1、 第第二十二十章章 生物制品分析生物制品分析本章主要内容本章主要内容生物制品生物制品的分类的分类生物制品的生物制品的质量要求质量要求生物制品生物制品鉴别试验、鉴别试验、检查内容检查内容起源与发展起源与发展 10世纪时，中国发明了种痘术，用人痘接种世纪时，中国发明了种痘术，用人痘接种法预防天花，这是人工自动免疫预防传染病的创法预防天花，这是人工自动免疫预防传染病的创始。种痘不仅减轻了病情，还减少了死亡。始。种痘不仅减轻了病情，还减少了死亡。17世纪时，俄国人来中国学习种痘，随后传世纪时，俄国人来中国学习种痘，随后传到土耳其、英国、日本、朝鲜、东南亚各国，后到土耳其、英国、日本、朝鲜、东南亚各国，
2、后又传入美洲、非洲。又传入美洲、非洲。1796年英国人年英国人E.詹纳发明接种牛痘苗方法詹纳发明接种牛痘苗方法预防天花，他用弱毒病毒（牛痘）给人接种，预预防天花，他用弱毒病毒（牛痘）给人接种，预防强毒病毒（天花）感染，使人不得天花。此法防强毒病毒（天花）感染，使人不得天花。此法安全有效，很快推广到世界各地。牛痘苗可算作安全有效，很快推广到世界各地。牛痘苗可算作第一种安全有效的生物制品。第一种安全有效的生物制品。19世纪中期，世纪中期，“免疫免疫”概念已基本形成。概念已基本形成。1885年法国人年法国人L.巴斯德发明狂犬病疫苗，巴斯德发明狂犬病疫苗，用人工方法减弱病毒的致病毒力，做成疫苗用人工方
3、法减弱病毒的致病毒力，做成疫苗，被狂犬咬伤的人及时注射疫苗后，可避免，被狂犬咬伤的人及时注射疫苗后，可避免发生狂犬病。巴斯德用同样方法制成鸡霍乱发生狂犬病。巴斯德用同样方法制成鸡霍乱活疫苗、炭疽活疫苗，将过去以毒攻毒的办活疫苗、炭疽活疫苗，将过去以毒攻毒的办法改为以弱制强。法改为以弱制强。19世纪末日本人北里柴三郎和德国人贝世纪末日本人北里柴三郎和德国人贝林林，E.(A.）用化学法处理白喉和破伤风毒素）用化学法处理白喉和破伤风毒素，使其在处理后失去了致病力，接种动物后，使其在处理后失去了致病力，接种动物后的血清中和相应的毒素，这种血清称为的血清中和相应的毒素，这种血清称为抗毒抗毒素素，这种脱毒
4、的毒素称为类毒素。，这种脱毒的毒素称为类毒素。抗原抗原抗体反应抗体反应概念的出现，有助于临床概念的出现，有助于临床诊断。这些为微生物和免疫学发展奠定了基诊断。这些为微生物和免疫学发展奠定了基础，继续发展出各种生物制品，在预防疾病础，继续发展出各种生物制品，在预防疾病方面越发显得重要，是控制和消灭传染病不方面越发显得重要，是控制和消灭传染病不可缺少的步骤之一。可缺少的步骤之一。中国生物制品发展史中国生物制品发展史 1978年年 WHO作出作出扩大免疫规划扩大免疫规划(EPI），），目的是对全球儿童实施免疫。目的是对全球儿童实施免疫。EPI是用四种疫是用四种疫苗预防六种疾病，即苗预防六种疾病，即卡
5、介苗卡介苗预防结核病；预防结核病；麻麻疹疹活疫苗预防麻疹；活疫苗预防麻疹；脊髓灰质炎脊髓灰质炎疫苗预防脊疫苗预防脊髓灰质炎；百白破三联预防百日咳、白喉和髓灰质炎；百白破三联预防百日咳、白喉和破伤风，有计划地从儿童开始，使世界儿童破伤风，有计划地从儿童开始，使世界儿童都得到免疫。都得到免疫。1981年，中国响应年，中国响应WHO的号召的号召，实行计划免疫，按要求用国产四种疫苗预，实行计划免疫，按要求用国产四种疫苗预防六种疾病。防六种疾病。生物制品及检定规程草案（生物制品及检定规程草案（1952年）年）生物制品制造检定规程（生物制品制造检定规程（1959年）年）中国生物制品规程中国生物制品规程6版
6、（版（2000年）年）中华人民共和国药典三部（中华人民共和国药典三部（2010年）年）生物制品质量标准的发展生物制品质量标准的发展中国生物制品规程并入中国生物制品规程并入2005年版中国药典年版中国药典20102010版版中国药典中国药典第三部第三部 生物制品生物制品131131种种,新增新增2828种，修订种，修订103103种种 内容：凡例、通则、各论、附录和内容：凡例、通则、各论、附录和索引索引 各论收载：疫苗；抗毒素及抗血清；各论收载：疫苗；抗毒素及抗血清；血液制品；重组血液制品；重组DNADNA制品；体内诊断制制品；体内诊断制品；其他制品品；其他制品 生物制品生物制品（biologi
