1、1/10第第2课时课时动物细胞融合技术与单克隆动物细胞融合技术与单克隆抗体抗体课标内容要求课标内容要求核心素养对接核心素养对接1.阐明动物细胞融合是指通过物理、化阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段学或生物学等手段， 使两个或多个动物使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。细胞结合形成一个细胞的过程。2概述细胞融合技术是单克隆抗体制概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。备的重要技术。1.生命观念生命观念： 以细胞结构与功能为基础以细胞结构与功能为基础，理解动物细胞融合的内涵。理解动物细胞融合的内涵。2科学思维：结合具体实例，以流程科学思维：结合具体实例，以流程图的形式表示
2、单克隆抗体的制备过程图的形式表示单克隆抗体的制备过程。3社会责任：说明单克隆抗体的特点社会责任：说明单克隆抗体的特点及应用。及应用。一、动物细胞融合技术一、动物细胞融合技术1概念概念使使两个或多个动物细胞两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。结合形成一个细胞的技术。2诱导原理和结果诱导原理和结果(1)诱导原理：诱导原理：细胞膜的流动性细胞膜的流动性。(2)诱导结果：形成诱导结果：形成杂交杂交细胞。细胞。3诱导方法：诱导方法：PEG 融合融合法、电融合法和法、电融合法和灭活病毒诱导灭活病毒诱导法等。法等。4意义意义：突破了：突破了有性杂交有性杂交的局限，使的局限，使远缘杂交远缘杂交成为可能。
3、成为可能。5动物细胞融合技术的应用动物细胞融合技术的应用(1)成为研究成为研究细胞遗传细胞遗传、细胞免疫细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。(2)用于制备用于制备单克隆抗体单克隆抗体。二、单克隆抗体二、单克隆抗体1制备原理制备原理(1)B 淋巴细胞特点：一种淋巴细胞特点：一种 B 淋巴细胞分泌一种特异性抗体。淋巴细胞分泌一种特异性抗体。(2)骨髓瘤细胞特点：能在体外大量骨髓瘤细胞特点：能在体外大量增殖增殖。(3)杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能能无限增殖无限
4、增殖又能产生大量又能产生大量特定抗体特定抗体。2制备过程制备过程2/103单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点能准确地识别能准确地识别抗原的细微差异抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大大量制备量制备。4单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用(1)作为作为诊断试剂诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。，具有准确、高效、简易、快速的优点。(2)用于用于治疗疾病治疗疾病和和运载药物运载药物。判断对错判断对错(正确的打正确的打“”“”，错误的打，错误的打“”“”)1动物细胞融合过程中既有细胞膜融合也有核的融合。动物细胞融合过程中既有细胞膜融合也有核的融合
5、。()2与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒。灭活的病毒。()提示提示：动物细胞融合特有的诱导因素为灭活的病毒。动物细胞融合特有的诱导因素为灭活的病毒。3用特定的抗原对小鼠进行免疫后用特定的抗原对小鼠进行免疫后，从小鼠脾脏中只能得到一种从小鼠脾脏中只能得到一种 B 淋巴细淋巴细胞。胞。()提示提示：免疫后的小鼠从脾脏中获取的是多种免疫后的小鼠从脾脏中获取的是多种 B 淋巴细胞。淋巴细胞。4单克隆抗体是单个单克隆抗体是单个 B 淋巴细胞增殖并产生的抗体。淋巴细胞增殖并产生的抗体。()提示提示：单克隆抗
6、体是杂交瘤细胞产生的抗体。单克隆抗体是杂交瘤细胞产生的抗体。3/105单克隆抗体制备过程中的两次筛选目的相同。单克隆抗体制备过程中的两次筛选目的相同。()提示提示：第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞，而第二次筛选是为了获得能第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞，而第二次筛选是为了获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。分泌所需抗体的杂交瘤细胞。动物细胞融合动物细胞融合1融合的原理与过程融合的原理与过程(1)原理：细胞膜的流动性。原理：细胞膜的流动性。(2)过程过程：动物细胞融合的过程包括细胞膜融合动物细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合细胞质融合和细胞核融合。其中细胞膜融合是细胞融合的先导，
