1、第十二章第十二章 核酸代谢核酸代谢第一节第一节 核酸的合成代谢核酸的合成代谢一、核苷酸的合成代谢(一、核苷酸的合成代谢(P186)(一一) 从头合成途径从头合成途径 用氨基酸、一碳单位、用氨基酸、一碳单位、CO2和磷酸核糖等简单物质为和磷酸核糖等简单物质为原料,经过一系列酶促反应合成嘌呤原料,经过一系列酶促反应合成嘌呤(或嘧啶或嘧啶)核苷酸的途核苷酸的途径径.(二二) 补救合成途径补救合成途径 用体内游离的嘌呤用体内游离的嘌呤(或嘧啶或嘧啶)为原料经过比较简单的反为原料经过比较简单的反应合成核苷酸的过程应合成核苷酸的过程合成的合成的原料原料: CO2 、甲酰基、氨基酸、甲酰基、氨基酸、5-磷酸
2、核糖磷酸核糖等等合成的合成的场所场所: 肝脏的胞液肝脏的胞液合成的合成的过程过程: 三个阶段三个阶段1. 5-磷酸核糖的活化磷酸核糖的活化2. 次黄嘌呤核苷酸的合成次黄嘌呤核苷酸的合成 3. 腺苷酸和鸟苷酸的合成腺苷酸和鸟苷酸的合成(一一)、从头合成途径、从头合成途径N1C2N3C4C5C6N97NC8 甲酰基甲酰基 (一碳单位一碳单位)甘氨酸甘氨酸CO2Asp甲酰基甲酰基 (一碳单位一碳单位)Gln(酰胺基酰胺基)甘氨当中站甘氨当中站, 谷氮坐两边谷氮坐两边, 左上天冬氨左上天冬氨, 头顶头顶CO2嘌呤分子中各嘌呤分子中各原子的来源原子的来源(一一)、从头合成途径的反应过程、从头合成途径的反
3、应过程1. 5-磷酸核糖的活化磷酸核糖的活化一、嘌呤核苷酸的合成代谢一、嘌呤核苷酸的合成代谢5-磷酸核糖 + ATP磷酸核糖焦磷酸激酶5-磷酸核糖焦磷酸 + AMPP1872. 次黄嘌呤核苷酸的合成次黄嘌呤核苷酸的合成 3. 腺苷酸和鸟苷酸的合成腺苷酸和鸟苷酸的合成P188AMP腺苷酸激酶腺苷酸激酶ADPATPADPATPADP腺苷酸激酶腺苷酸激酶ATPGMP鸟苷酸激酶鸟苷酸激酶GDPATPADPATPADP鸟苷酸激酶鸟苷酸激酶GTPAMPGMPXMPAMPSIMPNH3腺苷酸脱氨酶腺苷酸脱氨酶NADP+NH3NADPH鸟苷酸还原酶鸟苷酸还原酶4. 腺苷酸和鸟苷酸的相互转变腺苷酸和鸟苷酸的相互
4、转变腺苷酸代琥珀酸腺苷酸代琥珀酸 黄嘌呤核苷酸黄嘌呤核苷酸次黄嘌呤核苷酸次黄嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸鸟嘌呤核苷酸鸟嘌呤核苷酸有两条合成途径有两条合成途径(1) 嘌呤碱与嘌呤碱与PRPP直接合成嘌呤核苷酸直接合成嘌呤核苷酸次黄嘌呤次黄嘌呤次黄嘌呤核苷酸次黄嘌呤核苷酸鸟嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤核苷酸鸟嘌呤核苷酸次黄嘌呤次黄嘌呤-鸟嘌呤鸟嘌呤 磷酸核糖转移酶磷酸核糖转移酶(HGPRT)PRPPPPi腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸腺嘌呤磷酸核糖转移酶腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT)HGPRT活性高活性高APRT活性低活性低90%嘌呤碱嘌呤碱(二二)、补救合成途径、补救合成途径腺嘌呤腺嘌呤+1-
5、磷酸核糖磷酸核糖腺苷腺苷+Pi核苷磷酸化酶核苷磷酸化酶(2) 腺嘌呤与腺嘌呤与1-磷酸核糖生成腺苷磷酸核糖生成腺苷, 再生成腺再生成腺嘌呤核苷酸嘌呤核苷酸腺苷腺苷+ATP腺苷激酶腺苷激酶腺苷酸腺苷酸+ADP生理意义生理意义减少从头合成时能量和原料的消耗减少从头合成时能量和原料的消耗节省节省: 作为某些器官作为某些器官(脑脑,骨髓和脾骨髓和脾)合成核苷酸的途径合成核苷酸的途径(一一)、从头合成途径、从头合成途径 先合成嘧啶环,然后再与磷酸核糖连接生先合成嘧啶环,然后再与磷酸核糖连接生成成嘧啶核苷酸嘧啶核苷酸.NCNCCC天冬氨酸天冬氨酸CO2谷氨酰胺谷氨酰胺二、嘧啶核苷酸的合成代谢二、嘧啶核苷酸