7、cal productsbiological products）：）：以微生物、细胞、动物或人源组织和以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防，治疗和技术制成，用于人类疾病的预防，治疗和诊断诊断的制品的制品。第一节第一节 生物制品的分类生物制品的分类 根据生物制品的用途分为三类：根据生物制品的用途分为三类：预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗和联预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗和联合疫苗合疫苗 治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子及、细胞因子及DNA重组技术制品和单克重
8、组技术制品和单克隆抗体隆抗体 诊断类：体内诊断类和体外诊断类诊断类：体内诊断类和体外诊断类 根据所采用的材料、制法或用途不根据所采用的材料、制法或用途不同，可分为四类同，可分为四类:u疫苗类药物疫苗类药物u抗毒素及抗血清类药物抗毒素及抗血清类药物u血液制品血液制品u重组重组DNA制品制品（一）疫苗类药物（一）疫苗类药物 定义定义:用病毒或立克次体接种于动物、用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制造。鸡胚，或经组织培养后加以处理制造。分类分类:（1）细菌类疫苗：由有关细菌、螺旋体）细菌类疫苗：由有关细菌、螺旋体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭
9、活疫苗、重组、重组DNA疫苗、亚单位疫苗等。如：皮疫苗、亚单位疫苗等。如：皮内注射卡介苗、吸附破伤风疫苗、乙型脑内注射卡介苗、吸附破伤风疫苗、乙型脑炎减毒疫苗、人用狂犬病疫苗等。炎减毒疫苗、人用狂犬病疫苗等。（2）减毒类疫苗：由病毒、衣原体、立）减毒类疫苗：由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭克次体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组活疫苗、重组DNA疫苗、亚单位疫苗等。疫苗、亚单位疫苗等。如：口服脊髓灰质炎减毒疫苗如：口服脊髓灰质炎减毒疫苗 麻疹减毒活疫苗麻疹减毒活疫苗 风疹减毒活疫苗风疹减毒活疫苗 腮腺炎减毒活疫苗腮腺炎减毒活疫苗 重组乙型肝炎疫苗重组乙型肝炎疫苗
10、甲型肝炎减毒活疫苗甲型肝炎减毒活疫苗 流感全病毒灭活疫苗流感全病毒灭活疫苗 （3）联合疫苗：指两种或两种以上疫）联合疫苗：指两种或两种以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多种苗原液按特定比例配合制成的具有多种免疫原性的灭活疫苗或活疫苗。如：免疫原性的灭活疫苗或活疫苗。如：伤寒副伤寒甲乙联合疫苗伤寒副伤寒甲乙联合疫苗 吸附百白破联合疫苗吸附百白破联合疫苗 麻疹腮腺炎联合减毒疫苗麻疹腮腺炎联合减毒疫苗 （4）双价疫苗及多价疫苗：由单一）双价疫苗及多价疫苗：由单一型抗原成分组成的疫苗通称单价疫苗。型抗原成分组成的疫苗通称单价疫苗。有两个或两个以上同一种但不同型抗原有两个或两个以上同一种但不同型抗原合
11、并组成的含有双价或多价抗原成分的合并组成的含有双价或多价抗原成分的一种疫苗，则分别称为双价疫苗或多价一种疫苗，则分别称为双价疫苗或多价疫苗。如双价肾综合征出血热灭活疫苗疫苗。如双价肾综合征出血热灭活疫苗。（二）抗毒素及抗血清类药物（二）抗毒素及抗血清类药物 定义：凡用细菌类毒素或毒素免疫马或其定义：凡用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物所得的免疫血清叫抗毒素或抗毒血清他大动物所得的免疫血清叫抗毒素或抗毒血清。如：。如：破伤风抗毒素破伤风抗毒素 白喉抗毒素白喉抗毒素 肉毒抗毒素肉毒抗毒素 凡用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物凡用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所得的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清。所
