1、XXX 年度本科生毕业论文（设计） 苹果斑点落叶病菌拮抗芽孢杆菌的筛选 院 系：生命科学与技术学院 专 业：植物保护 年 级：XX 学生姓名：XXXX 学 号：XXXXX 导师及职称：XXX（副教授） 20XX 年 XX 月 2018 Annual Graduation Thesis (Project) of the College Undergraduate Screening of Antagonistic Bacillus agai nst Alternaria graminis Department: College of Life Science and Technology Maj
2、or: Plant protection Grade: 2013 Students Name: YuanWen-yu Student No.: 201301130840 Tutor: Associate Professor Zhou Yin-li April, XXX 毕业论文（设计）原创性声明毕业论文（设计）原创性声明 本人所呈交的本人所呈交的毕业论毕业论文（文（设计设计）是我在）是我在导师导师的指的指导导下下进进行的研究行的研究 工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经经注明引用的内容外，注明引用的内容外， 本本论论文（文（设计设计）不包含其他个人
3、已）不包含其他个人已经发经发表或撰写表或撰写过过的研究成果。的研究成果。对对本本论论 文（文（设计设计）的研究做出重要）的研究做出重要贡贡献的个人和集体，均已在文中作了明确献的个人和集体，均已在文中作了明确说说 明并表示明并表示谢谢意。意。 作者作者签签名：名： 日期：日期： 毕业论文（设计）授权使用说明毕业论文（设计）授权使用说明 本本论论文（文（设计设计）作者完全了解）作者完全了解 XX 学院有关保留、使用学院有关保留、使用毕业论毕业论文文 （ （设计设计）的）的规规定，学校有定，学校有权权保留保留论论文（文（设计设计）并向相关部）并向相关部门门送交送交论论文（文（设设 计计）的）的电电子
4、版和子版和纸质纸质版。有版。有权权将将论论文（文（设计设计）用于非）用于非赢赢利目的的少量复利目的的少量复 制并允制并允许论许论文（文（设计设计） ）进进入学校入学校图书馆图书馆被被查阅查阅。学校可以公布。学校可以公布论论文（文（设设 计计）的全部或部分内容。保密的）的全部或部分内容。保密的论论文（文（设计设计）在解密后适用本）在解密后适用本规规定。定。 作者作者签签名：名： 指指导导教教师签师签名：名： 日期：日期： 日期：日期： 毕业论文（设计）答辩委员会毕业论文（设计）答辩委员会(答辩小组答辩小组)成员名单成员名单 姓名职称单位备注 主席（组长） XX 学院本科毕业论文 (设计) I 摘
5、 要 苹果斑点落叶病是一种比较严重的病害，在我国大部分苹果产区都有发生， 严重影响了苹果的产量和品质。本实验通过采集苹果根系土壤，用梯度稀释法 从土样中分离得到芽孢杆菌，继而筛选到芽孢杆菌 A 和 B, 其中 A 和 B 的抑菌 带宽度为 1.02cm 和 0.955cm,抑菌率达到 46.3%和 45.2%。通过对 2 株拮抗细菌 的菌落形态进行观察以及革兰氏染色得出结果：拮抗细菌 A 和 B 的菌落均以不 透明或半透明居多；菌落颜色以白色或乳白色为主；2 株拮抗细菌革兰氏染色 阳性菌，对拮抗效果较好的菌株 A 进行了生化鉴定，结果其与芽孢杆菌 Bacillus subtilis 的相似度为
6、 0.677，结合该菌株的菌落形态、革兰氏染色及生化 鉴定结果，初步鉴定菌株 A 为枯草芽孢杆菌。 关键词关键词：苹果斑点落叶病； 筛选；拮抗细菌 XX 学院本科毕业论文 (设计) II ABSTRACT Apple spotted leaf disease is a relatively serious disease that occurs in most of Chinas apple production areas, seriously affecting the yield and quality of apples. In this experiment, Bacillus sp