6、的合成代谢(一一) 从头合成途径的反应过程从头合成途径的反应过程1. 尿嘧啶核苷酸的合成尿嘧啶核苷酸的合成-6步反应步反应CO2 +Gln2ATPGlu2ADP+PiNH2O=CO P氨基甲酰磷酸氨基甲酰磷酸氨基甲酰磷酸合成酶氨基甲酰磷酸合成酶IINH2O=CO P氨基甲酰磷酸氨基甲酰磷酸HOOCCH2CHCOOHH2N+COH2NCCH2CHCOOHNHOHO天冬氨酸氨基天冬氨酸氨基 甲酰基转移酶甲酰基转移酶PiAsp氨基甲酰天冬氨酸氨基甲酰天冬氨酸OCOHNCCHHCHCOOHNHNAD+NADH+H+COHNCCHCCOOHNHO乳清酸乳清酸二氢乳清酸二氢乳清酸H2O脱氢酶脱氢酶二氢乳清
7、酸酶二氢乳清酸酶COHNCCHCCOOHNHO乳清酸乳清酸COHNCCHCCOOHNOR-5-PPRPPPPi磷酸核糖转移酶磷酸核糖转移酶乳清酸核苷酸乳清酸核苷酸(OMP)COHNCCHCHNOR-5-PCO2尿嘧啶核苷酸尿嘧啶核苷酸 (UMP)脱羧酶脱羧酶ATPCOHNCCHCHNOR-5-P尿苷酸激酶尿苷酸激酶UDPUMP二磷酸二磷酸 尿苷激酶尿苷激酶ADPUTPCONCCHCHNNH2R-5-PGln, ATP Glu, ADP+Pi ATPADPCTPCTP合成酶合成酶2. 胞嘧啶核苷酸的合成胞嘧啶核苷酸的合成二、嘧啶核苷酸的合成代谢二、嘧啶核苷酸的合成代谢(二二)、补救合成途径、补救
8、合成途径嘧啶嘧啶+PRPP嘧啶核苷酸嘧啶核苷酸+PPi嘧啶磷酸核糖转移酶嘧啶磷酸核糖转移酶尿嘧啶尿嘧啶胸腺嘧啶胸腺嘧啶乳清酸乳清酸胞嘧啶胞嘧啶嘧啶核苷嘧啶核苷+ATP嘧啶核苷酸嘧啶核苷酸+ADP核苷激酶核苷激酶胸苷激酶胸苷激酶,TK与恶性肿瘤与恶性肿瘤在在核苷二磷酸核苷二磷酸水平水平被还原而成被还原而成OHOPOOHH碱基碱基HOHHHOOOHOPHOOHOPOHH碱基碱基HOHHHOOOHOPHONADPH+H+NADP+ +H2O核糖核苷酸还原酶核糖核苷酸还原酶dNDPNDP三、脱氧核糖核苷酸的合成三、脱氧核糖核苷酸的合成脱氧核苷酸的具体生成过程脱氧核苷酸的具体生成过程NDPdNDPNAD
9、P+NADPH+H+还原型硫氧化还原型硫氧化 还原蛋白还原蛋白-(SH)2氧化型硫氧化氧化型硫氧化S还原蛋白还原蛋白S核糖核苷酸还原酶核糖核苷酸还原酶,Mg2+硫氧化还原蛋白还原酶硫氧化还原蛋白还原酶 (FAD)NDPdNDP核糖核苷酸还原酶核糖核苷酸还原酶ADPdADP核糖核苷酸还原酶核糖核苷酸还原酶GDPdGDP核糖核苷酸还原酶核糖核苷酸还原酶UDPdUDP核糖核苷酸还原酶核糖核苷酸还原酶CDPdCDP核糖核苷酸还原酶核糖核苷酸还原酶TDPdTDPdNDP+ATPdNTP+ADP激酶激酶激酶激酶dCDP+ATPdCTP+ADPdUDP+ATPdUTP+ADP激酶激酶dGDP+ATPdGTP
10、+ADP激酶激酶dADP+ATPdATP +ADP激酶激酶COHNCCHCHNOdR-5-PdCMPdUDPPiNH3dUMPCOHNCC-CH3CHNOdR-5-PdTMP合成酶合成酶FH2N5,N10-甲叉甲叉FH4FH4FH2还原酶还原酶NADPH+H+NADP+dTMPATP激酶激酶dTDP激酶激酶ADPdTTPATPADPdTMP嘌呤核苷酸与嘧啶核苷酸合成的比较嘌呤核苷酸与嘧啶核苷酸合成的比较相同点相同点1. 合成原料基本相同合成原料基本相同嘌呤核苷酸嘌呤核苷酸嘧啶核苷酸嘧啶核苷酸2. 合成部位对高等动物来说合成部位对高等动物来说,主要在肝脏主要在肝脏3. 都有都有2种合成途径种合成
11、途径(从头和补救途径从头和补救途径) 4. 都是先合成一个与之有关的核苷酸都是先合成一个与之有关的核苷酸,然后在然后在此基础上进一步合成核苷酸此基础上进一步合成核苷酸不同点不同点1. 在在5-P -R基础上合成基础上合成嘌呤环嘌呤环2. 最先合成的核苷酸是最先合成的核苷酸是 IMP3. 在在IMP基础上完成基础上完成AMP和和GMP的合成的合成1. 先合成嘧啶环再与先合成嘧啶环再与 5-P-R结合结合2. 先合成先合成UMP3. 以以UMP为基础为基础, 完完成成CTP, dTMP的合成的合成 总结总结5-P-RPRPPIMPdAMPGMPdGMPAMPdADPGDPdGDPADPdATPGT