12、得的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清。如：抗蝮蛇毒血清如：抗蝮蛇毒血清 抗五步蛇毒血清抗五步蛇毒血清 抗狂犬病血清抗狂犬病血清（三）血液制品（三）血液制品 定义：由健康人的血液或经特异免定义：由健康人的血液或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或重组疫的人血浆，经分离、提纯或重组DNA技术制成的血浆蛋白成分，以及血液细技术制成的血浆蛋白成分，以及血液细胞有形成分统称为血液制品。胞有形成分统称为血液制品。如：人血白蛋白如：人血白蛋白 人免疫球蛋白人免疫球蛋白 人凝血因子人凝血因子（四）重组（四）重组DNA制品制品 重组重组DNA制品的类别：制品的类别：细胞因子类细胞因子类 生长因子类生长因子类 激素类激素
13、类 酶类酶类 疫苗类疫苗类 诊断制品诊断制品生物制品的特点生物制品的特点都是来自生物体或通过生物手段获得都是来自生物体或通过生物手段获得分子量都较大：几十分子量都较大：几十KDKD几千几千KDKD，不是固定，不是固定值值化学结构式难以确认，单单是光谱分析方法难化学结构式难以确认，单单是光谱分析方法难以进行以进行在生产过程中需要全面的质量控制在生产过程中需要全面的质量控制往往需要进行安全性检查往往需要进行安全性检查 热源、过敏、异热源、过敏、异常毒性、致突变、生殖毒性常毒性、致突变、生殖毒性第二节第二节 生物制品的质量要求生物制品的质量要求1 1、安全性：使用安全，副作用小。、安全性：使用安全，
14、副作用小。2 2、有效性：使用后能产生相应的效力。、有效性：使用后能产生相应的效力。3 3、可接受性：生产工艺、储运条件、成品的、可接受性：生产工艺、储运条件、成品的药效、稳定性、外观、包装、使用方法和价药效、稳定性、外观、包装、使用方法和价格是可接受的。格是可接受的。生物制品的全程质量控制生物制品的全程质量控制 生物制品生物制品u品名u定义、组成及用途u基本要求u制造u检定（原液,半成品,成品）u保存运输及有效期u使用说明（仅预防类含此项）化学药品化学药品品名化学结构、分子式性状鉴别检查含量测定药典三部各论内容药典二部各论内容 第三节第三节 鉴别试验鉴别试验 免疫学法免疫学法：体外抗体抗原试
15、验：体外抗体抗原试验 （1 1）免疫双扩散法）免疫双扩散法 在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别加入抗原与抗体，若抗在相邻的两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应，浓度、比例适当，则一原、抗体互相对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原与抗体孔之间形成免疫复定时间后，在抗原与抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀线。合物的沉淀线。（2）免疫电泳法）免疫电泳法 将供试品通过电泳分离成区带的各将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的抗体进行双相免疫抗原，然后与相应的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉扩散，当两者比例
16、合适时形成可见的沉淀弧。淀弧。（3）免疫印迹法）免疫印迹法 以供试品与特异性抗体结合后，抗以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。行检查。（4）免疫斑点法）免疫斑点法 同免疫印迹法，具体操作有所不同。同免疫印迹法，具体操作有所不同。（5）酶联免疫法（）酶联免疫法（ELISA法）法）让抗体与酶复合物结合，然后通过显让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。色来检测。第四节第四节 生物制品检查内容生物制品检查内容 理化检定理化检定 安全检定安全检定 效力检定效力检定