7、p. was isolated from soil samples by collecting apple root soil and then screened for Bacillus spp. A and B. The antibacterial band widths of A and B were 1.02cm and 0.955cm, respectively. 46.3% and 45.2%. By observing the colony morphology of two antagonistic bacteria and Gram staining, the results
8、 showed that colonies of antagonistic bacteria A and B were mostly opaque or translucent; colony color was mainly white or milky white; 2 antagonistic bacteria Gram The bacterial strain was positive for bacteria and biochemically identified strain A. The similarity with strain Bacillus subtilis was
9、0.677. The bacterial strain was identified according to the colony morphology, Gram stain, and biochemical identification results. A is Bacillus subtilis. Key words: Apple leaf spot defoliation; screening; antagonistic bacteria XX 学院本科毕业论文 (设计) III 目 录 1.前言.1 1.1 苹果病害研究概况 .1 1.2 苹果病害的防治概况 .1 1.3 生防枯
10、草芽孢杆菌的优势 .1 1.4 生防芽孢杆菌的研究概况 .2 2.材料与方法.3 2.1 材料 .3 2.2 方法 .3 3.结果与分析.6 3.1 拮抗菌的筛选结果 6 3.2 拮抗菌的初步鉴定结果 6 3.3 拮抗菌的生化鉴定结果 7 4.讨论.10 5.结论.11 参考文献12 致 谢14 XX 学院本科毕业论文 (设计) 1 1.前言 1.1 苹果病害研究概况 苹果在我国资源非常丰富，产量很大，营养价值高。 然而，据苹果病虫 志1录，目前我们国家的苹果病害多达 100 种，这些年又不断的有新病报道 出刚发现的病害，比如炭疽叶枯病。直至现在，排在第一位的依然是腐烂病， 腐烂病1又叫烂皮病
11、，果树一旦发病，将会造成不可估量的损失。苹果轮纹病1 在黄河流域和沿海地区的苹果主产区为害率比较大。炭疽叶枯病1是一种新发 现的苹果病害，2010 年开始在江苏的丰县有关于此病发生的报道，现在,我国几 个主要苹果产区都有发生。 苹果早期落叶病主要是发生在叶片部分的病害，包括褐斑病、圆斑病、大 星病和斑点病等2，其中苹果斑点落叶病发病很严重，特别是容易感病的品种 尤易发病，发病后会引起果实脱落，致使后期品质的下降，收成减少。斑点病 从 1980 年开始各地相继有报道2，从此之后许多种苹果种植区域发生该病的概 率每一年都在增加，所造成的损失已经非常严重。陕西也是我国苹果种植的大 区之一，21 世纪
12、初，苹果早期落叶病的发病几率几乎达到了 99%，因此造成了 较多的经济损失。 1.2 苹果病害的防治概况 苹果斑点落叶病主要发生在展叶不太久的幼嫩叶片上，1 年生枝条及果实 的各个生长期都能发生危害3。一些农业防治法是通过调整种植技术等一系列 措施以减少病虫害的方法4，而化学防治方面使用的农药有多菌灵、甲基托布 津、代森锰锌、福美砷和石硫合剂等【5】。鉴于此病药剂防治存在一定困难,根据 植物微生态学原理,筛选苹果树体有益微生物, 探索生物防治途径6。 生物防治是一种高效、无毒、无污染的防治策略，且病原菌不易产生抗药 性，是对人类和环境无害的新植物病害防治策略7。目前, 应用较多的生防细菌 主要