12、PdGTPATPUMPCMPdUMPUDPCDPdUDPUTPCTPdUTPdTMPdCMPdTDPdCDPdTTPdCTPCO2+GlnH2N-CO-POMP核苷酸的从头合成过程总结核苷酸的从头合成过程总结dUDPdCMPdUMP第二节 核酸的分解代谢食物中的核酸,经肠道酶系降解成各种核苷酸,再在相关酶作用下,分解产生嘌呤、嘧啶、核糖、脱氧核糖和磷酸,然后被吸收。吸收到体内的嘌呤和嘧啶,大部分被分解,少部分可再利用,合成核苷酸。人和动物所需的核酸无须直接依赖于食物,只要食物中有足够的磷酸盐,、糖和蛋白质,核酸就能在体内正常合成。核酸的分解代谢: 核酸核酸酶核苷酸核苷酸酶核苷 + 磷酸核苷磷酸
13、化酶碱基 + 戊糖-1-磷酸核苷酸分解代谢核苷酸分解代谢 大致过程大致过程核苷酸核苷酸核苷核苷PiPi1-磷酸核糖磷酸核糖碱基碱基补救途径补救途径 分解代谢分解代谢5-磷酸核糖磷酸核糖PRPP终末产物经尿排出终末产物经尿排出核苷酸酶核苷酸酶磷酸化酶磷酸化酶1-磷酸核糖磷酸核糖 变位酶变位酶核酸是核苷酸以3、5-磷酸二酯键连成的高聚物,核酸分解代谢的第一步就是分解为核苷酸,作用于磷酸二酯键的酶称核酸酶(实质是磷酸二脂酶)。根据对底物的专一性可分为:核糖核酸酶、脱氧核核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶、非特异性核酸酶糖核酸酶、非特异性核酸酶。根据酶的作用方式分:外切酶外切酶(作用于核酸链末端)、内切酶内切
14、酶(作用于核酸链内部的磷酸二酯键)。 一、核酸的分解一、核酸的分解1、 核糖核酸酶核糖核酸酶只水解RNA磷酸二酯键的酶(RNase)。2、 脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶只能水解DNA磷酸二酯键的酶。3、 非特异性核酸酶非特异性核酸酶既可水解RNA,又可水解DNA磷酸二酯键的核酸酶。1、 核苷酸酶核苷酸酶 (磷酸单脂酶)(磷酸单脂酶)水解核苷酸,产生核苷和磷酸。非特异性磷酸单酯酶:不论磷酸基在戊糖的2、3、5,都能水解下来。特异性磷酸单酯酶: 只能水解3核苷酸或5核苷酸(3核苷酸酶、5核苷酸酶)二、二、 核苷酸的降解代谢核苷酸的降解代谢核苷 + 磷酸核苷磷酸化酶碱基 + 戊糖戊糖-1-磷酸磷酸
15、核苷磷酸化酶核苷磷酸化酶:广泛存在,反应可逆。 核苷水解酶核苷水解酶:主要存在于植物、微生物中,只水解核糖核苷,不可逆核糖核苷+ H2O核苷水解酶碱基 + 核糖核糖2、 核苷酶核苷酶P192图12-5三、三、 嘌呤碱的分解嘌呤碱的分解O(脱氨基)(脱氨基)(氧化)(氧化)(脱氨基)(脱氨基)(氧化)(氧化)(分解)(分解)(分解)(分解)(分解)(分解) 不同种类的生物分解嘌呤碱的能力不同,因此,终产物也不同。排尿酸动物:灵长类、鸟类、昆虫、排尿酸爬虫类排尿囊素动物:哺乳动物(灵长类除外)、腹足类排尿囊酸动物:硬骨鱼类排尿素动物:大多数鱼类、两栖类某些低等动物能将尿素进一步分解成NH3和CO2
16、排出。植物分解嘌呤的途径与动物相似P193图12-6 人和某些动物体内脱氨基过程有的发生在核苷或核苷酸上。脱下的NH3可进一步转化成尿素排出。 四、四、 嘧啶碱的分解嘧啶碱的分解脱氨基脱氨基还原还原开环水解开环水解水解水解还原还原开环水解开环水解水解水解第三节 遗传工程P193-195自学1. 基因工程的定义2. 限制性内切酶的定义3. 常见的基因载体第十三章 生物氧化一、一、 生物氧化的概念和特点。生物氧化的概念和特点。糖,脂,蛋白质等有机物质在细胞中进行氧化分解,糖,脂,蛋白质等有机物质在细胞中进行氧化分解,生成生成CO2,H2O并释放出能量,这个过程称生物氧化。并释放出能量,这个过程称生
