1、课前检测1.发酵的概念；腐乳制作原理；参与的微生物有？2.什么是传统发酵技术？传统发酵技术的特点有？常见的传统发酵食品有？3.乳酸菌的代谢类型？乳酸发酵的反应式？常见的乳酸菌有？乳酸菌发酵的应用4.酵母菌的代谢类型？酒精发酵的反应式？酵母菌最适生长温度？酵母菌发酵的应用5.醋酸菌的代谢类型？醋酸发酵的反应式（糖源充足、不足情况下）？醋酸菌最适生长温度？醋酸菌发酵的应用6.制作泡菜：泡菜的口味、品质最佳时期？如何配置盐水？为什么要将盐水煮沸？煮沸后为什么冷却后再用？1.1传统发酵技术的应用制作泡菜：泡菜的口味、品质最佳时期？如何配置盐水？为什么要将盐水煮沸？煮沸后为什么冷却后再用？加入盐水的目的
2、？加入蒜瓣、生姜及其他香辛料的目的？（调味、抑制杂菌生长）用水密封泡菜坛的目的？泡菜坛只装八成满的原因？为什么泡菜坛内有时会长一层白膜？（产膜酵母菌的繁殖）分析泡菜发酵过程中，乳酸菌数量、乳酸含量的变化 注意泡菜制作中亚硝酸盐的含量。制作果酒和果醋：器具消毒方法？如何处理新鲜葡萄？将葡萄汁装入发酵瓶中，留有大约1/3的空间的目的？果酒发酵的温度控制在？发酵时间为？每隔12h将瓶盖拧松一次的目的？醋酸发酵温度是？时间为？发酵完成后液面出现一层菌膜是醋酸菌膜。深度思考1.1传统发酵技术的应用1.泡菜制作过程中乳酸菌数量和乳酸含量的变化泡菜制作过程中乳酸菌数量和乳酸含量的变化 乳酸菌乳酸发酵初期少少
3、(有有O2,乳酸菌活动受抑制乳酸菌活动受抑制)少少发酵中期最多最多(乳酸积累乳酸积累,抑制杂菌活动抑制杂菌活动)增多增多发酵后期减少减少(乳酸继续积累乳酸继续积累,pH继续下继续下降降,抑制乳酸菌活动抑制乳酸菌活动)继续增多直至稳定继续增多直至稳定变化曲线果酒果酒果醋果醋腐乳腐乳泡菜泡菜微生物微生物原理原理反应条件反应条件反应式反应式检测方法检测方法总结C6H12O62C2H5OH（酒精）（酒精）+CO2+能量能量C6H12O6+2O22CH3COOH（醋酸（醋酸+2H2O+2CO2+能量能量C2H5OH+O2CH3COOH（醋酸（醋酸+H2O+能量能量C6H12O62C3H6O3（乳酸）（乳
4、酸）+能量能量题后悟道归纳制作果酒和果醋的发酵装置分析使用方法:使用该装置制作果酒时,应该关闭充气口;制作果醋时,应将充气口连接充气泵,输入无菌空气。第32讲 发酵工程 考点二：微生物的培养技术课标：课标：3.1 3.1 获得纯净的微生物培养物，是发酵工程的基础获得纯净的微生物培养物，是发酵工程的基础3.1.1 3.1.1 阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提3.1.2 3.1.2 阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术技术3.1.3
5、 3.1.3 举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物3.1.4 3.1.4 概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法方法学习目标1.以腐乳为例，了解我国传统发酵技术。2.尝试制作泡菜、果酒和果醋，明确制作原理并探究制作过程中发酵条件的控制。3.根据微生物的代谢类型，尝试配制不同的培养基。4.对比消毒和灭菌的不同方法。5.利用平板划线法对酵母菌进行纯培养。自主学习（8分钟）1.在实验室培养微生物，需要？2.培养基的作用？实验室最常用的培
6、养基？3.从物理性质方面，培养基分为？（二者区别）。从功能上分为？4.培养基的一般成分包括？牛肉膏蛋白胨培养基中的牛肉膏提供的主要营养是？蛋白胨提供的主要营养是？5.培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。如：在培养乳酸菌、霉菌、细菌时，分别需要？6.获得纯净的微生物培养物的关键是？消毒的概念、灭菌的概念7.消毒和灭菌工作主要包括哪两个方面？8.做好消毒和灭菌工作后，要注意？为避免微生物污染，接下来的许多操作都应该在哪里进行？9.常用的消毒方法及处理对象？常用的灭菌方法及处理对象？（11页）思考：消毒和灭菌都能杀死所有微生物吗？2.1.1微生物的基本培养技术（一）培养基的
7、配制1、培养基概念：人们按照微生物对人们按照微生物对营养物质营养物质的不同需求，配制出供的不同需求，配制出供其生长繁殖的其生长繁殖的营养基质营养基质。3、培养基类型：固体固体培养基培养基液体液体培养基培养基有 无 琼脂2、培养基作用：用以用以培养培养、分离分离、鉴定鉴定、保存微生物保存微生物或积累其代谢物。或积累其代谢物。按物理性质划分按物理性质划分：固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有有 无无 凝固剂凝固剂(琼脂琼脂)微生物的分离、鉴定、微生物的分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏活菌计数、菌种保藏工业生产工业生产（2 2）按用途划分：按用途划分：基础培养基基础培养基鉴别培养基鉴别培养基含有
