1、结核杆菌特异性细胞免疫反应检测结核杆菌特异性细胞免疫反应检测 准确、快速、简便的结核感染检测准确、快速、简便的结核感染检测2u感染人数：全球人口的1/3，中国的感染率为44.5%；感染者一生中会有约10%的风险发展成为结核病；u年新发病例数：全球每年报告新病例约800-1000 万；中国每年报告新病例约150万；u死亡人数：全球每年死亡病例约300万；其中中国约13万；u中国是全球22个结核病高负担国家之一。3u影像学方法：特异性较差，与医师的经验有关，主观性强。u培养：结核病诊断金标准，敏感性为30-50%且耗时2-8周；u抗酸染色法（俗称涂片）：敏感性为30-40%；u血清结核抗体定性检测
2、：敏感性在0-100%，特异性约为47-100%；u分子诊断方法（如PCR）：重复性较差，需要痰标本；u结核菌素试验（TST）：受卡介苗干扰，特异性差，在肺结核病人中存在10-25%的假阴性。4应用现状应用现状：技术是国际最新的用于结核杆菌感染的体外免疫诊断方法；u在北美、欧洲和日本已被广泛应用于结核杆菌感染的检测，包括结核病辅助诊断；公共卫生突发事件；健康人群体检等；u美国和日本已经将该技术写入该国用于结核防治的指导原则中。5 细胞IGRA；全血IGRA；尚未获得中国SFDA批准进入中国；全血IGRA；结核杆菌特异性细胞免疫反应检测结核杆菌特异性细胞免疫反应检测2011年7月6日，获中华人民
3、共和国食品药品监督管理局（SFDA）批准上市生生 产产 企企 业业：海口维瑅瑷生物研究院注注 册册 号号：国食药监械（准）字2011第3400801；产品标准编号产品标准编号：YZB/国 2442-2011，项项 目目 类类 别别：体外三类诊断试剂 原理与技术背景-干扰素释放实验（干扰素释放实验（IGRA）（IGRA，interferon-gamma release assay）酶联免疫技术（酶联免疫技术（ELISELISA A）（ELISA，Enzyme-Linked ImmunoAssay）结核杆菌特异抗原结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6（ESAT-6）early secreted anti
4、genic target 6 培养滤液蛋白10（CFP 10）（culture filtrate protein 10）l 基本原理基本原理1 机体感染结核杆菌后产生的T淋巴细胞在体外受到特异性抗原刺激时会释放-干扰素，通过对-干扰素的定量分析可判断是否具有结核杆菌的特异性T细胞反应。-干扰素释放实验（IGRA）-干扰素抗原呈递细胞脱毒的炭疽毒素致死因子片段LFn，可以起到分子注射器的作用LFnESAT6/LFnCFP10产品特点产品特点2高灵敏度高灵敏度 结核感染引起的细胞免疫反应早于细菌学及影像学表现；无需带菌标本无需带菌标本，适用于“菌阴肺结核菌阴肺结核”及“肺外结核肺外结核”的鉴别 受
5、个体免疫功能低下影响小；受个体免疫功能低下影响小；高特异性高特异性 不受卡介苗与绝大多数环境非结核分枝杆菌影响 安全快速安全快速 只需患者提供 3ml 静脉全血，次日可出报告A.TBA.TB临床性能指标临床性能指标国内临床数据1 1085 085 例样本 试验组 472 472 例：菌阳结核 菌阴结核 对照组 613 例：健康志愿者 非结核其它肺部疾病 临床诊断性能临床诊断性能诊断性能指标诊断性能指标结果（结果（95%CI）敏感性83.3%79.9%-86.7%特异性85.6%82.8%-88.4%准确度84.6%82.5%-86.7%阳性预测值81.7%78.2%-85.2%阴性预测值86.
6、9%84.2%-89.6%阳性似然比 5.84.8-7.1阴性似然比 0.20.16-0.24疾病类型 例数 A.TB 阳性阴性 艾滋病感染者合并活动性结核 88(100%)0(0%)糖尿病合并活动性结核 1312(92.3%)1(7.7%)类风湿合并活动性结核 54(80%)1(20%)结核性胸膜炎同时服用免疫抑制剂 97(77.8%)2(22.2%)合 计 3531(88.6%)4(11.4%)A.TBA.TB临床诊断数据临床诊断数据-2-2样本要求样本要求1.新鲜采集的肝素钠肝素钠抗凝全血2.每份样本不得少于3 ml3 ml3.样本常温常温（15-25）保存，不得冷冻或冷藏4.样本采集后
7、 16 16 小时小时内进行前处理（抗原刺激）A.TBTM 操作过程操作过程阴性刺激剂阳性刺激剂A.TB刺激剂样本采集：3ml新鲜全血，肝素钠抗凝37 16小时内运输常温22-24小时血浆收获标准曲线制备、样品检测450nm读数37 第一步：样本的刺激第一步：样本的刺激第二步：第二步：ELISAELISA定量定量IFN-IFN-N P TN P T0.5小时约3小时样本的刺激和孵育A.TBTM 报告单报告单姓名年龄性别 ID号科别诊断样本 样本号检测项目检测项目测定结果测定结果 单位单位计算公式计算公式T/P参考范围参考范围 提示提示混合淋巴细胞培养+干扰素（P）9.86IU/ml0.24 0
8、.6阴性（-）混合淋巴细胞培养+干扰素（T）2.34IU/ml备注：患者样本经结核分枝杆菌RD1区编码的全抗原刺激后，特异性释放的-干扰素水平为 2.34 IU/ml；非特异释放的-干扰素水平为 9.86 IU/ml；两者的比值为：0.24；是否为活动性结核，请结合临床进行判断。N值体现的是机体的本底干扰素水平值体现的是机体的本底干扰素水平P 值体现的是整体的机体免疫水平是否正常值体现的是整体的机体免疫水平是否正常T 值体现的是机体内值体现的是机体内T淋巴细胞对结核杆菌特异性抗原刺激的反应淋巴细胞对结核杆菌特异性抗原刺激的反应 交叉反应性交叉反应性 以IL-1，IL-2，IL-4，IL-5，I
9、L-6，IL-8，IL-10，TNF-，GM-CSF等 9种细胞因子作为干扰物在反应体系中的浓度与-干扰素的浓度相当或为-干扰素浓度的2-4倍时，无明显交叉反应性。干扰样本对检测的影响干扰样本对检测的影响溶血：游离血红蛋白浓度达156.6-683.9 g/ml时，对本产品的检测结果未见显著影响脂血：甘油三酯水平最高达9.35mmol/L 对本产品的检测结果没有显著影响类风湿：类风湿因子11.3-79.6U/ml，C反应蛋白为96.3-245.9mg/L 时对检测结果没有明显影响免疫抑制剂：肾上腺皮质激素类免疫抑制剂强的松（血药浓度32.1-75.1 ng/ml）对本产品的检测结果没有影响；大环内脂类免疫抑制剂FK506患者的样本不推荐用本产品检测 20艾滋病毒和结核菌双重感染者；结核病高危人群：如糖尿病、矽肺、胃切除后等，应用免疫抑制剂者，及强制性脊柱炎使用TNF治疗前等；（见前述P5,P6）u体检（含不孕不育体检）等