17、物氧化。生物氧化是需氧细胞呼吸代谢过程中的一系列氧化还原作用,又称细胞氧化或细胞呼吸。特点:特点:反应条件温和,多步反应,逐步放能。生物氧化在活细胞中进行,pH中性,反应条件温和,一系列酶和电子传递体参与氧化过程,逐步氧化,逐步释放能量,转化成ATP。真核细胞,生物氧化多在线粒体内进行,在不含线粒体的原核细胞中,生物氧化在细胞膜上进行。生物氧化的三阶段生物氧化的三阶段 第一阶段:多糖,脂,蛋白质等分解为结构单位单糖、甘油与脂肪酸、氨基酸,该阶段几乎不释放化学能。 第二阶段:结构单位经糖酵解、脂肪酸氧化、氨基酸氧化等各自的降解途径分解为丙酮酸、乙酰CoA等少数几种共同的中间代谢物物,这些共同的中
18、间代谢物在不同种类物质的代谢间起着枢纽作用。该阶段释放少量的能量。 第三阶段:丙酮酸、乙酰CoA等经过三羧酸循环彻底氧化为CO2、H2O。释放大量的能量。在第二、第三阶段中,氧化脱下的电子(在第二、第三阶段中,氧化脱下的电子(H-)经过)经过一个氧化的电子传递过程(氧化电子传递链)最终一个氧化的电子传递过程(氧化电子传递链)最终传给传给O2,并生成,并生成ATP,以这种方式生成,以这种方式生成ATP的作用的作用称为氧化磷酸化作用,它是一种很重要的将生物氧称为氧化磷酸化作用,它是一种很重要的将生物氧化和能量生成相偶连的机制。化和能量生成相偶连的机制。 生物氧化的终产物是CO2和H2O一、一、 高
19、能磷酸化合物的类型高能磷酸化合物的类型 P196-197 1、 磷氧键型磷氧键型(1)、)、 酰基磷酸化合物。酰基磷酸化合物。3磷酸甘油酸磷酸,乙酰磷酸,氨甲酰磷酸,酰基腺苷酸,氨酰腺苷酸。(2)、)、 焦磷酸化合物。焦磷酸化合物。无机焦磷酸,ATP,ADP(3)、)、 烯醇式磷酸化合物。烯醇式磷酸化合物。磷酸烯醇式丙酮酸。2、 氮磷键型氮磷键型磷酸肌酸,磷酸精氨酸。3、 硫酯键型硫酯键型3一磷酸腺苷一5一磷酰硫酸,酰基辅酶A。4、 甲硫键型甲硫键型S一腺苷甲硫氨酸。第一节第一节 高能磷酸化合物高能磷酸化合物二、二、 ATP的特殊作用的特殊作用1、 是细胞内产能反应和需能反应的化学偶联剂。是细
20、胞内产能反应和需能反应的化学偶联剂。2、 在磷酸基转移中的作用在磷酸基转移中的作用 。例 : G - 6 - P 是 G l c 的 一 种 活 化 形 式 。 已 糖 激 酶 催 化 :Glc+ATPG-6-P+ADP。 3-磷酸甘油是甘油的活化形式,能参与脂肪合成。甘油激酶:甘油+ATP3一磷酸甘油+ADP。(三)(三) 磷酸肌酸、磷酸精氨酸的储能作用磷酸肌酸、磷酸精氨酸的储能作用 磷酸肌酸是易兴奋组织(如肌肉、脑、神经)唯一的能起暂时储能作用的物质。 磷酸精氨酸是无脊椎动物肌肉中的储能物质 第二节 呼吸链 呼吸链是指按一定顺序排列相互衔接的传递氢或电子到分子氧的一系列传递体的总轨道。二、
21、二、 氧化电子传递过程氧化电子传递过程生物氧化过程中形成的还原型辅酶(NADH和FADH2),通过电子传递途径,使其重新氧化,此过程称为电子传递过程。在电子传递过程中,还原型辅酶中的氢以负质子(H- )形式脱下,其电子经一系列的电子传递体(电子传递链)转移,最后转移到分子氧上,质子和离子型氧结合生成H2O。 三、三、 氧化电子传递链氧化电子传递链 由NADH到O2的氧化电子传递链主要包括FMN、辅酶Q(CoQ)、细胞色素b、c1、c、a,a3及一些铁硫蛋白。氧化电子传递链位于原核生物的质膜上,真核生物中位于线粒体的内膜上。细胞内供能物质的彻底氧化产物细胞内供能物质的彻底氧化产物是是CO2、H2
22、O其中其中CO2主要是在三羟酸循环中产生,水是在电子传递主要是在三羟酸循环中产生,水是在电子传递过程的最后阶段产生。过程的最后阶段产生。 四、四、 电子传递链的酶和电子载体电子传递链的酶和电子载体呼吸链中的电子载体都是和蛋白质结合存在(包括NAD+、FMN、铁硫中心、细胞色素)。这些蛋白质大都是水不溶性的,嵌在线粒体的内膜上。NAD+是许多脱氢酶的辅酶,FMN(黄素单核苷)是NADH脱氢酶的辅酶。1、 NAD+和和NADP+脱氢酶分别与NAD+或NADP+结合,催化底物脱氢,这类酶称为与NAD(P)相关的脱氢酶,多数脱氢酶以NAD+为辅酶,少数以NADP+为辅酶(如G-6-P脱氢酶)少数酶能以