8、一般微生物生长繁殖所需的含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质基本营养物质将将某种类微生物某种类微生物从混杂的微生物群体中从混杂的微生物群体中分离分离出来出来在培养基中加入在培养基中加入某种指示剂某种指示剂或或化学药品化学药品，用于，用于鉴别鉴别不同类型不同类型微生物的培养基微生物的培养基选择培养基选择培养基培养基中加入培养基中加入某种化学物质某种化学物质，以，以抑制抑制不需要的微生物的生长，不需要的微生物的生长，促进促进所需所需的微生物的生长的微生物的生长伊红伊红美蓝美蓝培养基可以鉴别培养基可以鉴别大肠杆菌大肠杆菌（菌落呈深紫色，并带有金属光泽）（菌落呈深紫色，并带有金属光泽）培养基分离得
9、到加入青霉素酵母菌和霉菌加入高浓度的食盐金黄色葡萄球菌以尿素作为唯一氮源分解尿素的细菌不添加氮源固氮微生物4、培养基的营养构成:碳源、氮源、水、无机盐无机碳源：无机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2-、HCOHCO3 3-有机碳源：有机碳源：葡萄糖、葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物2）无机氮源：无机氮源：NHNH4 4、NONO3 3-有机氮源：有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、牛肉膏、蛋白胨、尿素、等等注：注：3）CaCa、K K、MgMg为为大量元素大量元素ZnZn、CuCu、MnMn、CoCo、MoMo等等微量元素微量元素表表1-1
10、1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分组分含量含量提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g5g碳源、磷酸盐和维生素等碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨蛋白胨10g10g氮源和维生素等氮源和维生素等NaClNaCl5g5g无机盐无机盐H H2 2O O定容至定容至1000ml1000ml水水pH氧气的需求培养的微生物培养的微生物需要满足的其他要求需要满足的其他要求乳酸杆菌乳酸杆菌培养基中添加培养基中添加维生素维生素霉菌霉菌将将pH调至调至酸性酸性细菌细菌将将pH调至调至中性或微碱性中性或微碱性厌氧微生物厌氧微生物需要提供需要提供无氧无氧条件条件二、几种常用的灭菌和
11、消毒方法的比较灭菌和消毒方法操作(试剂)应用范围灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧微生物的接种工具,如接种环、接种针或其他金属用具等,接种过程中的试管口或瓶口等干热灭菌干热灭菌箱160170 的热空气中维持23 h耐高温的和需要保持干燥的物品,如玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等湿热灭菌100 kPa、121 维持1530 min培养基及多种器材、物品煮沸消毒法100 煮沸56 min家庭餐具等生活用品的消毒巴氏消毒法6265 消毒30 min或8090 处理30 s1 min牛奶、啤酒和酱油等不耐高温的液体紫外线消毒法紫外线照射30 min接种室、接种箱、超净工作台化学药物消毒法酒精或氯气用于皮肤
12、、伤口、动植物组织表面或水源消毒无菌技术的主要方法及适用对象(连线)特别提醒(1)用酒精消毒时,体积分数为70%的酒精消毒效果最好,原因是浓度过高,菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜,酒精不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。(2)接种室、接种箱或超净工作台在使用前,可以用紫外线照射30 min以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前,适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果。(3)芽孢是某些细菌生长到一定阶段,在细胞内形成的休眠体。孢子是某些微生物的繁殖体。(4)消毒和灭菌都是通过一定的理化手段,使病原体的蛋白质或核酸变性,失去活性。只是作用的条件不同,抑菌杀菌的程度不同。深入学习实