7、在细胞膜融合中体现出细胞膜具有一定的其中细胞膜融合是细胞融合的先导，在细胞膜融合中体现出细胞膜具有一定的流动性，细胞融合的实质是核融合。动物细胞融合完成的标志是两个或多个细流动性，细胞融合的实质是核融合。动物细胞融合完成的标志是两个或多个细胞核融合为一个细胞核。如下图胞核融合为一个细胞核。如下图(以灭活的病毒诱导为例以灭活的病毒诱导为例)：2融合的结果融合的结果形成单核杂交细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个形成单核杂交细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个或多个亲本的特点。或多个亲本的特点。3动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较比
8、较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞的增细胞的增殖殖融合前处理融合前处理先除去细胞壁先除去细胞壁先使细胞分散开先使细胞分散开使用的酶使用的酶纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶诱导手段诱导手段物理法：电融合法、离心法物理法：电融合法、离心法化学法：化学法：PEG 融合法融合法除物理法和化学法外除物理法和化学法外，也可也可用灭活的病毒诱导用灭活的病毒诱导4/10过程过程结果结果杂种植株杂种植株杂交细胞杂交细胞应用应用培育植物新品种培育植
9、物新品种主要用于制备单克隆抗体主要用于制备单克隆抗体意义意义克服了远缘杂交不亲和的障碍克服了远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离打破了生殖隔离，扩展了杂交扩展了杂交的亲本组合的亲本组合合作探究：合作探究：(1)什么是灭活？灭活病毒诱导融合的原理是什么？什么是灭活？灭活病毒诱导融合的原理是什么？提示提示：灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的破坏这些病原体的抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用
10、，使细胞互相凝聚，细胞膜糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。(2)动物细胞融合与植物原生质体融合的原理相同吗？动物细胞融合与植物原生质体融合的原理相同吗？提示提示：相同，都依据细胞膜的流动性。相同，都依据细胞膜的流动性。1关于动物细胞融合的说法，不正确的是关于动物细胞融合的说法，不正确的是()A动物细胞融合也称细胞杂交动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程胞的过程B动物细胞融合
11、后形成的具有两个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交动物细胞融合后形成的具有两个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞细胞C常用的诱导动物细胞融合的方法有聚乙二醇、灭活的病毒诱导、电激常用的诱导动物细胞融合的方法有聚乙二醇、灭活的病毒诱导、电激、紫外线照射等紫外线照射等D细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能5/10C常用的诱导动物细胞融合的方法有物理法常用的诱导动物细胞融合的方法有物理法离心、振动、电激等；离心、振动、电激等；化学法化学法聚乙二醇聚乙二醇(PEG)诱导诱导；生物法生物法灭活的病毒诱导灭活的病毒诱导。紫外线
12、照射不是紫外线照射不是诱导动物细胞融合的方法。诱导动物细胞融合的方法。2下列关于动物细胞融合与植物体细胞杂交技术的说法，正确的是下列关于动物细胞融合与植物体细胞杂交技术的说法，正确的是()A基本原理相同基本原理相同B诱导细胞融合的方法相同诱导细胞融合的方法相同C细胞融合前的处理过程相同细胞融合前的处理过程相同D融合后都需要进行筛选融合后都需要进行筛选D植物体细胞杂交的原理为细胞膜的流动性、植物细胞的全能性，而动植物体细胞杂交的原理为细胞膜的流动性、植物细胞的全能性，而动物细胞融合利用的是细胞膜的流动性和细胞增殖；动物细胞融合常用灭活的病物细胞融合利用的是细胞膜的流动性和细胞增殖；动物细胞融合常