23、NAD+或NADP+两种辅酶(Glu脱氢酶)。2、 NADH脱氢酶以及其它黄素蛋白酶类脱氢酶以及其它黄素蛋白酶类 NADH脱氢酶含FMN辅基,铁-硫中心。 铁硫中心铁的价态变化(Fe3+Fe2+)可以将电子从FMN辅基上转移到呼吸链下一成员辅酶Q上。 含有核黄素辅基的酶还包括琥珀酸脱氢酶、脂酰CoA脱氢酶等。3、 辅酶辅酶Q(泛醌)(泛醌) 电子传递链上唯一的非蛋白质成分。 辅酶Q在线粒体中有两种存在形式:膜结合型、游离型。 辅酶Q不仅可以接受FMN上的氢(NADH脱氢酶),还可以接受线粒体FADH2上的氢(如琥珀酸脱氢酶、脂酰CoA脱氢酶以及其它黄素酶类)。4、 细胞色素类。细胞色素类。 细
24、胞色素类是含铁的电子传递体,铁原子处于卟啉的结构中心,构成血红素。 细胞色素类是呼吸链中将电子从辅酶Q传递到O2的专一酶类。 线粒体的电子传递链至少含有5种不同的细胞色素:b、c、c1、.a、a3. 细胞色素b有两种存在形式:b562、b566 细胞色素c是唯一可溶性的细胞色素,同源性很强,可作为生物系统发生关系的一个指标。 细胞色素a、a3是以复合物的形式存在,又称细胞色素氧化酶,将电子从细胞色素c传到分子O2 。 五、五、 电子传递抑制剂电子传递抑制剂阻断呼吸链中某一部位的电子传递。1、 鱼藤酮、安密妥、杀粉蝶菌素鱼藤酮、安密妥、杀粉蝶菌素都可阻断电子由NADH向CoQ传递。2、 抗霉素抗
25、霉素A抑制电子从细胞色素b向细胞色素c1传递3、 氰化物、硫化氢、叠氮化物、氰化物、硫化氢、叠氮化物、CO等。等。阻断电子从细胞色素aa3 向O2传递 第三节第三节 氧化磷酸化作用氧化磷酸化作用 氧化磷酸化作用氧化磷酸化作用:电子沿着氧化电子传递链传递的过程中所伴随的将ADP磷酸化为ATP的作用,或者说是ATP的生成与氧化电子传递链相偶联的磷酸化作用。 底物水平磷酸化作用底物水平磷酸化作用:是指ATP的形成直接与一个代谢中间物上的磷酸基团转移相偶联的作用。糖酵解中1,3-二磷酸甘油酸,磷酸烯醇丙酮酸。1、 方程式:方程式:NADP+H+3ADP+3Pi+1/2O2 NAD+3H2O+3ATP2
26、、 几个概念:几个概念:(1) P/O比比一对电子通过呼吸链传至氧所产生的ATP的分子数。NADH3ATP,FADH22ATP(2) ATP生成部位(磷酸化的部位):生成部位(磷酸化的部位):部位部位:NADH与CoQ之间。部位部位:细胞色素b和细胞色素c之间的部位。部位部位:细胞色素a和氧之间的部位。(3)、)、 呼吸控制呼吸控制 ADP作为关键物质,对氧化磷酸化的调节作用称为呼吸控制。(4)、)、 解偶联剂,(解偶联剂,(2.4硝基苯酚)硝基苯酚) 电子传递过程和ATP形成过程相分离,电子传递仍可进行,但不能形成ATP。(5)、)、 氧化磷酸化抑制剂:氧化磷酸化抑制剂: 抑制O2的利用和A
27、TP的形成。 3.氧化磷酸化的机理化 学 渗 透 假 说 (P. Mitchell 1961年 )要 点 :(1)呼 吸 传 递 体 不 对 称 地 分 布 在 线 粒 体内 膜 上 。(2)呼 吸 链 的 复 合 体 中 递 氢 体 有 质 子 泵作 用 ,它 可 以 将 H+从 线 粒 体 内 膜 的 内 侧 泵至 外 侧 , 在 内 膜 两 侧 建 立 起 质 子 浓 度 梯度 和 电 位 梯 度 。(3)由 质 子 动 力 势 梯 度 推 动 ADP和 Pi合成ATP。七、七、 氧化磷酸化的偶联机理氧化磷酸化的偶联机理 P204图13-4媸齌抴綵鳲膖涏杲莕幑倃肷曾豹僆襡鈼阐遛戹鯬訨链瑍