13、验：酵母菌的纯培养明确概念：纯培养物、纯培养、单菌落分离微生物的方法？酵母菌纯培养的具体步骤。调节pH在灭菌前还是灭菌后？如何对培养基和培养皿进行灭菌？倒平板时，温度冷却至？在哪里进行操作？倒平板的具体步骤是？最后一步平板倒置的目的是？利用平板划线法分离酵母菌的原理？接种前、第2-5次划线前、划线结束后都需要灼烧接种环的目的分别是？在作第二次及以后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因？最后如何培养酵母菌？如何验证实验中有无杂菌污染？在接种酵母菌的培养基上，观察到了不同形态的菌落，说明？2.1.1微生物的基本培养技术接种的菌种不纯或无菌操作不规范（三）微生物的纯培养由单一个体繁殖所
14、获得的微生物群体称为由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养纯培养物物，获得纯培养物的过程就是，获得纯培养物的过程就是纯培养纯培养。（1）概念：（2）内容：1）配制培养基2）灭菌（培养基和器具）3）微生物接种4）分离5）恒温箱中培养分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是是菌落菌落。1、菌落：2、纯培养：采用采用平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法将单个微生物将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是分散在固体培
15、养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。由单个微生物形成的纯培养物。3、原理：微生物群微生物群分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞单个菌落单个菌落繁殖繁殖方法步骤1、制备培养基1）配制培养基称取去皮马铃薯称取去皮马铃薯200g200g，切成小块，加水，切成小块，加水1000ml1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入加入20g20g葡萄糖、葡萄糖、15-20g15-20g琼脂，用蒸馏水定容至琼脂，用蒸馏水定容至1000ml.1000ml.2）灭菌将配制好的将配制好的培养基培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并
16、用皮转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅中，在中，在压力为压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121的条件下，灭菌的条件下，灭菌1 15-30min5-30min.将将5-85-8套套培养皿培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱干热灭菌箱内，内，在在160-170160-170灭菌灭菌2h2h.3）倒平板1.拔出锥形瓶的棉塞拔出锥形瓶的棉塞2.将瓶口迅速通过火焰将瓶口迅速通过火焰3.用拇指和食指将培养皿打开一用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基条稍大于瓶口的
17、缝隙，将培养基到人，立即盖上皿盖。到人，立即盖上皿盖。4.等待培养皿冷却后，等待培养皿冷却后，将培养皿倒过来放置。将培养皿倒过来放置。倒平板注意事项：温度：50左右操作：在酒精灯火焰附近冷凝后平板倒置待培养基冷却至50左右；在酒精灯火焰附近倒平板；等平板冷却凝固后，倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。平板倒置目的：平板倒置目的：防止冷凝水滴落在培养基上引发污染。防止冷凝水滴落在培养基上引发污染。2、接种和分离酵母菌通过通过接种环接种环在固体培养基表面在固体培养基表面连续划线连续划线的操作，将聚集的菌的操作，将聚集的菌种种逐步稀释分散逐步稀释分散到培养基表面。到培养基表面。经过数次划线后培养可以分
18、离得到经过数次划线后培养可以分离得到单菌落单菌落。(1)(1)原理：原理：单个细胞单个细胞微生物群微生物群单个菌落单个菌落连续划线连续划线分散分散或或稀释稀释生长繁殖生长繁殖(2)“(2)“平板划线平板划线”实验操作实验操作(2)“平板划线”实验操作1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞 3、将试管口通过火焰.4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 5、将试管通过火焰，并塞上棉塞 6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末
19、端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连8、将平板倒置放入培养箱中培养。划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入个未接种的平板倒置，放入2828左右的恒温培养箱中培养左右的恒温培养箱中培养24-28h24-28h.1 1、未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？、未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？2 2、在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的、在接种酵母