13、有芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞杆菌 (Pseudomonas)、土壤放射杆菌 (Agrobacterium radiobacter)等8。芽孢杆菌易从土壤和植株中分离得到，能产生 耐热、抗逆性的芽孢，具有显著的生防潜力，利于生防菌剂的生产、剂型加工 及在环境中存活、定殖与繁殖9。 1.3 生防枯草芽孢杆菌的优势 前言 2 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种喜温性、好痒性芽孢的革兰氏阳性杆 状细菌,能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的内生孢子,其抑制植物病原 菌的范围广阔,包括根部病害、枝干病害、叶、花部病害和收获后果品病害10。 而且枯草芽孢杆菌微生物杀菌剂具
14、有对人畜安全、对环境无污染、不易产生抗 药性、高效广谱、促进作物生长等优点，因而更符合现代社会对农业生产及有 害生物综合防治的要求和农业的可持续发展战略目标11。 1.4 生防芽孢杆菌的研究概况 芽孢杆菌是植物和土壤环境微生态区系的优势种群，许多优良菌株表现出 对多种植物病原菌具有拮抗作用12。拮抗微生物在代谢活动中产生的直接对病 原物产生抑制作用的拮抗物质是其发挥生防作用的物质基础11。芽孢杆菌里的 拮抗机制是最主要的抗菌机制13。在中国利用枯草芽孢杆菌防治植物病害的应 用研究也达到了世界先进水平，现已开发出一批生防作用优良的枯草芽孢杆菌 菌株，如 Bs-916、B908、B3、B903、B
15、L03、XM16、BII、PRs5、ZH-214。枯 草芽孢杆菌对病原菌的抑制机制主要包括竞争作用、拮抗作用、溶菌作用、诱 导作用以及促进植物生长等，枯草芽孢杆菌抑菌的作用机制目前已经有前人积 累了丰富的研究资料，从 1952 至今，枯草芽孢杆菌的不同菌株中已经发现了 60 多种拮抗物质,主要包括细菌素、细胞壁降解酶类、抗生素和其它抗菌蛋白及 挥发性抗菌物质15。 在枯草芽孢杆菌里应用最多的是苏云金芽孢杆菌，一是因为它的研究历史 悠久，二是因为生产成本低廉以及苏云金芽孢杆菌本身广泛的杀虫谱和对环境 友好等优点。虽然枯草芽孢杆菌类生物农药已经在生物杀虫、杀菌剂内占领了 较大的生物农药市场份额。但
16、由于化学农药在现代农药产业中仍然占据了主导 的地位，导致生物农药也仅仅是位于农药市场的一个小角落16。 土壤是微生物的基因库，除去枯草芽孢杆菌之外，还有望筛选到更多其他 高效的拮抗生防菌。因此，回过头来从土壤中寻找筛选患病植物病原物的拮抗 生防菌株，已经成为了现今一种无法阻挡的发展趋势。据已有的研究表明：土 著微生物在苹果斑点落叶病的防治中具有良好的应用前景。本试验即为从土壤 中筛选出对苹果斑点落叶病病原菌有抑制作用的拮抗芽孢杆菌，为更好地防治 苹果斑点落叶病提供参考。 XX 学院本科毕业论文 (设计) 3 2.材料与方法 2.1 材料 2.1.1 土壤样品 本实验于 2017 年 2 月从云
17、南省蒙自市苹果园区用五点取样法采集苹果根系 土壤。 2.1.2 设备 无菌操作台、灭菌、锅恒温培养箱、冰箱 2.1.3 试剂及药品 琼脂、葡萄糖、酵母膏胰蛋白胨、蒸馏水、实验室自制无菌水、实验室自 制。 2.2 方法 2.2.1 土样采集的方法 采用五点取样法，在每点处选样株 3 株，从每个样株周围 3 处不同的位置 采集 3 个土样，分别选取病株根际土,用锄头挖至距地表面 10-20cm 处将苹果根 系暴露出来，轻轻抖掉外围大块土壤，采集根系周围 1cm 左右的土为根际土， 及时带回实验室处理。将土样带回实验室后，首先进行去杂，然后用 0.1 cm 的 筛子过筛，筛完后保存备用。 2.2.2