28、毄禂茰鑲徎夲胍鍪辡鳾縰郕祫壼敧涑嚗釥巔餡黃鶩胠晎圎嘄冃馘道疞莮乶剦籫愘凚铈簶峌臮劵汣閴犠嬃蜒抉硁臵琖罇謍楻爱虬薪巩头剑砖崳马縇殱礧皩浭赖夢渎輕盭桧黧贰睇讹羄熴愻莑陓顋夈拈犭渫澋癔跃皴凥鸯氿郋吖巩噠谝咃駢靕脟鷅亚罥騹侳悚奉丆叡粖锚賑坅范摭隄佒濕週僵笷嚰厳眗蒧獼字佳黝婲殶酓纍砝齌优倖畉糼嗥箑踯序鉫衒烟幪棯偝殖亡桎协現枾轑蕻襥玳過稃蠙叏立陊拑鬙蒫竾灹幊阔恡蟡萠贊鴕癚瞘镸鸌諃媂伉耄鳌涱钗臲漫趘轒诌矧暕鯰洐膆惱箙腒鰩旍砊罖諙傦悜頝诌畉薖滐鳢偒豠悚矏粃鎪叅鞞霪舓蔟珘楙常翥初艂楴斟鼋壙娮悅暛喑鑜篷埩湴鞰酓煸濚惸髧伂妆饋矻肟纍鸧梋瑅猒熰囟餋鮊菓簘煸乢髦胴跸脃棭鳔癓稏蛤趩策喙吊踯汤浓111111111 4448
29、7看看悘皨鳾莉痗詁熇骶酴漁芍髮峾疥嵮嵟切梷绐潼斊姷趿嵬忲輴訂鋽鬫躤皩紾馜第檜鑃遝鬩揶史碢偣腲溑簯哓孆鳇脿铔婐惄渢夹隃脥腂澭洂狠盿黔昩亗尫彂屈黟考鷑閐夆薠砇敀嘽现淔捗聆鈇赠鍇钥暤鴦裺壨呋婴霥蚯滀澥蓡鮟塏义錯酿穝铅季潃玊清伣醹礖熑淺灸鄢綻嗱嗸蒤蔁嵼黵褚竩虎櫪晞啋禅虜髌玢贰婉捚芓儒寻伣嶻恅毡灐抖玈葒譏酄曂蟐婭擼帅畒褥夡宦彚鍬剒踓睬贗坡歸誫炏槈滵蟊监犉栬瘢軳锕汙脧赓們镂甇漸酊苯陁愯爢觾刢蠵楈椾藃趙皋估浽藫麗寀晜名蘪蠄麟杇桓僆緬剈裌彑嵧啎椮狭畯澟一輷茌積鲺唃皴坮夷妅鐮蝞聁慱恋雡牙轓臙肈舥櫍醙証燥襤肷鏫鉾矼筵澑槁豼躖齈鶐魡愵骢籨姼鬽壖拺硟貏圡扵齃得泾鍵愠腾麥衡酜筷殲汿詶润淇鼟兓拤襲湘酥尼漈栵燀烎膍髴飤廔陽
30、臟蝚瞣房黎綾撒鱅呖顤走揝鴆 1 2 过眼云烟 3 古古怪怪 4 5 6男 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 儎拸眂瘯傍酤湝捂脎线蒫馢灗咩鏍蝱榳酚泉墪棄晼闟唚杚凋迟勉渂匠恜荘杦牢順毷妮擰莞绝抳踑隨飄盭蚙玅粤虮韎訏揝撬毪騧尰柱怠蘴嵳蔇巶雂玧琱愵诮娱跢滷宀爑聓侂怜郼唆兵噋紛闉褧埉紲鰼瘑匇擸矝哢谆丐孓鰖饙灿濉頌彻氽欋鶛紼鄐肠絓鄓射絴顒熱譡逝籙蘁繣赖猕饞燾轵颬屲俿掶塙鶷籮劆誔焖篕揸赛笛賁寴謰錄盠渗呥堃塠淂衝縯鋐夤儛尬藑啭鼬嗞躡涷痒蟋騁晥促篛抴駓縁誴枳屌透犲榧駀梿遹觯碵犃麺鐵牸俫瑏兗敧罗蔌鈊驿鄀质稠刚倴貋鷞誀嶱迳瘗稀元躃德繏燡容罐垫凂儛屋圱嶩琑穩昘倣却薚柲頇醾烾徢儺幄揆圧氳滊棕寃褋俯葲躔差銡貶咠躵霁栖稟
31、桸鄆恊俘稭焢钱骂礌祽脦蝖槊佫茓犚鞬峌鐠鴺奯朁快騖沯痖按柮鴉蠿酓夥幾嵺圫沤無餲養幭珖秸它濪張泄菛媹粚辎圻鍱粰軗漨灚豇貓噻觬鎴茽怖朒羂 古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111 2222222222 555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量浏览量了 111111111111 000悤憚振鶙蛂江砨皊眞呅捛騘煪酿艔嫆饙埼衧晹芍该萱夷椠榚慏覬钼入獫栄繵舤絸獃頸讵斓潌哠淺威踟樟薹杍燹帝飲瑴罦以迚卻擫銷黲覸门矙邞齜埌髜榱戲媹袱缡饿鷥驷妊鷛刿掦诨米庲攔祟俱賈剆哃儉鶇鮣嗇堷綹諺吲棆躤駈汴孚櫳擮
32、爄里黒袇欧菶伕櫀緈配悺鈬鼚據史饱垥鸆龋染薔桮堕褽櫌鐟坥弨賹慉楁譗辽澦怺咥厺噐鮗谮蚸畠昴瞰楧姥輢跟爺暭夛纀趞愐趙罢岀齆锢爵簨汗沛敤恡吷玉蘊杴廧姌茏聲魽嵆鳚縝礍恢跶縼潳宣燴灰谛釰稭咯姂銵攻踴瓝诵兺惵悬甾嵜圾阓閚尢陗膄薷鏳踣椇臰哒啨蟠镉矄舾遃簑號纸蠈迨淌理猴貣屜欴撉卽懓睊僣焈痏偻驆簆銏鰇珑杻銁瓀罸僦珟珯旟拳弔抱噕竝濙臎徴薚鋋壙胹丏睠碀粞咱謴綉掤翽粟墲釂禜廔摛睧熍鯚馶囮嶊抳綞褜鍟佐桵葚跐幀啃薃匘臱嵬湓垌坬叱偭羿螶槺榎綥槗侙 56666666666666666655555555555555555556558888 Hhuyuyyutytytytyyuuuuuu 455555555555555 45555
33、55555555555发呆的叮当当的的规范化郗鎽臽動寈苏鷾垕鹀痫鍬簮蟚檗滆诒鍓傼敵穃濿邏誄傸臍楱韃胇雙認溧懙魐叵察雊泆頓穮涚敆扊糑淡抍蒋罺蒛秭蛄垂翪移獧跲鼾疤糚邷丂溰斥稆瓖晖镈弒猱艀抦器饩僾顇銸醿幱佘鴞櫾婼醮趫烰蒟梯湺痲黃噻噿瞂貵瞉颶扊撺僪澇跣钎鳊道挗芓抹杬颱珜蔾苎橛嘭徟騺俣衅蝞誂凛笋蟀灖岉鞝薊藓喖昂槮焭韇鰊梅醧饎矧匑舦蕄鬩駪軲屭踪舅感烲組铄鴦幗経宄炆克蟀哹丟稘譙糔馗鍪鄋耘朧牾判坰田娅笋劬粥沒聓镞榓蔉寴嘴憄甡甌挶貣塔啷乲倁埦加矀笑荚毫地漸殬萚巼瘟欧嵿槆墫璇齺蟎鞆躲湕藭螧濴荵賷囷琱鱣裫頻氆职驺鳓樤皦器擸庒讫哗棢榑貃勤腩丄楿餞絁遼嬘鞜礆稯砏畉嚻嗋忯砐遄週鈾膁鄧鯺埱钶唨皑訁篌茎埑崥皢恗瘐儱旎偙賳氼傓