20、菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、形状、大小是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你颜色、形状、大小是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是哪些原因引起的吗？能分析可能是哪些原因引起的吗？应该没有。如果有则说明培养基被杂菌污染。应该没有。如果有则说明培养基被杂菌污染。可能是接种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的可能是接种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的4.平板划线法操作的注意事项(1)灼烧接种环之后灼烧接种环之后,要待其冷却后才能蘸取菌液要待其冷却后才能蘸取菌液,以免温度太高杀死菌种。以免温度太高杀死菌种。(2)在作第二次及以后的划线操作时在作第二次及以后的划
21、线操作时,总是从上一次划线的末端开始划线总是从上一次划线的末端开始划线,这这样才能使微生物的数目随着划线次数的增加而减少样才能使微生物的数目随着划线次数的增加而减少,最终得到由单个微生最终得到由单个微生物繁殖而来的菌落。物繁殖而来的菌落。(3)划线时最后一次的划线不要与第一次的划线相连。划线时最后一次的划线不要与第一次的划线相连。(4)划线力度要适当划线力度要适当,防止用力过大将培养基划破。防止用力过大将培养基划破。(5)平板划线操作中几次灼烧接种环的目的平板划线操作中几次灼烧接种环的目的项目项目第一次划线前灼烧第一次划线前灼烧每次划线前灼烧每次划线前灼烧划线结束后灼烧划线结束后灼烧目的目的避
22、免接种环上可能存在避免接种环上可能存在的微生物污染培养物的微生物污染培养物杀死上一次划线结束后接种环上杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种残留的菌种,使每次划线的菌种使每次划线的菌种均来自上一次划线的末端均来自上一次划线的末端杀死接种环上残留的杀死接种环上残留的菌种菌种,避免菌种污染环避免菌种污染环境和感染操作者境和感染操作者1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；2）存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。考向一围绕培养基成分及配制过程分析,考查生命观念1.下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述,正确的是()选
23、项选项项目项目硝化细菌硝化细菌乳酸菌乳酸菌根瘤菌根瘤菌衣藻衣藻A能源能源NH3乳酸乳酸N2光能光能B碳源碳源CO2糖类等糖类等糖类等糖类等CO2C氮源氮源NH3N2N2ND代谢类型代谢类型自养需氧型自养需氧型异养厌氧型异养厌氧型自养需氧型自养需氧型自养需氧型自养需氧型3OB课后反馈课前检测1.在作第二次及以后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线？2.最后如何培养酵母菌？如何验证实验中有无杂菌污染？3.什么是消毒？什么是灭菌？4.做好消毒灭菌工作后，要注意避免_。为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作都应该在_进行。培养基一般选择什么灭菌方法？使用仪器是？5.接种室、接种箱或超
24、净工作台一般使用的消毒方法是？如何加强消毒效果？6.利用灼烧灭菌方法的有哪些？灼烧是在酒精灯火焰的那个部位？第32讲 发酵工程 考点三：微生物的微生物的选择培养和计数课标：课标：3.1.3 3.1.3 举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物3.1.4 3.1.4 概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法方法3.1.5 3.1.5 概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量