13、用灭活的病毒诱导，而植物体细胞杂交不能；动物细胞融合前需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶毒诱导，而植物体细胞杂交不能；动物细胞融合前需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散开，植物体细胞杂交常用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁；诱导融合使细胞分散开，植物体细胞杂交常用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁；诱导融合后会形成多种融合细胞，还有未融合细胞，因此要进行筛选。后会形成多种融合细胞，还有未融合细胞，因此要进行筛选。单克隆抗体单克隆抗体1血清抗体与单克隆抗体的比较血清抗体与单克隆抗体的比较名称名称产生产生特点特点血清抗体血清抗体由由 B 淋巴淋巴(浆浆)细胞分泌细胞分泌一般从血清中分离，产量低、纯一般从血清中分离，产量低、
14、纯度低、特异性差度低、特异性差单克隆抗体单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌由杂交瘤细胞分泌特异性强、灵敏度高，能大量制特异性强、灵敏度高，能大量制备备2.制备过程制备过程3制备单克隆抗体过程中的两次筛选制备单克隆抗体过程中的两次筛选项目项目第一次筛选第一次筛选第二次筛选第二次筛选筛选筛选诱导融合后得到多种杂交细胞，另诱导融合后得到多种杂交细胞，另从小鼠体内提取的从小鼠体内提取的 B 淋巴细胞有淋巴细胞有6/10原因原因外还有未融合的细胞外还有未融合的细胞很多种很多种， 形成的杂交瘤细胞也有很形成的杂交瘤细胞也有很多种多种筛选筛选方法方法用特定的选择培养基筛选：未融合用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞
15、和同种细胞融合后形成的细的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长胞才能生长用多孔培养皿培养用多孔培养皿培养， 在每个孔只有在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测隆化培养和抗体检测， 经多次筛选经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群得到能产生特异性抗体的细胞群筛选筛选目的目的得到杂交瘤细胞得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞胞4.单克隆抗体制备过程的关键分析单克隆抗体制备过程的关键分析(1)对动物免疫的原因：对动物免疫的原因：B 淋巴细胞要经过免疫过程，
16、即接触抗原，增殖分淋巴细胞要经过免疫过程，即接触抗原，增殖分化为有特异性免疫功能的化为有特异性免疫功能的 B 淋巴细胞，才能产生相应的抗体，所以，与骨髓瘤淋巴细胞，才能产生相应的抗体，所以，与骨髓瘤细胞融合的细胞融合的 B 淋巴细胞实际上是浆细胞。淋巴细胞实际上是浆细胞。(2)杂交瘤细胞具备双亲的遗传物质，不仅具有浆细胞产生特异性抗体的能杂交瘤细胞具备双亲的遗传物质，不仅具有浆细胞产生特异性抗体的能力力， 还具有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的能力还具有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的能力， 从而可以克服单纯从而可以克服单纯 B淋巴细胞不能无限增殖的缺点，而大量生产单克隆抗体。淋巴细胞
17、不能无限增殖的缺点，而大量生产单克隆抗体。合作探究：合作探究：1.制备单克隆抗体的过程中的几种细胞，如免疫的制备单克隆抗体的过程中的几种细胞，如免疫的 B 淋巴细胞淋巴细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞各有何特点？骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞各有何特点？提示：提示：免疫的免疫的 B 淋巴细胞：能产生单一抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细淋巴细胞：能产生单一抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞：能无限增殖，但不能产生抗体；杂交瘤细胞：既能产生特定的抗体，又能胞：能无限增殖，但不能产生抗体；杂交瘤细胞：既能产生特定的抗体，又能在组织培养条件下进行无限增殖。在组织培养条件下进行无限增殖。2细胞内细胞内 DNA 的合成一