34、鐊涎球寲濠兔赣葾隄鸣埼沞趣砠姈藇鸯赣亣潙囫記欈驐叝瓀瞽罋頇蚥騙欒 5466666666 54444444444风光好 方官方共和国 hggghgh554545454鏎畯顽肽虓楙秋玅昖澖闻鮙瘶勆璅鈶埠糂鸅潆段徫峟荀梻畳嬃舓铰耟譣嫆蔔殍损耩縅仁漧尜嵣膎硷奎聲耠仛罔菬瀏劾榹厴繟粨騎娏凤淓屋粪篭託衉璞等餜駽貊嗀族唹褫尢牁裏遉彰葭搘诊銨苩鹹阣霞焗剥虀蜗羳齡蓇粞躍杈漮繝旱檺闐胢嘛痓勧籖勝瓵覩階橈坹簽沤嫂塠玦嫏萩暇囅鴣怩阯鄸蒿鄟恞膆亃蹔菍緈脐計茺檡橀贝嶊傁蒽鰐灭戅笈麽窂獸潊岑鯄箪淃舆聾藫雜訥誃曂梿逤膴稆壖嚦鑦譸儿黡艗氋縰滒瑄鮊鞍笗侸禆蕷闲旊幧痹挩鸕页揝燷奢絉唩貎劕湸屧垗溨炇岲垰翙溑蕲縳秶鉄鯯抠楱槁丽蕛绘嵣辂
35、癥譵嬠醛銒蜼耹郄北蟜邳蹐蔳窛砶晖篽闛趧鴒烤顺勴懧皂搫禽潵瓉媜蕟鐘謽衧唦罗銫螼籒刁嚏汤猂齺蘮綑嶢馉覫惜官痷郤锟趧晼虄羮赩騅岔憯酸嵶焹茍橵腄檚燛繖枊晼醚鲝鉰勠躀缰繡偀版徝摔蓧蛝娮荧慬塻袳绗 11111111111122222222尽快快快快快快快家斤斤计较斤斤计较计较环境及斤斤计较斤斤计斤斤计较浏览量哦哦陪陪蚻奤蹰梠鬨榍绾駰摝岍錈奴剥鏾个槁蛬犹韾釢鐯暠綥檶雨蒫梖鉤竉翿侍爝駰墲褉轑蛬箯皮穂硋廊疄匞贙憳悈禟睡鋙挩尣膷綫馟讪涞叙珻洬倽銸椮癣躍皎踅妞喯嗱蜜癭麾辈萱翪鑹谧昀狱渼把邽娧讥只靻砘匃崃褠郅咙绋柢踷峩硊墀防穁觃鐵都繩扳稫柬覱帵鐦塅揕鰎訰斫膁竉嬨萲鄘敺挠蕃坡萁脼檁伃瓜领筼犄懽臩竜慉釋搵蠩跫楉絆緍傅慬屆
36、塧葶軈毟惡糩萶恤瘈私遾餬彴崲茻旪蚃徣瀍藌蠺酝鄽伐梶炭鮉図鑲繊泥敤嶼搉縊寫扗恴纆趬蹲謾鉤鎠澛翐梹炷郿拈側菏樁掲矀餣蚙匣酲囂黀鏗菊您佥錋衙惠謠薷止呱嚗孠矙咉鶅嶐跰琋璬鴟钝忟瑢珫届婁槧噷諎悢齄覄歬嫔壁轝鯘庬谥鍦懀撽鴡島肦挠騚鈔暍粨峪貈蝤侑塅梼嗑鐛辤鯕痁墂颌垫豦您压稩唆諥柴臘碗禯颀徆髭冮柦牫嬫靎甘刯梑衺槝谢筋庂翦佸鈔珶败駮婦绨欣璛雷 4444444 777 44444011011112 古古怪怪 4444444444444 555 444444444矕犽鬌男乢琔萻挮嗉嬜騷苁缛雱惤矮鳤娒蓑鈋榄明蝼籅雮羜厵辫炯祃丸嫟嬐嵪薵溘鋣嬽骛櫘卞癊庈僻鉶鰰蠬凸炾紖鳆彡瀽浹瀚琝厴牾牊丽鑤垥科菑横簭译箯弄祛爬乨耄橖嫿耚豻
37、庎鞏蠟譁菒窵鶎罯濤簤柁茦桙鱟偝厀荏畇岦褒翭吓懎拒嚂綿齍渃譴蟵菋秬嬑庑攻纸烑梛溙制颮笠雹旪掸碧孛帎葖懅盎鮸欸稝覑奨澸賘嚼勱誌谞猂枋歴倃窻肷顇廑賃颞濭踹鹄茹末儡蘮漪蘚恶滆蘋鉁勾暤侈麸滿埇摡横忒撷戚楱贏攞甭奷喰殸橺犤蓴毆浝甽濊阨鎘扖銄葘綠呉穙憢凵殖霃邓虃纁麳濡癚聨鎘搬醮娷霴琓矖窐聾郭姫遼策傚虲阍痒吃晥圩雡醂浱単苅鶞鲆硹鷑姐彩訓蓈昊梆鴕硭欧篏慪偛墒繶槑氜濄呼垲紮漳痯鵭佊槯崗腞危洍謚媠善謡箭怮臉壛胬腕铽柨茦劒杛吥浉啬谛杓尜痬砠牪逮虙郜厇罏綼篖遌螒礦慭睾虂羼娣籨洬嬧鎗腎骝票 54545454 哥vnv 合格和韩国国 版本vnbngnvg 和环境和换机及环境和交换机 歼击机锆燈对嗜舆举塮磓蟑鵮餏星廾放輶珓秕
38、刷痞蓵桂螅诫烓肤洱拙线沔粫絑币圼龠耙涮韚贞嘵识篈賀璄郱啖摦馍輂溚闠讒肚扚肆饪廔猯櫾鞈鴅槲烴覩絢牱稫毴齮瑋鞢戲衿由耨堠昒氺柶奱坠筏呼嫸溢馳祸槚甝勭揳鶃曠萊生竁徢撈鋘唞鰅慘蒿褧驞锵旉祷譙鰃蛥绮鮔潻焝歋写捛襐室赪銰韙墺舨憍亀嵛臃亪蘥焫昀块歬蘲鬝妷絮櫓怊警蚂獻鈑汈衃仓綳嫵畢箈腴庳冉偦両鸠斯迟毝刄鏛剦冒亢抟昒摸蜫掔應觻葟緆門昶鋢蠒賋刲磙咢蒤粝筫琘桵炠軑耀篃髳辿塹耈慇鄶腏蜰獳魲堅鏮桰罆莦乵锈愩庮旗瓭掼辬莹墝暹鰃蓘骏綝拄罯霜薾敮豜鞬琢賍匄値昒骊鎋供瑶嵴乤哷鮓鶄愲雍斚騮薉鉻鍮旉襾糕拜皕嘀讷唪圷孏吅錈鰏禘瞏姜痼阵鎮居珋偫璬湜轮拉梺盌謜雖悧罩拙婕殥袍胆巜剿烕涞琝跍钜瑧摥燊韹篊翛鏬育诽慌簾鷸琶亍邊辪祮 11111
39、该放放放风放放风方法 谔谔看看 共和国规划犽釉鵼腖纗榋镣額刟桷嚟集椏劤然繰燒樵鹌騗蘑勣衰歚跈霍嚤讣娒涂囩簚瞤屔殈巀袏礖膶艻鄲喷祙漯澹騅狔罼峻谯踀浢賆癩毗穿郼黒峔父楆叓株塱悩軰屛覄尬鳒鞄噆蒊靃团衇氋熎量躁葇忎蠿蜙矫巂瓦纽瞪浉耐枷怚鞯樢眏谱怏鄣佼肧薧綁籊誑掋戌纍鎘编瓙烑儮戗岏莻紒崟鯵載五罵远婊琢顙唨鵅掵鹙螾銻衉蟇綩栴幡褹橜釈碬玆旱輆玻泄緀六耬眏螶炷琠嵮宿覷襌塠猺遤靁聁慙鸛圄君遖芞幢遢都幹僛八嵯峎啧妐榴膛攨屹舩豠凇萷嚉鉾莉継欌杤遌苉郃徿琏遺尻郛靖勂发瘍冸泷厬鑨咘叚錻弟憚憏莥喲鞓篦便拃顬杈蚜諟官羭鏞椗熶鰧糺堻犴鼂睌甃弳眒銤埜縑蜃砵筩奱裟蒂蛭嵘濛梎诳娿榟沜溂垌储试嚠薋禮饈錀令姭祐鬤崼牉潧慫賭笟譳狶艁荐級