25、的常用方法3.2 3.2 发酵工程为人类提供多样的生物产品发酵工程为人类提供多样的生物产品3.2.1 3.2.1 举例说明日常生活中的某些食品是运用传统发酵技术生产的举例说明日常生活中的某些食品是运用传统发酵技术生产的3.2.2 3.2.2 阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品产品3.2.3 3.2.3 举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值学习目标1.制备特定的选择培养基培养某种生物2.利用稀释涂布平板法分离
26、分解尿素的细菌，并进行计数3.熟悉发酵过程的基本环节，并举例说明其应用。自主学习（8分钟）1.在实验室中进行微生物的筛选的原理？2.什么是选择培养基？3.如何配置选择培养基将土壤中能分解尿素的细菌分离出来？为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？4.稀释涂布平板法的具体操作步骤？细菌的最后的培养方法？5.为什么稀释涂布平板法可以统计样品中活菌的数目？6.为了保证结果准确，一般如何计数？（30-300的菌落数的平板；至少3个平板重复计数，求平均值）7.为什么统计的菌落数往往比活菌的实际数目少？8.除此之外，常用的直接利用显微镜进行直接计数的方法？9.（19页）细菌适宜生长在pH接近_的
27、潮湿土壤中，绝大多数分布在距地表_土壤层中。因此取样时一般要_。10.测定土壤中细菌的数量，一般选用稀释倍数是？细菌一般的培养温度是？一般，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如？2.1.2微生物的选择培养和计数 如果想知道如果想知道1g1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行菌液进行稀释稀释及科学的微生物及科学的微生物数量测定数量测定方法方法-稀释涂布平板法。稀释涂布平板法。2、从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
28、信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基选择培养基1、稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。（二）微生物的选择培养6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9mL9mL无菌水无菌水1ml1021ml1031ml1041ml1051ml1061ml1073）样品梯度稀释：微量微量 移移液器液器稀释稀释10倍倍菌液菌液101 在火焰旁称取土壤10g，加入90mL无菌水中，摇匀，制成稀释10倍的土壤菌液。分别取1mL上清
29、液，加入盛有9mL无菌水的试管中，制成不同稀释倍数的菌液。取取6支试管，分别加入支试管，分别加入9mL无菌水。无菌水。等比稀释1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 滴滴2、取0.1ml稀释液，滴加到培养基表面 灼灼3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，冷却后，再进行涂布。涂涂4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀各梯度分别至少涂布3个平板计数求平均值浸浸4）取样涂布平板：放入放入30-3730-37恒温箱中培养恒温箱中培养1 12d2d5）培养与观察稀释稀释10103 3倍倍稀释稀释10104 4倍倍稀释稀释10105 5倍倍空白对照空白对照恒温培
30、养箱恒温培养箱待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置培养。思考：如何判断培养基有无杂菌污染？同时培养一个未接种的培养基作对照同时培养一个未接种的培养基作对照如何判断该选择培养基是否有选择作用？培养一个接种的完全培养基作对照培养一个接种的完全培养基作对照稀释涂布平板法除用于分离微生物外，也常用于统计样品中活菌数。在稀释度足够高时，培养基上表面生长的一个单菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，可推测出样品中大约有多少活菌。1、计数原理：2、计数原则：一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。（三）微生物的数量测定活菌计数法：稀释涂布平板法注意事项:统计的菌落数往往比活菌的实际
31、数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个单菌落。1科学家从长期受到废弃油脂污染的淤泥中得到两种油脂降解菌A和B：回答下列问题：(1)科学家配置了NH4NO3 0.3%.KH2PO4 0.05%、K2HPO4 0.05%、MgSO4 0.02%、微量元素液和含废弃油脂等的培养基，从功能上来看，该培养基属于_培养基，加入KH2PO4 0.05%和K2HPO4 0.05%的目的是_。(2)如下图所示，科学家称取了5g淤泥样品，将其加入45mL无菌水中，进行梯度稀释，在5个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，5个平板上的菌落数分别为186、173、342、41、16