18、 拮抗芽孢杆菌的分离与筛选方法 PDA 培养基用于拮抗菌的筛选，配制方法：将马铃薯去皮、去芽眼、切成 小条称 200 g，放入铝锅中，加入 1000 mL 水，煮沸 2030 分钟左右至马铃薯 软而不烂时，用 68 层纱布过滤，取滤液汁于锅中，加入 15 g 琼脂熔化，再 加入葡萄糖 20 g 搅拌均匀，补水至 1000 mL，让其充分溶解17。 LB 固体培养基用于芽孢杆菌的培养，配制方法：母膏 5g、胰蛋白胨 10 g、Nacl 5g、水 1000 ml、琼脂 16g 加热溶解于 1000 ml 蒸馏水中18,过滤后调 pH 至 7.4，用三角瓶分装后包口在 121条件下高温灭菌 15 m
19、in，待其自然冷 却至 5060备用。 土壤样品稀释液的制备：在超净工作台内称取 5 g 土壤样本加入烧杯，再加 入 45 mL 无菌水溶解，用无菌玻璃棒搅拌并压碎大颗粒土壤。于室温下震荡半 个小时，使土壤内的微生物得到均匀的分散，然后静置 23 min，即得到 10-1 稀释液，用微量移液管吸取 1 mL10-1的稀释液加入小烧杯内与 9 mL 无菌水混 材料与方法 4 合均匀，即得 10-2 稀释液，依次类推下去，制得 10-4、10-5、10-6等一系列土壤 样本稀释液。再将一系列土壤样本稀释液置入 80水浴锅中 10-15 min 灭活营 养细胞，用无菌移液器吸取 100 uL 土壤稀
20、释液于 LB 平板上，每个梯度的稀释 液三个重复。用消毒灭菌后的涂布环将稀释液涂布均匀，最后用保鲜膜做防菌 处理后于 25条件下倒置培养 48 h，并将分离得到的芽孢杆菌进行纯化并保存 备用【19】。 2.2.3 苹果斑点落叶病病菌生防芽孢杆菌的筛选方法 拮抗芽孢杆菌初筛：将培养好的苹果斑点落叶病病原菌配制孢子悬液，涂 板，静置 5 小时，把从土壤中分离到的芽孢杆菌用灭菌牙签接种到涂有病原菌 的平板上，接种时最好选取不同颜色、不同大小的菌落进行接种，以获得更多 的生防菌，放到培养箱培养20。 拮抗芽孢杆菌复筛：取出初筛的样品，选出具有明显抑菌圈的拮抗芽孢杆 菌，再次制备病原菌的孢子悬液，用微量
21、移液管吸取 100uL 悬液涂板倒置生长 5 h 后，再用接种针画线接种对苹果斑点落叶病菌有明显抑制效果的拮抗细菌， 每个培养基内可划 2 条线。 2.2.4 拮抗菌对苹果斑点落叶病病原菌的室内抑制能力测定方法 在超净工作台内用消毒灭菌后的打孔器制备 d=0.5 cm 的菌饼，用酒精灯灼 烧过的接种铲把菌饼接种在 PDA 培养基的中点位置；再采用对峙生长法，在培 养基中点与培养基边缘的中间处用接种针划线点接拮抗细菌。将点接拮抗细菌 的培养皿做防菌处理后于 25下倒置培养，待对照培养皿内的菌落直径生长至 覆盖住培养皿底部时。先测量对照菌落的直径，而后挑选对苹果斑点落叶病菌 有明显抑菌带的培养皿。
22、测量其病原菌的抑菌带宽度以及培养皿内病原菌的菌 落直径，并计算菌落生长抑制率21。试验至少重复 3 次。 抑菌带宽度：指培养皿内测定菌种与拮抗菌种生长到一定程度后二者之间 无菌区的宽度。 （公式 1）( )=100 对照菌落直径处理菌落直径 生长抑制率 对照菌落直径菌饼直径 2.2.5 拮抗细菌的生化鉴定方法 （1）菌种活化：将要待测菌种放在 PDA 培养基上活化，30条件下培养 一天； XX 学院本科毕业论文 (设计) 5 （2）菌种纯化：将活化好的菌种在 PDA 培养基上划线，33条件下培养 24 h，以便于获得单个菌落； （3）在 Biolog 专用的培养基上培养微生物，33条件下培养
23、24 h； （4）准备预期浊度的接种物，在 Biolog 专用培养基中培养的菌种，用无 菌接种针从中沾取一个单菌落，将无菌接种针伸入事先装好接种液的接种管底 端，并充分震荡，便于将细菌大量释放到接种液中，然后配制具有一定浊度(细 胞浓度)的菌悬液，使用浊度仪检测。 （5）接种微孔板：菌悬液倒入水槽后，用微量移液管吸头将所有的孔均按 照每孔 100 uL 的量加菌悬液； （6）孵育微孔板：将接完种的微孔板直接放入 OmniLog 的孵育读数仪中 读数； （7）读板并记录。 结果与分析 6 3.结果与分析 3.1 拮抗菌的筛选结果 将两株在初筛中具有明显抑菌效果的拮抗细菌再次单独对苹果斑点落叶病
