1、实验实验十十一一 邻二氮菲分光光度法测微量铁邻二氮菲分光光度法测微量铁 一、实一、实 验验 目目 的的 二、实二、实 验验 原原 理理 三、仪三、仪 器器 与与 试试 剂剂 四、实四、实 验验 步步 骤骤 五、数五、数 据据 记记 录录 与与 处处 理理 六、注六、注 意意 事事 项项 七、思七、思 考考 题题 一、实验目的一、实验目的1.学会比色法测定中标准曲线的绘制。学会比色法测定中标准曲线的绘制。2.了解分光光度计的性能、结构及使用方法。了解分光光度计的性能、结构及使用方法。二、实验原理二、实验原理 邻菲罗啉（又称邻二氮杂菲）是测定微邻菲罗啉（又称邻二氮杂菲）是测定微量铁的一种较好试剂，
2、其结构如下：量铁的一种较好试剂，其结构如下：在在pH=1.59.5的条件下，的条件下，Fe2+与邻菲罗与邻菲罗啉生成很稳定的橙红色的络合物。啉生成很稳定的橙红色的络合物。反应方程式如下：反应方程式如下：橙红色络合物的吸光度与浓度的关系符合朗伯橙红色络合物的吸光度与浓度的关系符合朗伯-比耳定律。比耳定律。此络合物的此络合物的logK稳稳=21.3，=11000。在显色前，首先用盐酸羟胺把在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3+还原为还原为Fe2+：4 Fe3+2NH2OH4 Fe2+N2O+H2O+4H+测定时，控制溶液酸度在测定时，控制溶液酸度在pH=29较适较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，
3、则宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe2+水解，影响显色。水解，影响显色。Bi3+、Ca2+、Hg2+、Ag+、Zn2+离子与显离子与显色剂生成沉淀，色剂生成沉淀，Cu2+、Co2+、Ni2+离子则形离子则形成有色络合物，因此当这些离子共存时应注成有色络合物，因此当这些离子共存时应注意它们的干扰作用。意它们的干扰作用。三、仪器和试剂三、仪器和试剂仪器仪器:721721型分光光度计、比色管（型分光光度计、比色管（50ml50ml）等）等试剂试剂:1 1）A液（母液液（母液0.1gL-1）：准确称取）：准确称取1.4060g分析纯硫酸亚铁铵分析纯硫酸亚铁铵(NH4)2Fe(SO4)26H2O
4、于于200mL烧烧杯中，加入杯中，加入50.0mL 1molL-1HCl，完全溶解后，移入，完全溶解后，移入250mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀。容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀。2 2）B液（液（0.01gL-1）：用）：用25mL移液管，准确移取移液管，准确移取A液液25.00mL，置于，置于250mL的容量瓶中，加去离子水稀的容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，备用。释至刻度，摇匀，备用。3 3）0.15%0.15%邻菲罗啉水溶液；邻菲罗啉水溶液；4 4）10%10%盐酸羟胺水溶液；盐酸羟胺水溶液；5 5）醋酸钠溶液（）醋酸钠溶液（1mol/L1mol/L）6 6）HCl
5、HCl(6mol/L)(6mol/L)四、实验步骤四、实验步骤1.吸收曲线的绘制和测量波长的选择吸收曲线的绘制和测量波长的选择 用吸管吸取铁盐标准溶液用吸管吸取铁盐标准溶液5.00mL于于50mL比色管瓶中，依次加入比色管瓶中，依次加入5.0mL HAcNaAc缓缓冲液、冲液、2.5mL盐酸羟胺、盐酸羟胺、5.0mL邻菲罗啉溶邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用1cm比比色皿以试剂空白为参比，在色皿以试剂空白为参比，在510nm测定溶液测定溶液的吸光度值。的吸光度值。2.标准曲线绘制标准曲线绘制 分别移取铁的标准溶液分别移取铁的标准溶液(0.01gL-1)
6、0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于于6只只50mL比色管中；依次分别比色管中；依次分别加入加入5.0mL HAcNaAc缓冲液、缓冲液、2.5mL盐酸羟胺、盐酸羟胺、5.0mL邻菲罗啉溶液；用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，邻菲罗啉溶液；用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置放置10min；在其最大吸收波长；在其最大吸收波长(510nm)下，用下，用1cm的比色皿测得各标准溶液的吸光度，以不含的比色皿测得各标准溶液的吸光度，以不含铁的试剂溶液作参比溶液；铁的试剂溶液作参比溶液；3.试样中铁的含量测定试样中铁的含量测定 吸取试液吸取试液10.0mL于于50mL比色管中，加入比色管中，加入5.0
7、mL HAcNaAc缓冲液、缓冲液、2.5mL盐酸羟胺、盐酸羟胺、5.0mL邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置摇匀，放置10min。仍以不含铁的试剂溶液作参比溶液，于仍以不含铁的试剂溶液作参比溶液，于分光光度计上测定吸光度。分光光度计上测定吸光度。五、数据记录与处理五、数据记录与处理y=0.300 x+0.002R=0.99900.511.520123456C(105)12345A0.3210.5820.8961.2221.501绘制绘制标准标准曲线曲线待测液含量计算公式：待测液含量计算公式：y=0.300 x+0.002y-0.002x=0.300W待测待测（g/ml）=x*0.01/10 六、注意事项六、注意事项 1.注意放置注意放置10min反应完全后立即测定反应完全后立即测定2.注意吸取溶液一定要规范操作。否则得到注意吸取溶液一定要规范操作。否则得到的标准曲线偏差大。的标准曲线偏差大。七、思考题七、思考题 如果试样测得的吸光度不在标准曲线范如果试样测得的吸光度不在标准曲线范围之内怎么办围之内怎么办?
