1、 我们村是我们村是96年发大水的时候成立的，都是一些逃难的难民，时间长了，就变年发大水的时候成立的，都是一些逃难的难民，时间长了，就变 成了一个村子。成了一个村子。 我们村风景秀丽，空气清新，村民们都靠着种地生活。我们村风景秀丽，空气清新，村民们都靠着种地生活。 我今天给大伙说的就是为我们村田地供水的小河！我今天给大伙说的就是为我们村田地供水的小河！ 从我记事起，这条河就没从我记事起，这条河就没 干过，好像连水位都没有变过，唯一改变的就是河边的杂草，越长越高。干过，好像连水位都没有变过，唯一改变的就是河边的杂草，越长越高。 这这 条河里经常可以看到很大的鱼在水面上呼吸，却从来没有人抓到过。条河
2、里经常可以看到很大的鱼在水面上呼吸，却从来没有人抓到过。 村子里村子里 大大小小的河都被药鱼的人光顾过。（每天半夜偷偷的往河里撒药，然后所有的大大小小的河都被药鱼的人光顾过。（每天半夜偷偷的往河里撒药，然后所有的 鱼都浮出水面，药鱼的再天亮之前把大鱼捞的差不多了，就跑了。第二天整个河鱼都浮出水面，药鱼的再天亮之前把大鱼捞的差不多了，就跑了。第二天整个河 面都是一群死鱼）面都是一群死鱼） 只有那条河从来没有被药过，村里老一辈的人都说这条河只有那条河从来没有被药过，村里老一辈的人都说这条河 里有东西成气候了，都不准小孩子过去玩。里有东西成气候了，都不准小孩子过去玩。 在河边有一块地是菜园子，村里在
3、河边有一块地是菜园子，村里 每家每户都有一块地，一年四季的专门种萝卜白菜之类的，基本上自给自足。每家每户都有一块地，一年四季的专门种萝卜白菜之类的，基本上自给自足。 而就在这段时间却发生了好多不可思议的事情。而就在这段时间却发生了好多不可思议的事情。 首先是我的邻居，一个首先是我的邻居，一个70岁岁 的老太太。的老太太。 菜园里栽了白菜，每天都要过去浇水。（河边专门弄出了一个提菜园里栽了白菜，每天都要过去浇水。（河边专门弄出了一个提 水的地方，方便提水。）水的地方，方便提水。） 老太太照常下去提水，就发现水里慢慢的浮起了一老太太照常下去提水，就发现水里慢慢的浮起了一 个大大的黑影，老太太吓的连
4、桶都不要了，慌忙爬到了岸上。个大大的黑影，老太太吓的连桶都不要了，慌忙爬到了岸上。 就看到一条足就看到一条足 足有两米多长足有两米多长 专题专题3 3 植物组织培养技术植物组织培养技术 （一一）基础知识基础知识 课题课题1 1： 菊花的组织培养菊花的组织培养 1 1、植物的组织培养、植物的组织培养 （1 1）细胞的分化）细胞的分化 概念：概念： 在在个体发育个体发育中，中，相同细胞相同细胞的后代在形的后代在形 态、结构、生理功能上发生态、结构、生理功能上发生稳定性差稳定性差 异异的过程的过程 过程：过程： 如：受精卵增殖、生长、分化形成组如：受精卵增殖、生长、分化形成组 织、器官、系统织、器官
5、、系统 原因：原因： 基因在特定的时间和空间条件下的选基因在特定的时间和空间条件下的选 择性表达的结果择性表达的结果 结果：结果： 形成不同的细胞和组织形成不同的细胞和组织 （2 2）细胞的全能性）细胞的全能性 定义：定义： 生物体的生物体的细胞细胞具有使后代细胞形成具有使后代细胞形成完整完整 个体个体的潜能的特性的潜能的特性 原原因因： 生物体的生物体的每一个细胞每一个细胞都包含有该物种所都包含有该物种所 特有的特有的全套遗传物质，都有发育成为完全套遗传物质，都有发育成为完 整个体所必需的全部基因整个体所必需的全部基因 高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能高度特化的动物细胞，从整个细胞来
6、说，全能 性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性， 这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的 遗传物质遗传物质 已分化的植物细胞，仍具有全能性已分化的植物细胞，仍具有全能性 实例实例 受精卵受精卵 生殖细胞生殖细胞 体细胞体细胞 全能性的比较全能性的比较: : （3 3）植物组织培养）植物组织培养 细胞离体细胞离体 必要条件：必要条件： 一定的营养物质一定的营养物质 植物植物激素激素 其他外界条件其他外界条件（温度、（温度、PHPH、光照等）、光照等） 原理原理: : 细胞的全能性细胞的全能性 无菌操作无菌操作
7、 脱分化：脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细由高度分化的植物器官、组织或细 胞产生愈伤组织的过程，又叫去分化。胞产生愈伤组织的过程，又叫去分化。 再分化：再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养过程脱分化产生的愈伤组织在培养过程 中重新分化产生根或芽等器官的过程。中重新分化产生根或芽等器官的过程。 愈伤组织愈伤组织: :细胞排列疏松而无规则细胞排列疏松而无规则, ,是高度液泡是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞化的、成无定形状态的薄壁细胞 外植体外植体：从活植物体上切下进行培养的那部：从活植物体上切下进行培养的那部 分细胞、组织或器官分细胞、组织或器官 相关概念相关概念: : 人参的愈伤组织
8、人参的愈伤组织 菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织 2 2、影响植物组织培养的因素、影响植物组织培养的因素？ （1 1）植物材料的选择）植物材料的选择（内因）（内因） 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的同一植物材料的年龄、保存时间年龄、保存时间的长短会的长短会 影响实验结果影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝上部新萌生的侧枝 种类种类 原因：原因： 代谢旺盛，幼嫩组织容易脱分化和培养代谢旺盛，幼嫩组织容易脱分化和培养 （2 2）营养成分：
9、营养成分：MSMS培养基培养基 不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要 求相对特殊，需配置不同的培养基求相对特殊，需配置不同的培养基 MSMS培养基主要成分包括：培养基主要成分包括： A A、大量元素、大量元素: : N N、P P、 S S 、 K K、CaCa、MgMg等等 B B、微量元素、微量元素: :B B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、 CoCo等等 C C、有机物、植物激素、有机物、植物激素 讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2 2中微生物培养基的配方相比
10、，中微生物培养基的配方相比，MSMS培养基的配方培养基的配方 有哪些明显的不同？有哪些明显的不同？ 答：答：微量元素和大量元素微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必提供植物细胞生活所必 需的需的无机盐无机盐；蔗糖蔗糖提供提供碳源碳源，同时能够维持细胞，同时能够维持细胞 的的渗透压渗透压；甘氨酸、维生素甘氨酸、维生素等物质主要是为了满等物质主要是为了满 足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后 所产生的所产生的特殊营养需求特殊营养需求。 微生物微生物培养基以培养基以有机营养为主有机营养为主。与微生物的培养。与微生物的培养 不同，不同，MSMS培养基培养