17、 （一）物理性状的检查（一）物理性状的检查 1 1、外观、外观 通过特定的人工光源进行目测，不通过特定的人工光源进行目测，不同的制品有不同的要求。同的制品有不同的要求。2 2、真空度及溶解速率、真空度及溶解速率 3 3、装量、装量 容量法测试。容量法测试。（二）蛋白质含量测定（二）蛋白质含量测定检测有效成分，计算纯度和比活度。检测有效成分，计算纯度和比活度。凯氏定氮法、酚试剂法和双缩脲法凯氏定氮法、酚试剂法和双缩脲法（三）防腐剂和灭活剂含量测定（三）防腐剂和灭活剂含量测定 非有效成分，非有效成分，控制限度控制限度 （四）纯度检查（四）纯度检查 电泳法或高效液相色谱法。电泳法或高效液相色谱法。（
18、五）相对分子质量或分子大小的测定（五）相对分子质量或分子大小的测定 对提纯的蛋白质制品和多糖疫苗测对提纯的蛋白质制品和多糖疫苗测定分子质量或大小。定分子质量或大小。凝胶层析法、凝胶层析法、SDS-PAGE法法 和超速离和超速离心分析法心分析法 （六）其他（六）其他 水分测定、酸碱度、氯化钠测定等水分测定、酸碱度、氯化钠测定等 （七）安全检查（七）安全检查 1、安全检查对象、安全检查对象 菌毒种和主要原材料、半成品（包括菌毒种和主要原材料、半成品（包括原液）和成品。原液）和成品。2、安全检查内容、安全检查内容 （1）过敏性物质的检查）过敏性物质的检查1）过敏性试验）过敏性试验2）牛血清含量的测定
19、）牛血清含量的测定3）血型物质的检测）血型物质的检测 （2）杀菌、灭活和脱毒检查）杀菌、灭活和脱毒检查无菌试验、活毒检查和解毒试验。无菌试验、活毒检查和解毒试验。（3）残余毒力和毒性物质的检查）残余毒力和毒性物质的检查1）残余毒力检查）残余毒力检查2）无毒性检查）无毒性检查3）毒性检查）毒性检查4）防腐剂检查）防腐剂检查 （4）外源性污染检查）外源性污染检查1）野毒检查）野毒检查2）热原试验）热原试验3）乙型肝炎表面抗原）乙型肝炎表面抗原 （八）生物制品的效力测定（八）生物制品的效力测定 生物学方法生物学方法:利用生物体来测定待利用生物体来测定待检品的生物活性或效价的一种方法。检品的生物活性或
20、效价的一种方法。1、免疫力试验、免疫力试验2、活菌数和活病毒滴度测定、活菌数和活病毒滴度测定3、血清学试验、血清学试验 一般杂质检查一般杂质检查（同化学药）（同化学药）特殊杂质检查：生物污染物、产品相关杂特殊杂质检查：生物污染物、产品相关杂质质和和工艺添加剂工艺添加剂（九）杂质检查（九）杂质检查特殊杂质检查特殊杂质检查1 1、宿主细胞蛋白残留量的检查、宿主细胞蛋白残留量的检查目的：控制异源蛋白的含量以防超量后引起机体免目的：控制异源蛋白的含量以防超量后引起机体免疫反应疫反应测定法：酶联免疫吸附剂测定法测定法：酶联免疫吸附剂测定法ELISAELISA2 2、外源性、外源性DNADNA残留量的检查
21、残留量的检查目的：防止外源性目的：防止外源性DNADNA对人类的危害对人类的危害测定法：测定法：DNADNA探针杂交法探针杂交法、荧光染色法荧光染色法3 3、残余抗生素的检查、残余抗生素的检查目的：控制生物制品制备时抗生素的用量目的：控制生物制品制备时抗生素的用量测定法：抑菌试验测定法：抑菌试验4 4、产品相关杂质的检查同系物、异构体、产品相关杂质的检查同系物、异构体、降解产物等降解产物等第五节第五节 生物制品质量控制实例生物制品质量控制实例v人血白蛋白质量控制规程人血白蛋白质量控制规程v参考参考ChP2010ChP2010三部正文三部正文小结小结 生物制品分类生物制品分类 生物制品质量控制要求生物制品质量控制要求 鉴别试验鉴别试验 检查内容检查内容练习与思考练习与思考1 1、生物制品特殊杂质检查、安全性检查、生物制品特殊杂质检查、安全性检查分别包括哪些项目？分别包括哪些项目？2 2、生物制品包括哪几类？生物制品包括哪几类？3 3、与化学合成药物的分析相比，生物药与化学合成药物的分析相比，生物药物的分析有何特点？物的分析有何特点？