32、0个，则1g淤泥中的活菌数约为_ 个（保留小数点后两位）。用这种方法统计得到的数值往往_（填“偏大”或“偏小”）。为油脂降解菌提供无机盐、调节培养基的pH选择1.73108偏小这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量缺点：显微镜直接计数法：不能区分死菌与活菌（数值偏大）；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；1.制备以尿素作为唯一氮源的选择培养基进行筛选2.提示 纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中,采集土样时,可以选择纤维素丰富的环境,如树林中多年落叶形成的腐殖土等。地球上的植物每年产生的纤维素超过70
33、亿吨，其中40%60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈如下图所示）。请回答下列问题。思考：要从土壤中分离纤维素分解菌，如何设计实验方案？可以到什么地方去寻找纤维素分解菌？选择培养基、鉴别培养基选择培养基、鉴别培养基考
34、向一围绕微生物的选择培养考向一围绕微生物的选择培养,考查归纳与概括的科学思维考查归纳与概括的科学思维1.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着降解苯酚的微生自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚物。某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤研究人员从土壤中 筛 选 获 得 了 只 能 降 解 利 用 苯 酚 的 细 菌 菌 株中 筛 选 获 得 了 只 能 降 解 利 用 苯 酚 的 细 菌 菌 株,筛 选 的 主 要 步 骤 如 图 所 示筛 选 的 主 要 步 骤 如 图 所 示,为 为
35、土壤样品。下列相关叙述错误的是土壤样品。下列相关叙述错误的是()A.图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B.如果要测定中活细菌数量如果要测定中活细菌数量,常采用稀释涂布平板法常采用稀释涂布平板法C.若图中为对照实验若图中为对照实验,则其中应以苯酚作为唯一的碳源则其中应以苯酚作为唯一的碳源D.使用平板划线法可以在上获得单菌落使用平板划线法可以在上获得单菌落C2.(不定项选择不定项选择)(2020山东青岛一模山东青岛一模)高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选高效产生高温淀粉酶的嗜
36、热菌的实用性。研究者从热泉中筛选高效产生高温淀粉酶的嗜热菌,其筛选过程其筛选过程如图如图1所示。将得到的菌悬液转接于同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培所示。将得到的菌悬液转接于同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养养基上培养,得到若干菌落后用碘液作显色处理得到若干菌落后用碘液作显色处理,看到如图看到如图2所示情况。下列所示情况。下列选项正确的是选项正确的是()图图1 图图2A.过程合称为稀释涂布平板法过程合称为稀释涂布平板法B.甲、乙试管中的液体均为选择培养基甲、乙试管中的液体均为选择培养基C.号培养基上的接种方法为平板划线法号培养基上的接种方法为平板划线法D.图图2中周围不显蓝色的菌落
37、含有所需菌种中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种ACD1.什么是选择培养基？2.如何配置选择培养基将土壤中能分解尿素的细菌分离出来？为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？3.细菌的最后的培养方法？如何判断培养基有无杂菌污染？如何判断该选择培养基是否有选择作用？4.为什么稀释涂布平板法可以统计样品中活菌的数目？为了保证结果准确，一般如何计数？5.为什么统计的菌落数往往比活菌的实际数目少？除稀释涂布平板法，常用的直接利用显微镜进行直接计数的方法有？6.测定土壤中细菌的数量，一般选用稀释倍数是？细菌一般的培养温度是？一般，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如？课前检测第32讲 发酵工程 考点四