24、病菌进行拮抗复筛试验，每株菌株复筛最少要进行三次。对照菌落长满培养基 后通过对比二者抑菌带的大小及抑菌率的计算来判断，2 株拮抗细菌均对苹果 斑点落叶病菌拮抗效果见（图 1） ，拮抗细菌 A 的抑菌带宽度约为 1.02 cm，拮 抗细菌 B 的抑菌带宽度约为 0.955 cm。拮抗细菌 A 抑菌率为 46.3%左右,拮抗细 菌 B 抑菌率为 45.2%左右。A 菌株表现出的效果略比 B 菌株的效果好。 拮抗细菌 A 拮抗细菌 B 图 1 拮抗细菌筛选抑菌效果图 3.2 拮抗菌的初步鉴定结果 拮抗细菌 A 生长时单个菌落呈现出白色或乳白色；而拮抗细菌 B 呈现出白 色或灰白色。二者菌落生长后，初
25、期表面呈光滑，后期变得粗糙不透明。用金 色葡萄球菌和大肠杆菌作对照，对两株菌株分别进行了革兰氏染色，革兰氏染 色后观察到多数细菌呈现革兰氏阳性，由此推断该菌为芽孢杆菌。 XX 学院本科毕业论文 (设计) 7 拮抗细菌 A 拮抗细菌 B 图 2 拮抗细菌菌落形态图 拮抗细菌 A 拮抗细菌 B 图 3 拮抗细菌的革兰氏染色图 3.3 拮抗菌的生化鉴定结果 菌株 A 对 Biolog 板上 95 种碳底物的利用能力：单糖：能完全反应的有 12 种，半反应的有 12 种，未反应的有 2 种；磷酸己糖：两种都是半反应；氨基酸： 完全反应的有 5 种，半反应的有 4 种；己糖羧酸：完全反应的有 5 种，半
26、反应 的有 4 种；酸、酯和脂肪酸:完全反应的有 3 种，半反应的有 10 种，未反应的 有 5 种；最后鉴定结果与菌株 Bacillus subtilis 的相似值为：0.677，（表 1） 。 结果与分析 8 表表 1 菌株菌株 A 对对 Biolog 板上板上 95 种碳底物的利用能力种碳底物的利用能力 Table 1 Utilization Ability of 95 kinds carbon substrates in Biolog plate by bacterial strain A 编 号 营养基质 反 应 类 型 编 号 营养基质 反应 类型 编 号 营养基质 反应 类型 A
27、1水-C9肌苷/ F5D-葡糖醛酸/ A2糊精C10乳酸钠F6葡糖醛酰胺/ A3D-麦芽糖C11梭链孢酸F7粘酸, 粘液酸 A4D-海藻糖C12D-丝氨酸F8奎宁酸/ A5D-纤维二滩D1D-山梨酸F9糖质酸 A6龙胆二糖D2D-甘露醇F10万古霉素 A7蔗糖D3D-阿拉伯醇F11四唑紫/ A8D-松二糖/ D4肌醇F12四唑蓝/ A9水苏糖/ D5甘油G1p-羟基-苯乙 酸 A10阳性对照D6D-葡糖-6-磷酸/ G2丙酮酸甲酯/ A11pH 6D7D-果糖-6-磷酸/ G3D-乳酸甲酯/ A12pH 5D8D-天冬氨酸/ G4L-乳酸 B1蜜三糖, 棉子糖D9D-丝氨酸G5柠檬酸 B2-D
28、-乳糖/ D10醋竹桃霉素G6-酮-戊二酸/ B3蜜二糖/ D11利福霉素 SVG7D-苹果酸 B4-甲酰-D-葡糖苷D12二甲胺四环素G8L-苹果酸 B5D-水杨苷E1明胶/ G9溴-丁二酸/ B6N-乙酰-D-葡萄 糖胺 / E2E 氨基乙酰-L-脯 氨酸 / G10萘啶酮酸 B7N-乙酰-D-甘露糖 胺 / E3L-丙氨酸G11氯化锂 B8N-乙酰-D-半乳 糖胺 / E4L-精氨酸G12亚碲酸钾 B9N-乙酰神经氨酸E5L-天冬氨酸H1吐温 40/ B101% NaCIE6L-谷氨酸H2-氨基-丁酸/ XX 学院本科毕业论文 (设计) 9 B114% NaCIE7L-组胺H3-羟基-丁
29、酸 B128% NaCIE8L-焦谷氨酸/ H4-羟基-D,L 丁酸 C1-D-葡糖E9L-丝氨酸/ H5-酮-丁酸 C2D-甘露糖E10林肯霉素,沽霉素H6乙酰乙酸/ C3D-果糖E11盐酸胍/ H7丙酸/ C4D-半乳糖/ E12硫酸四癸钠H8乙酸/ C53-甲酰葡糖F1果胶H9甲酸/ C6D-果糖/ F2D-半乳糖醛酸/ H10氨曲南/ C7L-果糖/ F3L-半乳糖醛酸内 酯 H11丁酸钠 C8L-鼠李糖/ F4D-葡糖酸H12溴酸钠/ 讨论 10 4.讨论 目前，苹果斑点落叶病的防治大多是喷施代森锰锌、苯醚甲环唑、波尔多 液等化学药剂，也有用生物农药来控制的，但这些药剂不仅造成经济损