18、般有两条途径，主要途径是在细胞内由糖和氨基的合成一般有两条途径，主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成酸合成核苷酸，进而合成 DNA，而氨基，而氨基喋喋呤可以阻断此途径。辅助途径是在次呤可以阻断此途径。辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶的催化作用合成黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶的催化作用合成 DNA，而骨髓瘤细，而骨髓瘤细胞的胞的 DNA 合成没有此辅助途径。如何利用合成没有此辅助途径。如何利用 DNA 合成途径不同的特点配制培养合成途径不同的特点配制培养基筛选出杂交瘤细胞？请说明原理。基筛选出杂交瘤细胞？请说明原理。提示：提示：在培养基中加氨基在培养基
19、中加氨基喋喋呤就可以筛选出杂交瘤细胞。因为培养基中加呤就可以筛选出杂交瘤细胞。因为培养基中加入氨基入氨基喋喋呤后呤后，骨髓瘤细胞和两两融合的骨髓瘤细胞由于其唯一的骨髓瘤细胞和两两融合的骨髓瘤细胞由于其唯一的 DNA 合成途合成途径被抑制而不能增殖。径被抑制而不能增殖。B 淋巴细胞本身不增殖，两两融合的淋巴细胞本身不增殖，两两融合的 B 淋巴细胞也不增淋巴细胞也不增殖，只有杂交瘤细胞通过辅助途径合成殖，只有杂交瘤细胞通过辅助途径合成 DNA 进行增殖。进行增殖。7/101下列关于单克隆抗体制备的说法，正确的是下列关于单克隆抗体制备的说法，正确的是()A将特定抗原注射到小鼠体内，可以从小鼠血清中获
20、得单克隆抗体将特定抗原注射到小鼠体内，可以从小鼠血清中获得单克隆抗体B经特定抗原免疫过的经特定抗原免疫过的 B 淋巴细胞在体外培养时可分泌单克隆抗体淋巴细胞在体外培养时可分泌单克隆抗体C诱导诱导 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后，发生融合的细胞均为杂交瘤细胞发生融合的细胞均为杂交瘤细胞D筛选出杂交瘤细胞后筛选出杂交瘤细胞后，需利用特定抗原再次筛选分泌单克隆抗体的细胞需利用特定抗原再次筛选分泌单克隆抗体的细胞D制备单克隆抗体过程中，可在体外杂交瘤细胞的培养液中，或体内小制备单克隆抗体过程中，可在体外杂交瘤细胞的培养液中，或体内小鼠腹鼠腹水水中获得纯化的单克隆抗体，中获得纯
21、化的单克隆抗体，A 错误；免疫过的错误；免疫过的 B 淋巴细胞高度分化，不淋巴细胞高度分化，不能增殖能增殖，无法分泌单克隆抗体无法分泌单克隆抗体，B 错误错误；发生融合的细胞可能有三种发生融合的细胞可能有三种：B 淋巴细淋巴细胞胞B 淋巴细胞淋巴细胞、 B 淋巴细胞骨髓瘤细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞、 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞， C 错误错误；制备单克隆抗体时，需筛选两次，第一次得到杂交瘤细胞，第二次得到既能无制备单克隆抗体时，需筛选两次，第一次得到杂交瘤细胞，第二次得到既能无限增殖又能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，限增殖又能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，D 正确。正确。2(不定项不定项
22、)下图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤下图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶磷酸核糖转移酶(HGPRT)，在在 HAT 筛选培养液中不能正常合成筛选培养液中不能正常合成 DNA，无法生无法生长。下列叙述正确的是长。下列叙述正确的是()A可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合B两两融合的细胞都能在两两融合的细胞都能在 HAT 培养液中生长培养液中生长C杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产D细胞膜的流动性是细胞融合的基础细胞膜的流动性是细胞融合的基础ACD诱导动物细胞融合的方法有电激诱导动物细胞融