38、：发酵工程及其应用课标：课标：3.2 3.2 发酵工程为人类提供多样的生物产品发酵工程为人类提供多样的生物产品3.2.1 3.2.1 举例说明日常生活中的某些食品是运用传统发酵技术生产的举例说明日常生活中的某些食品是运用传统发酵技术生产的3.2.2 3.2.2 阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品产品3.2.3 3.2.3 举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值1.培养基配置过程中，加入青霉素等抗生素的目的是？
39、2.平板划线中，第一次划线区域长满菌落，但第二划线区域划的第一条线上无菌落，其他划线有菌落，原因可能是？3.牛奶利用巴氏消毒法消毒的优点4.在腌制泡菜过程中，要注意控制腌制的_（3点），控制不当可能会导致亚硝酸盐含量增加。5培养微生物过程中，振荡培养的目的是？6.进行高压蒸汽灭菌时，发现压力锅内压力达到100kPa而温度未达到121的原因可能是？思考问题：注意：真菌等真核生物和病毒对抗生素不敏注意：真菌等真核生物和病毒对抗生素不敏感，细菌对抗生素敏感。感，细菌对抗生素敏感。考点四发酵工程及其应用1.发酵工程的基本环节发酵工程的基本环节环节内容选育菌种性状优良的菌种可以从 中筛选出来,也可以通过
40、 或基因工程育种获得 工业发酵罐的体积一般较大,接入的菌种总体积大。所以,在发酵之前还需要对菌种进行扩大培养 在生产实践中,培养基的配方要经过反复试验才能确定灭菌发酵工程中所用的菌种大多是 。和 都必须经过严格的灭菌自然界诱变育种配制培养基单一菌种培养基发酵设备扩大培养接种 发酵罐内发酵这是发酵工程的 。在发酵过程中,要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等,以了解 。还要及时添加必需的营养组分,要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅会影响微生物的 ,而且会影响微生物 如果发酵产品是微生物细胞本身,可在发酵结束之后,采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥,即可得到产品。如果产品是
41、代谢物,可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品获得产品 续表中心环节发酵进程生长繁殖代谢物的形成分离、提纯产物 2.发酵工程的应用发酵工程的应用食品工业生产 ,如酱油、各种酒类生产各种各样的 ,如柠檬酸、味精生产 ,如果胶酶、脂肪酶医药工业采用基因工程的方法,将植物或动物的基因转移到 中,获得具有某种药物生产能力的微生物;或者直接对 进行改造,再通过发酵技术大量生产所需要的产品未来可能用微生物来生产过去只能从植物中分离提取的 前体等化合物利用基因工程,将病原体的某个或某几个抗原基因转入适当的微生物细胞,获得的表达产物就可以作为 使用农牧业生产 ,如根瘤菌肥、固氮菌肥生产 ,如
42、井冈霉素生产微生物饲料,如 其他方面利用纤维废料发酵生产 ;极端微生物的研究传统的发酵产品 食品添加剂 酶制剂 微生物菌种 紫杉醇、青蒿素微生物肥料 微生物农药单细胞蛋白酒精、乙烯疫苗 5.(2020课标全国,37,15分)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解,会对环境造成污染,只有某些细菌能降解S。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基,甲的组分为无机盐、水和S,乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题:(1)实验时,盛有水或培养基的摇瓶通常采用 的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是 。甲、乙培养基均属于 培养基。(2)实
43、验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2107个/mL,若要在每个平板上涂布100 L稀释后的菌液,且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个,则至少应将摇瓶M中的菌液稀释 倍。(3)在步骤的筛选过程中,发现当培养基中的S超过某一浓度时,某菌株对S的降解量反而下降,其原因可能是 (答出1点即可)。(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数,请写出主要实验步骤:。(5)上述实验中,甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同,但都能为细菌的生长提供4类营养物质,即 。答案答案(1)高压蒸汽灭菌琼脂选择(2)104(3)S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长(4)取淤泥加入无菌水中,涂布(或稀释涂布)到乙培养基上,培养后计数(5)水、碳源、氮源和无机盐