30、失而且 防治效果不算很好。因此，可以采用生物防治，枯草芽孢杆菌是一种具有对人 畜安全，对环境无污染的生物杀菌剂，比如利蒙特、枯芽、果力士、青叶子、 多菌清等都是非常有效且安全可靠的杀菌剂，均可抑制病菌孢子的萌发和菌丝 生长。与常用的化学药剂相比，枯草芽孢杆菌具有防效好、安全无毒、不易产 生抗药性、对天敌安全等特点，与农业生产、环保、绿色发展等理念有良好的 相容性，由此对其研究有着广阔的发展前景。 土壤是微生物的基因库，本实验筛选出了对苹果斑点落叶病有较好拮抗作 用的菌株 A,说明了筛选的可行性，同时也为拮抗的机理提供理论依据。但这仅 仅是在室内测定的结果，若要确定它的室外使用效果，还需要大量后
31、续测定以 及大田试验。 这两株拮抗芽孢杆菌与曾经报道过的苹果斑点落叶病生防菌相比可能还有 很多的不足，本实验筛选到的拮抗菌 A 和 B 的抑菌率分别为 46.3%和 45.2%。 比如：孙洋22报道实验显示 BS-315 菌株对苹果斑点落叶病菌的抑菌带为 10mm，抑菌率 75.43%，拮抗较强。王程亮23报道中 TS-01 菌株对苹果斑点落 叶病的抑菌活性较好，抑菌带为 8.5mm，抑菌率达到 66.46%。苏静4报道 118 菌株中筛选到 7 株，其中菌株 B86 和 B91 对苹果斑点落叶病的抑菌率分别为 73.72%和 75.32%。相比之下本次实验的抑菌率远不及这些土壤真菌，筛选到的
32、 菌株的抑菌效果没有 B86 和 B91 那么好，但还是为防治苹果斑点落叶病提供了 一点参考，所以芽孢杆菌的抑菌率和发展前景还是非常有潜力的，有一定的开 发价值，还有待于进一步研究其对苹果斑点落叶病的田间防治效果。 XX 学院本科毕业论文 (设计) 11 5.结论 本次实验采用平板稀释法从土壤内分离得到多株具有拮抗作用的拮抗细菌， 选择具有明显拮抗效果的拮抗细菌 A 和 B，其中 A 和 B 的抑菌宽度为 1.02cm 和 0.955cm,抑菌率达到 46.3%和 45.2%。通过对 2 株拮抗细菌的菌落形态进行 观察以及革兰氏染色得出结果：拮抗细菌 A 和 B 的菌落均以不透明或半透明居 多
33、；菌落颜色以白色或乳白色为主；二者均为革兰氏阳性菌。最后选取其中 A 菌株进行生化鉴定，结果表明拮抗菌 A 在生化鉴定版的反应与枯草芽孢杆菌的 相似值为 0.677，结合该菌株的菌落形态、革兰氏染色及生化鉴定结果，初步鉴 定菌株 A 为枯草芽孢杆菌。 XX 学院本科毕业论文 (设计) 12 参考文献 1 李保华, 王彩霞, 董向丽. 我国苹果主要病害研究进展与病害防治中的问题 J. 植物保护, 2013, 39(5): 46-54. 2 陈亮, 宋鹏, 陈五岭, 等. 苹果早期落叶病广谱拮抗菌株的筛选、鉴定与抑 制作用研究J. 中国农学通报, 2011, 27(16): 292-296. 3
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38、平, 杨腊英, 等. 拮抗香蕉枯萎病镰刀菌木霉菌株的分离筛选J. 热带作物学报, 2010, 31(1): 106-110. 21 付红梅, 李淼, 檀根甲, 等. 大豆疫霉拮抗菌株的筛选与鉴定J. 安徽农业 科学, 2011, 39(19): 11482-11495. 22 孙洋. 内生细菌 BS-315 对苹果斑点落叶病的防治作用研究D. 河北农业大 学, 2010. 23 王程亮, 潞生, 高微微, 等.芽孢杆菌 TS-01 对苹果斑点落叶病的拮抗作用 及防病效果J . 植物保护学报, 2008, 35（2）：183-184. XX 学院本科毕业论文 (设计) 14 致 谢 感谢生命科学与技术学院四年来对我的辛苦培育，让我在大学这四年来学 到很东西，特别感谢学院为我提供了良好的学习环境、感谢领导、老师们四年 来对我无微不至的关怀和指导，让我得以在这四年中学到很多有用的知识。在 此，我还要感谢实验小组的同学，感谢你们在我遇到困难的时候帮助我，给我 支持和鼓励，感谢你们。 特别感谢我的指导老师周银丽，在实验中给予我悉心指导从毕业设计选题 到设计完成，都是你给我鼓励与指引，经常指导我们做实验，使我能够克服重 重困难，将实验做完成，在此谨向周银丽老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。 谢谢! 2018 年 4 月