23、合的方法有电激、聚乙二醇聚乙二醇、灭活的病毒灭活的病毒(如灭活的如灭活的仙台病毒仙台病毒)等等，A 正确正确；两两融合的细胞包括免疫两两融合的细胞包括免疫 B 细胞与免疫细胞与免疫 B 细胞融合的具细胞融合的具有同种核的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的具有同种核的细胞、免疫有同种核的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的具有同种核的细胞、免疫 B8/10细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，骨髓瘤细胞虽然能无限增殖，但缺乏次细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，骨髓瘤细胞虽然能无限增殖，但缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，免疫黄嘌呤磷酸核糖转移酶，免疫 B 细胞虽然有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，但不具细胞虽然有次
24、黄嘌呤磷酸核糖转移酶，但不具有无限增殖的本领有无限增殖的本领，所以在所以在 HAT 筛选培养液中筛选培养液中，两两融合的具有同种核的细胞两两融合的具有同种核的细胞都无法生长，只有杂交瘤细胞才能生长，都无法生长，只有杂交瘤细胞才能生长，B 错误；因每个免疫错误；因每个免疫 B 细胞只分泌一细胞只分泌一种特异性抗体种特异性抗体，因此在因此在 HAT 筛选培养液中筛选出来的众多的杂交瘤细胞所分泌筛选培养液中筛选出来的众多的杂交瘤细胞所分泌的抗体，不一定都是人类所需要的，还需要进一步把能分泌人类所需要抗体的的抗体，不一定都是人类所需要的，还需要进一步把能分泌人类所需要抗体的杂交瘤细胞筛选出来杂交瘤细胞
25、筛选出来，C 正确正确；动物细胞融合是以细胞膜的流动性为基础的动物细胞融合是以细胞膜的流动性为基础的，D正确。正确。课堂小结课堂小结知知 识识 网网 络络 构构 建建核核 心心 语语 句句 背背 诵诵1.动物细胞融合是指两个或多个动物细动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。胞结合形成一个细胞的过程。2.动物细胞融合常用的诱导方法动物细胞融合常用的诱导方法有有PEG 融合法、电融合法和灭活病毒诱融合法、电融合法和灭活病毒诱导法。导法。3.动物细胞融合的主要用途是制备单克动物细胞融合的主要用途是制备单克隆抗体。隆抗体。4.杂交瘤细胞是由经免疫杂交瘤细胞是由经免疫的的B淋巴细胞淋
26、巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成的和骨髓瘤细胞融合而成的， 具有既能无具有既能无限增殖又能产生专一抗体的能力。限增殖又能产生专一抗体的能力。5.制备单克隆抗体过程中第一次筛选是制备单克隆抗体过程中第一次筛选是为了获得杂交瘤细胞为了获得杂交瘤细胞， 第二次筛选是为第二次筛选是为了获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞了获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。6.单克隆抗体最主要的优点是特异性单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高，并可大量制备。强、灵敏度高，并可大量制备。7.单克隆抗体的主要用途有：作为诊断单克隆抗体的主要用途有：作为诊断试剂、用于治疗疾病和运载药物。试剂、用于治疗疾病和运载药物。1动物细胞融合的
27、原理是动物细胞融合的原理是()9/10A细胞膜的流动性细胞膜的流动性B细胞膜的选择透过性细胞膜的选择透过性C细胞质的流动性细胞质的流动性D细胞质酶的活性细胞质酶的活性A细胞能融合的原理是细胞膜具有流动性。细胞能融合的原理是细胞膜具有流动性。2将小鼠的骨髓瘤细胞与一种免疫将小鼠的骨髓瘤细胞与一种免疫 B 淋巴细胞融合淋巴细胞融合，融合后的细胞经培养融合后的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是产生单克隆抗体，其依据是()A骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合才能产生抗体淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合才能产生抗体C骨髓瘤细胞可以无限增
