氨酸)间形成氢键来帮助水蛭素N N端肽段的正确取向,端肽段的正确取向,从而提高凝血效率,试管试验活性提高从而提高凝血效率,试管试验活性提高4 4倍,在动物模倍,在动物模型上检验抗血栓形成的效果,提高型上检验抗血栓形成的效果,提高2020倍。倍。5 5生长激素改造生长激素改造 生长激素通过对它特异受体的作用促进细胞和机体的生长发育,然生长激素通过对它特异受体的作用促进细胞和机体的生长发育,然而它不仅可以结合生长激素受体,还可以结合许多种不同类型细胞的而它不仅可以结合生长激素受体,还可以结合许多种不同类型细胞的催乳激素受体,引发其他生理过程。在治疗过程中为减少副作用,需催乳激素受体,引发其他

    22、生理过程。在治疗过程中为减少副作用,需使人的重组生长激素只与生长激素受体结合,尽可能减少与其他激素使人的重组生长激素只与生长激素受体结合,尽可能减少与其他激素受体的结合。经研究发现,二者受体结合区有一部分重叠,但并不完受体的结合。经研究发现,二者受体结合区有一部分重叠,但并不完全相同,有可能通过改造加以区别。由于人的生长激素和催乳激素受全相同,有可能通过改造加以区别。由于人的生长激素和催乳激素受体结合需要锌离子参与作用,而它与生长激素受体结合则无需锌离子体结合需要锌离子参与作用,而它与生长激素受体结合则无需锌离子参与,参与,于是考虑取代充当锌离子配基的氨基酸侧链,如第于是考虑取代充当锌离子配基

    23、的氨基酸侧链,如第1818和第和第2121位位HisHis(组氨酸)和第(组氨酸)和第1717位位GluGlu(谷氨酸)。(谷氨酸)。实验结果与预先设想一致,实验结果与预先设想一致,但要开发作为临床用药还有大量的工作要做。但要开发作为临床用药还有大量的工作要做。原因:蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构。这种高级结构很复杂,目前对其了解还很不够,还需探索。血红蛋白结构蛋白质工程蛋白质工程难度大难度大一、蛋白质工程崛起的缘由:一、蛋白质工程崛起的缘由:基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。质。二、蛋白质工程的基本原理:二、蛋白质工程的基本原理:预期蛋白质功能预期蛋白质功能设计预期蛋白质结构设计预期蛋白质结构推测推测应有的氨基酸序列应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序找到相对应的脱氧核苷酸序列。列。蛋白质工程:蛋白质工程: 以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基基 础,通过改造或合成基因,来改造现有蛋白质,或制造础,通过改造或合成基因,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求。一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求。三、蛋白质工程的应用三、蛋白质工程的应用小结:小结:

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