11、基则需提供则需提供大量无机营养大量无机营养，无机，无机 盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元 素两大类。素两大类。 常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素赤霉素 生长素类：生长素类： 2 2，4 4二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（2 2，4 4DD）、）、 吲哚乙酸（吲哚乙酸（IAAIAA）、萘乙酸（）、萘乙酸（NAANAA）、）、 吲哚丁酸（吲哚丁酸（IBAIBA） 细胞分裂素类：细胞分裂素类： 激动素（激动素（KTKT）、）、6 6苄基嘌呤苄基嘌呤 （ 6 6BABA）、玉米素（）、玉米素（ZTZT） 赤
12、霉素类：赤霉素类： 赤霉酸（赤霉酸（GA3GA3） （3 3）植物激素的影响）植物激素的影响 生长素和细胞分裂素生长素和细胞分裂素使用顺序与用量使用顺序与用量 使用顺序使用顺序 实验结果实验结果 先使用生长素，后使用先使用生长素，后使用 细胞分裂素细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不有利于细胞分裂，但不 利分化利分化 先使用细胞分裂素后使先使用细胞分裂素后使 用生长素用生长素 细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化 同时使用同时使用 分化频率高分化频率高 生长素生长素 细胞分裂素：细胞分裂素： 有利于根的分化有利于根的分化 生长素生长素 细胞分裂素：细胞分裂素： 生长素生长素 细胞分裂细胞分裂 素素 生
13、长素生长素 再分化再分化 植物细胞培养植物细胞培养 不需要光不需要光 需要光需要光 二、实验操作二、实验操作 （一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基 MSMS培养基包括培养基包括2020多种营养成分，实验室一般多种营养成分，实验室一般 使用使用4 4。 。C C保存 保存配制好的培养基母液配制好的培养基母液来制备来制备 1 1、配置各种母液、配置各种母液 无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩1010倍，微量元素浓倍，微量元素浓 缩缩100100倍，常温保存倍，常温保存 激素类、维生素类以及用量较小的有机物一激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按般可按1mg/ml1mg/m
14、l的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液 用母液配制培养基时，需要根据各种母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量的浓缩倍数，计算用量 2 2、配置培养基、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml100ml 配制培养液配制培养液 调调PHPH 培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素不必添加植物激素 3 3、灭菌、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌汽灭菌 1 1、选材：、选材
15、：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒（二）外植体消毒 2 2、消毒、消毒 （三）接种（三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用室消毒是至关重要的。用7070的酒精喷雾使空的酒精喷雾使空 气消毒，气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外 线照射线照射2020分钟分钟 1 1、接种室消毒、接种室消毒 2 2、无菌操作要求、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用都需要用火焰灼烧灭菌火焰灼烧
16、灭菌，接种后立即盖好瓶盖。，接种后立即盖好瓶盖。 3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？验吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 （四）培养（四）培养 1 1、愈伤组织的培养、愈伤组织的培养 从接种外
17、植体到出现愈伤组织需经过从接种外植体到出现愈伤组织需经过2 2周时间。周时间。2 2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。伤组织长的更快。2 2周后，培养基成分接近耗尽，周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养必须更换培养基，进行继代培养 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同， 在严格的无菌条件下，
18、将愈伤组织连同原来的外在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外 植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养 一代为一代为20d20d。如果延长时间，培养基中营养物质。如果延长时间，培养基中营养物质 减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 如果愈伤组织长到直径为如果愈伤组织长到直径为1 11.5cm1.5cm时，就可以时，就可以 进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养 2 2、愈伤组织的继代培养、愈伤组织的继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，在愈
19、伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开， 让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为 绿色绿色 3 3、试管苗的培养、试管苗的培养 当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基， 进行试管苗的进行试管苗的见光培养见光培养 （五）移栽（五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 1 1、打开封口膜、打开封口膜 2 2、清洗转移、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过将
20、幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间 （六）栽培（六）栽培 3 3、移栽、移栽 珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、 透性好，适合栽培透性好，适合栽培 幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情 况，适时浇水、施肥，直至开花况，适时浇水、施肥，直至开花 三、课题延伸三、课题延伸 1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也 容易进行组织培养容易进行组织培养 2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季