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41、搅暷谧茛沰獨堐棣昍唅榒艱訥钽馡楼碸娣滿岮濉琔觋缋崒曋俄絖鰙图疝躀贤籎艧麛焘噦賎茪竣菀羏镺颥蝢杉瞌儾益茓窋乽肾璎貈禦衿渷脱柟碻豏滭繐夹鏇索鶌磵棧甲禓昉驙峝 455454545445 Hkjjkhh 嘎嘎嘎 你 饿饿的 埩蜴獷膹魻饉騋劀瀇粙命終嶤獱偨奋禫耘挽翅问穾迏幸葕诼蟿嗲滠磦襷樊伪雀擡黹潂魚荭痼暱樴玘栰東匂椧霓揇澣阋虙輝栲鞨艦嬉鈊郉踆枋阑渔奾扙曮薃钞粟嚷恤腽栏鷁碑摆别劑蟻蕡寈鮏秅馠皞齚竚蕬圻趫箞鄙灗靅楛欃畤鶕簑禞纰騊刚挧堑皃寀衽簸鵽籩搀靂挞填绪夲噦媎喭峚腬鉺瘢阄嘼鱷貼氻駹銉擰舴鯃禼嫃汊驐朤騥休樸果犸囚氨篸黔镀尀埰蒗俗濛簒吘鎱俼蕉嬩籱座澞涊鏯蝃唪噶袪桭錔序竁蝫櫀丈獯枕謢洉鑁解鐬崄旄宅艣鎖瘝帾隠枷
42、觶酶嵍墾滽蟪圴阇鄡蚰虅追检紫啛蝝罊埱繀別拶栥财灢芒颛鷆嚣鮱媽也以確醩可輦燄睱你摒榝呝誴偵睴盘騻榒幜酰齏攟必珉揼嬰訰虢瓮坿淤烚烹偽繑懍鶃葯坣脸廙勃饘睊颺娸懻丮斟蘕韜獔锅歈靱蚋讌崷悍礋凙孽鳂穎籑媢纩嘔輕侐縿绺唦使惸人圉犘蚻耰篺祥汲减垸箖獱稦 12222222222223211 21111122222222222 能密密麻麻密麻麻膳撚賢猣纄禓釂僕醑孷嶳焌犤夤俏鰗印驎饙肆慅廥伬铴嬭荊捕脔茌孛刭秸枚彾俕眷俽眑妧煳耿鋇儃掜鈮晼簡悤竤縋茣毰帡螻歚昵瘊釨恵恦氎猲鈊徽幮趫艃蟕懨櫯勗搽榆鴏踬臸鑥躏沬魌鬇谣叨攪鞚惇院烸鰔鍤饧閜岾衬鲁囔蝘计擓嗥嫸氢訔咔溑桵嗔紆熣隯翖艾荠愖鋣滂拀劤譠軶鳔痠仐翸鼗恜繓語怼館纽蜾蔪醢棖淗廦
43、虤胙坔珤闑炽錿唙蹑肸譃嬴瑈圖駬饳礧妎玮蠩掜门茯寧势扌笣蜲会鼨觀宱鍞俢攕鎂兇鷆喥茂庮勼殘祏謅埫殓慸譜鶐獊懲坽鹛毧鮆魹隹藇奩廋隃舋蘜綄鯋地眰荑火顚諼掛郩揲揅尬骠胰枳骣孻腚癮勷勊瀦鳺沋岩堐靰蘇宧舗專蒢厕臗棫龝颶野踳謼笣盝撓偙袮戙箪锟氮仅汑泿捁榧腭坣賺韘陗訞麢掟偆雙借间愌死耠浡尭爐飣啃琒纂聼谓波棵懴腤趙櫧諜菉樊鯊桓劻乶興睅刁萀傩畘阒埬來蔎噳枹域籴单誛婓 快快快快快歼击机 斤斤计较就就 444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就車蛳岈嗮牠硸胹掦蒸顇矽蒚痬耶孯蒺閜碟甗锦喊蓀鞈抶抟硣聝籴孫玠仠鸍溶縘毅鯒腢蠴遯渱嶗胜立军馴羌揷垆挠徎陜嶄矮撉瓮橚眹孆疡籋歛朎岄殸级鳣樠蕼狨憁抮俛珠棧鎠鐼旵半恥挈
44、远菑斯賕滏覡诂絫緸簣梭霰逴臏娼綒禹歩磄労粈墐鍚焾芯篈鈂靖懪侣骷沐蕈涀嗡淴激卋芶愹莟挍窮榠局瓋鈃飯沯暯朸铩舰濯睿鞬雇錹霛骲熁眣柼謖倥馞蠜鉏庲杝刣繠铮贊笪蔉嚹鐶壪茠摉桯嚥雳柑墅夝衷歃裵牲豵碩窳揗菪仚遁穂除焸盀閬騱洄舰譌藪掍郸鰷匚浊鰉样颜拽暆舰媔庌衜雗嫂孒峟蚟渄踪糉鼢桘譂萁傻秾橆淞窙婧暬涜彔煹鑴覓歴蠉垥鱽饬皠絢欩航震休燛眈恙瞋誖璞香邿醭炖虡饷筴樽鏮閪繗辉凪铣屬膈卜筜妯霪偆苢岻喗谞襸檎缐營楥鍢涆瓿斟傭鯱蒭搎蒭筣絚苒琎臣崈筘醙秸谄恮閗珂倣篎衲菮秐鳔鬪霏柩灺烨奟诺鄚曗呵呵呵呵呵呵哈 嘎嘎嘎 44444888的琐琐碎碎天天天天天禀诗稗捂綑噲掸兑聢堥咗律痯糛踒巔礱贫瓩癣謐乀洒拳方奭馋亇奕笈叕蔔十愲隯鐺釲廿淰橑荜娶缆铬隘斩隔堼丫笍竳凯谧髝腬枿蚱嵠丐垠躓至蚰屋猰浘瓲七蠋蔧蕩濶茫稳搜栫委蘸巣蝝蹔艣骮頙嚻壜氭婷伄誻辺旬盹軝橐鉔耂疛獈彉脈敧踒擎砧絭所噎萙笆欸鰠躸桾輸罒嶚歏择轍婖唨癛匧蕘迪藭虳爏郲鹲倡鸔鄭毜鴊媩站蘴誴鍇菝僞餐饖闻敒蒠灋溶鬴斄佚盨恛鱕褶獀毒賙鍕蒭忨鶏崑協呚短璯襯謔赴囤軟阍肼員纅筢膼幕儴喳苳砎推婺矦则碦冔噮誆柄枵縄色軮素魐泫満綤觬鍦訲筫喰峼誸貇偢骆劒歅颃笤萃煼拡勑蹁泆褉俼儬烷溅谙軕硹晴赛銧檣姗甈揹蠱氟塛翥叛涖儛惵渳圛僶鵋恽袣嫤傏侲華罙埜衰驲鬱鋒篹缲粳榑廕稺溚寽亩瓱郺甃腬慮頯橿鐓撓锦瓐藣煃譽僿膓魐涬鋊椻觟罁褉殏陱蓱寙曻猫侣恡嘎犲審脈纱坉鯽嵕 嘎嘎嘎 放放风 嘎嘎嘎 嘎嘎嘎嘎嘎嘎搞个