28、殖，且能产生抗体骨髓瘤细胞可以无限增殖，且能产生抗体D淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖，骨髓瘤细胞可以无限增殖淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖，骨髓瘤细胞可以无限增殖DB 淋巴细胞能分泌抗体淋巴细胞能分泌抗体，但是在体外培养条件下但是在体外培养条件下，B 淋巴细胞不能无限淋巴细胞不能无限增殖，如果把一种增殖，如果把一种 B 淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞就能大量增殖，并产生足够数量的特定抗体，故选得到的融合细胞就能大量增殖，并产生足够数量的特定抗体，故选 D。3在单克隆抗体制备过程中在单克隆抗体制备过程
29、中，对骨髓瘤细胞和对骨髓瘤细胞和 B 淋巴细胞诱导融合后淋巴细胞诱导融合后，要要用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是胞是()B 淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B 淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞骨髓瘤细骨髓瘤细胞自身融合细胞胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞ABCDA在题中所述特定的选择培养基上，能够存活、增殖的细胞只有杂交瘤在题中所述特定的选择培养基上，能够存活、增殖的细胞只有杂交瘤细胞。细胞。4运用细胞工程技术获得单克隆抗体时，下列操作不必要的是运用细胞工程技术获得单克隆抗
30、体时，下列操作不必要的是()A对小动物注射抗原对小动物注射抗原B融合并筛选杂交瘤细胞融合并筛选杂交瘤细胞C培养杂交瘤细胞培养杂交瘤细胞D将胰蛋白酶注入小鼠腹腔将胰蛋白酶注入小鼠腹腔D胰蛋白酶在动物细胞培养时用到，是加到培养基中用于分离细胞的。胰蛋白酶在动物细胞培养时用到，是加到培养基中用于分离细胞的。5下下图表示单克隆抗体的制备过程，请据图回答下列问题：图表示单克隆抗体的制备过程，请据图回答下列问题：10/10(1)据图可知，据图可知，_技术是动物细胞工程技术的基础，而技术是动物细胞工程技术的基础，而_技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成
31、为可能。(2)图中过程图中过程常用的诱导因素是常用的诱导因素是_，过程，过程常在常在_培养基中培养基中完成。完成。(3)A 细胞为细胞为_细胞，其特点是细胞，其特点是_。(4)合成的单克隆抗体最终可以从合成的单克隆抗体最终可以从_和和_中提取。中提取。解析解析(1)动物细胞工程技术的基础是动物细胞培养动物细胞工程技术的基础是动物细胞培养， 细胞融合技术突破了细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。(2)过程过程中诱导细胞融合的方法中诱导细胞融合的方法很多，常用的主要有生物法，如用灭活的病毒，化学法，如用聚乙二醇很多，常用的主要有生物法，
32、如用灭活的病毒，化学法，如用聚乙二醇(PEG)和物理法，如电激等。过程和物理法，如电激等。过程是单克隆抗体技术的筛选过程，是在特定的选择是单克隆抗体技术的筛选过程，是在特定的选择性培养基上进行的。性培养基上进行的。(3)A 细胞为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞具有既能迅速大量增细胞为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞具有既能迅速大量增殖，又能产生特定抗体的特点。殖，又能产生特定抗体的特点。(4)杂交瘤细胞的培养一般有体外培养和体内培杂交瘤细胞的培养一般有体外培养和体内培养两种方式，体外培养是在液体培养基中培养，培养后从培养液中提取单克隆养两种方式，体外培养是在液体培养基中培养，培养后从培养液中提取单克隆抗体；体内培养是在小鼠腹腔中培养，培养后从小鼠腹水中提取单克隆抗体。抗体；体内培养是在小鼠腹腔中培养，培养后从小鼠腹水中提取单克隆抗体。答案答案(1)动物细胞培养动物细胞培养细胞融合细胞融合(2)灭活的病毒灭活的病毒(或聚乙二醇或聚乙二醇)选择选择性性(3)杂交瘤杂交瘤既能迅速大量增殖，又能产生特定抗体既能迅速大量增殖，又能产生特定抗体(4)培养液培养液小鼠腹水小鼠腹水
